全 文 ：　　通过表 1 可以看出 ,灰毡毛忍冬不同个体间叶
中绿原酸量大致在 0115 %～3167 % ,而木犀草苷的
量大致在 01056 %～01386 % ,经过方差分析 ,结果
表明 ,50 株灰毡毛忍冬不同个体间绿原酸和木犀草
苷的量差异显著 ( P < 0105) 。
　　通过表 2 可以看出 ,灰毡毛忍冬不同个体间枝
中绿原酸的量大致在 0109 %～1157 % ,而木犀草苷
的量大致在 01003 %～01051 % ,经过方差分析 ,结
果表明 ,50 株灰毡毛忍冬不同个体间绿原酸和木犀
草苷的量差异显著 ( P < 0105) 。
3 　讨论
研究过程中发现 ,灰毡毛忍冬不同部位的叶中
绿原酸量差别较大 ,同时 ,新长出的嫩叶和老叶绿原
酸和木犀草苷的量差别也较大 ,为了进一步研究它
们的差异性 ,特将整株叶均分为 3 部分 ,分别为上
部、中部和下部 ,并根据叶的生长过程将叶分为嫩叶
和老叶。
绿原酸和木犀草苷是植物次生代谢产物 ,其量
受到自身遗传因素和生理、生化等因素的影响 ,也受
到植物生长发育进程及其所处的生境条件的控制。
在植物的生长过程中 ,其细胞内不断发生次生代谢
产物的合成、转化或降解 ,各部分所处的环境不同 ,
其量也会显著不同[4 ] 。本研究表明 ,灰毡毛忍冬叶
的绿原酸和木犀草苷量普遍比枝中要高 ,同时上部
叶的绿原酸量一般都高于中部和下部叶 ,嫩叶的绿
原酸和木犀草苷量明显高于老叶 ,这对生产实践具
有很大的指导意义。
统计分析表明 ,灰毡毛忍冬不同个体间叶和枝
中绿原酸和木犀草苷量差异显著 ,这对后续的品种
选育具有指导作用。
参考文献 :
[ 1 ] 　中国药典[ S]1一部1 20051
[ 2 ] 　梁生旺 ,崔永霞 ,王淑美 ,等 1 金银花的 HPLC 药效指纹图谱
研究[J ]1中草药 ,2006 ,37 (10) :1489214931
[ 3 ] 　张会敏 ,石俊英 1 近五年金银花研究进展 [J ]1 食品与药品 ,
2006 ,8 (12A) :112131
[4 ] 　张康健 ,董娟娥1 药用植物次生代谢[ M ]1西安 :西北大学出版
社 ,20011
HPLC测定不同产地茯苓中猪苓酸 C和去氢土莫酸
金晓勇1 ,2 ,3 ,贾晓斌1 ,2 ,3 3 ,陈 　彦1 ,2 ,王静静1 ,2 ,兰雪莲1 ,2
(11 江苏省中医药研究院 中药新型给药系统重点实验室 ,江苏 南京 　210028 ; 21 国家中医药管理局名方适宜型
重点研究室 ,江苏 南京 　210028 ; 31 江苏大学药学院 ,江苏 镇江 　212013)
摘 　要 :目的 　建立一种测定茯苓中猪苓酸 C 和去氢土莫酸的方法 ,并比较不同产地茯苓中猪苓酸 C 和去氢土莫
酸量的差异。方法 　应用 HPLC 法测定猪苓酸 C、去氢土莫酸的量 ,色谱柱为 Alltima2C18 (250 mm ×416 mm ,5
μm) ;流动相为乙腈2水2磷酸 (70 ∶29185 ∶0115) ;体积流量为 1 mL/ min ;检测波长为 244 nm ;进样量为 20μL ;柱温
为 30 ℃。结果　测得 8 个产地茯苓中猪苓酸 C、去氢土莫酸的量分别为 01188 6～01575 6、01113 7～01216 7 mg/ g ,
其中以浙江产茯苓药材中猪苓酸 C、去氢土莫酸量最高 ,四川次之 ,其他几个产地的量相对较低 ;猪苓酸 C 定量测
定的线性范围为 01179 2～21240 0μg ( r2 = 01999 9) ,平均加样回收率为 98188 % ,RSD 为 1177 % ;去氢土莫酸测定
的线性范围为 01137 2～11715 0 ( r2 = 1) ,平均加样回收率为 97176 % ,RSD 为 0162 %。结论 　所建立的色谱方法
可以简便、准确测定茯苓中猪苓酸 C、去氢土莫酸的量 ,重现性好 ;各产地茯苓中的猪苓酸 C、去氢土莫酸的量差别
较大 ,有必要建立猪苓酸 C、去氢土莫酸的定量控制方法。
关键词 :高效液相色谱法 ;茯苓 ;猪苓酸 C ;去氢土莫酸
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0721150203
　　茯苓是中国传统中药 ,历代本草均有记载 ,始载
于《神农本草经》,被列为上品 ,为多孔菌科真菌茯苓
Pori a cocos ( Schw1 ) Wolf 的干燥菌核 ,性平 ,味
甘、淡 ,归心、肺、脾、肾经 ,功能利水渗湿、健脾和胃、
宁心安神 ;主要含有三萜酸类如茯苓酸和多糖等有
效成分[ 1 ] 。猪苓酸 C、去氢土莫酸等茯苓素具有抗
肿瘤以及增强免疫功能的作用[2 ,3 ] 。《中国药典》
2005 年版测定项尚无其化学成分定量测定[4 ] 。本
·0511· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月
3 收稿日期 :2008210226　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :江苏省中医药领军人才项目 (2006)
作者简介 :金晓勇 (1982 —) ,男 ,江苏连云港人 ,江苏大学 2006 级硕士研究生 ,研究方向为中药物质基础与质量评价。
Tel :13814038712 　E2mail :jinzhulang @1631com3 通讯作者　贾晓斌　Tel/ Fax : (025) 85637809 　E2mail :jxiaobin2005 @hot mail1com
研究采用 HPL C 法测定 8 种不同产地茯苓中猪苓
酸 C、去氢土莫酸的量 ,为评价茯苓药材质量提供一
种准确可靠的分析方法。
1 　仪器与试药
美国 Waters 公司高效液相色谱仪 ( Waters 600
型泵 ,Waters 2996 自外检测器) , Empower 数据处
理系统 ; KQ5200 型超声波清洗器 (昆山市超声仪器
有限公司) ; M ET TL ER TOL EDO 分析电子天平
(瑞士 M ET TL ER TOL EDO 公司 ,十万分之一) 。
乙腈、磷酸 ( TEDIA 公司 ,色谱纯) ,甲醇、乙醇 (南京
化学试剂有限公司 ,分析纯) ,水为超纯水 ;猪苓酸
C、去氢土莫酸对照品为实验室自制 (质量分数均高
于 98 %) ;云南、安徽、浙江、湖南、湖北、河南、河北、
四川产茯苓药材均购于安徽亳州华申药业有限公司
( 产 品 批 号 : 080325、080406、080327、080401、
080425、080419、080412、080420) ,药材经南京中医
药大学吴德康教授鉴定。
2 　方法与结果
211 　色谱条件 :Alltima2C18色谱柱 ( (250 mm ×416
mm ,5μm) ;流动相为乙腈2水2磷酸 (70 ∶29165 ∶
0135) ;体积流量为 110 mL/ min ,检测波长为 244
nm ,柱温为 30 ℃,进样量为 20μL 。高效液相色谱
图见图 1。
t/ min
12猪苓酸 C 　22去氢土莫酸
12polyporenic acid C 　22dehydrotumulosic acid
图 1 　混合对照品( A)及茯苓药材( B)的 HPLC图谱
Fig11 　HPLC Chromatograms of mixed reference
substance ( A) and P1 cocos ( B)
212 　对照品溶液的制备 :精密称定猪苓酸 C 4148
mg ,去氢土莫酸 3143 mg 对照品置于不同的 10 mL
量瓶中 ,加乙腈定容至刻度 ,得 01448 mg/ mL 猪苓
酸 C ,01343 mg/ mL 去氢土莫酸储备液。精密移取
猪苓酸 C、去氢土莫酸储备液各 1 mL 至同一 10 mL
量瓶中摇匀 ,加乙腈定容至刻度 ,摇匀 ,即得 4418、
3413μg/ mL 的混合对照溶液。
213 　供试品溶液的制备 :称取样品 (过 60 目筛) 014
g ,精密称定 ,加入甲醇25 %乙酸溶液 20 mL ,精密称
定 ,超声提取 30 min ,称质量后用提取液补足所失
质量 ,滤过 ,减压蒸干 ,残渣用乙腈溶解 ,定容于 5
mL 量瓶中 ,用 0145μm 微孔滤膜滤过 ,作为供试品
溶液。
214 　线性关系考察 :精密吸取混合对照品溶液 4、
5、10、20、30、40、50μL 依次进样 ,按 211 项下色谱
条件测定峰面积 ,以峰面积积分值为纵坐标 ,对照品
进样量为横坐标 ,绘制回归曲线。猪苓酸 C : Y =
764 583 X + 6 330 , r2 = 01999 9 ,线性范围01179 2～
21240 0μg ;去氢土莫酸 : Y = 1 E + 06 X + 1 80613 ,
r
2
= 1 ,线性范围 01137 2～11715 0μg。
215 　精密度试验 :精密吸取混合对照品 20μL ,连
续进样 5 次 ,按 211 项下色谱条件测定 ,各对照品峰
面积 5 次积分值的 RSD 分别为猪苓酸 C 0147 % ,去
氢土莫酸 0155 %。
216 　重现性试验 :取同一茯苓药材粉末 (过 60 目
筛) ,按 213 项下操作制备供试品溶液 6 份 ,按 211
项下色谱条件测定 ,计算猪苓酸 C 质量分数的 RSD
为 213 % ,去氢土莫酸质量分数的 RSD 为 214 %。
217 　稳定性试验 :取同一份供试品溶液 ,室温放置 ,
分别在 0、1、2、4、8、12、24 h 进样 ,按 211 项下色谱条
件测定 ,以峰面积计算 ,猪苓酸 C RSD 为 215 % ,去氢
土莫酸 RSD 为 218 % ,表明供试品在 24 h 内稳定。
218 　加样回收率试验 :称取同一测定的样品 9 份 ,
每份约 012 g ,精密称定后 ,依次加入低、中、高 3 种
质量浓度猪苓酸 C 储备液和去氢土莫酸储备液 ,按
213 项下操作制备供试品溶液 ,准确吸取供试品 20
μL ,进样 ,按 211 项下色谱条件测定 ,计算得猪苓酸
C、去氢土 莫 酸 平 均 回 收 率 分 别为 98188 %、
97176 % ,RSD 分别为 1177 %、0162 %。
219 　样品测定 :称取不同产地的茯苓药材约 014 g ,
精密称定按 213 项下操作制备供试品溶液 ,准确吸
取 20μL ,进样 ,按 211 项下测定 ,结果见表 1。
3 　讨论
311 　本实验建立了茯苓中抗肿瘤及增强免疫功能
有效成分猪苓酸 C、去氢土莫酸的高效液相色谱测
定方法 ,可使其获得很好的分离 ,且具准确、重现性
好等特点。茯苓的产地比较广 ,文献记载主要分布
于云南、安徽、浙江、湖南、湖北、河南、河北、四川等
地 ,其他各省也有少量分布。本实验结果表明 ,几大
主要产地的茯苓药材中猪苓酸 C、去氢土莫酸定量
差异较大 ,其中以浙江产的茯苓的量最高 ,四川的次
·1511·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月
表 1 　不同产地药材中的猪苓酸 C、去氢土莫酸( n = 3)
Table 1 　Polyporenic acid C and dehydrotumulosic acid
in P1 cocos from different habitats ( n = 3)
产地
猪苓酸 C
/ (mg ·g - 1)
RSD
/ %
去氢土莫酸
/ (mg ·g - 1)
RSD
/ %
云南 01191 3 ±01 001 5 01 81 01 096 5 ±01000 7 0173
安徽 01225 8 ±01 001 2 01 55 01 114 0 ±01000 8 0176
四川 01319 8 ±01 003 5 11 09 01 163 2 ±01001 3 0177
浙江 01575 6 ±01 003 4 01 60 01 216 7 ±01001 7 0177
河南 01200 3 ±01 005 6 21 84 01 114 5 ±01000 9 0185
河北 01188 6 ±01 004 5 21 36 01 113 7 ±01001 7 1150
湖南 01283 3 ±01 003 8 11 35 01 177 7 ±01001 8 1102
湖北 01263 7 ±01 002 1 01 78 01 145 8 ±01001 0 0165
之 ,其他几个产地的量相对较低。
312 　本实验比较了甲醇2含酸水、乙腈2含酸水流动
相系统的洗脱情况 ,结果表明乙腈2含酸水流动相系
统明显优于甲醇2含酸水系统 ,因甲醇2含酸水系统不
能实现较好的分离 ,故选择乙腈2含酸水流动相系统。
以乙腈2含酸水为流动相系统 ,比较了流动相乙腈2
015 %磷酸水 (70 ∶30 ,75 ∶25 ,80 ∶20)及梯度洗脱的
方法 ,结果表明流动相为 70 ∶30 洗脱效果较好 ,故本
实验流动相采取乙腈2015 %磷酸水 70 ∶30。
313 　在样品提取过程中 ,比较了 5 种不同提取溶媒 (甲醇、甲醇25 %乙酸、乙醇、乙醇25 %乙酸、5 %乙酸2水) ,结果表明甲醇25 %乙酸提取效率高于其他 4 种溶媒 ;以甲醇25 %乙酸为提取溶媒 ,比较了两种不同的提取方法 ,热回流提取法、超声提取法 ,结果超声提取法提取率明显高于热回流提取方法 ;采用超声提取法 ,分别考察了加入 10、20、30 mL 甲醇25 %乙酸的提取效率。结果表明 20、30 mL 提取率无明显差异 ,故提取溶剂量选择 20 mL ;采用超声提取法 ,加入 20 mL 甲醇25 %乙酸 ,又分别考察了提取 20、30、40 min 的提取效率 ,结果表明提取 30、40 min 提取率无明显差别 ,故提取时间选择 30 min。314 　本实验测定了 8 省区主要产地的茯苓中猪苓酸 C 和去氢土莫酸的量 ,对进一步确定茯苓最佳产地 ,扩大药用资源具有一定的参考意义。参考文献 :[1 ] 　《中华本草》编委会1 中华本草 [ M]1上海 :上海科学技术出版社 ,19981[ 2 ] 　金　琦 ,曹　静 ,王淑华1 大剂量茯苓的药理作用及临床应用概况[J ]1浙江中医杂志 ,2003 ,38 (9) :41024111[ 3 ] 　许　津 ,吕　丁 ,钟启平 ,等 1 茯苓素对小鼠 L1210 细胞的抑制作用[J ]1中国医学科学院学报 ,1988 ,10 (1) :452491[ 4 ] 　中国药典[ S]1一部1 2005
HPLC法测定青天葵中鼠李柠檬素和鼠李秦素
周燕园 ,甄汉深 ,袁叶飞 ,钟振国 ,梁臣艳 3
(广西中医学院 ,广西 南宁 　530001)
摘 　要 :目的 　建立青天葵中鼠李柠檬素与鼠李秦素的定量测定方法。方法 　运用 HPLC 法测定 ,色谱柱为 Inert2
sil ODS23 C18 (250 mm ×416 mm ,5μm) ,流动相为甲醇2014 %磷酸水溶液 (63 ∶37) ,体积流量 :110 mL/ min ,检测波
长 :368 nm ,柱温 :40 ℃。结果 　鼠李柠檬素在 012～017μg 线性关系良好 ( r = 01999 9) ,平均回收率为 100104 % ,
RSD 为 1135 %( n = 6) 。鼠李秦素在 218～918μg 线性关系良好 ( r = 01999 9) ,平均回收率为 100126 % , RSD 为
0178 %( n = 6) 。结论 　本方法简便、快速、准确 ,可作为青天葵药材的质量控制方法。
关键词 :青天葵 ;鼠李柠檬素 ;鼠李秦素 ;定量测定 ;高效液相色谱法
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0721152203
　　青天葵来源于兰科植物毛唇芋兰 N ervi l i a
f oa di i ( Hance) Schlt r1 [ 1 ] ,为广西特产药材 ,具有
清肺止咳、健脾消积、镇痛止痛、散瘀消肿、清热解毒
之功效 ,主治肺痨、咳嗽咳血、中毒、跌打损伤、小儿
疳积、精神病、口腔炎、急性咽喉炎等症。近年来还
用含有青天葵复方制剂治疗鼻咽癌以缓解症状[2 ] ,
在目前对青天葵化学成分的研究中[ 3～5 ] ,已分离鉴
定出有三萜、氨基酸、甾体、黄酮类化学成分 ,并显示
出有皂苷、有机酸类成分的反应。其中鼠李柠檬素
与鼠李秦素是 2 种重要黄酮类成分 ,经本课题小组
·2511· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月
3 收稿日期 :2008210220　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家自然科学基金地区联合项目 (30160095) ;国家人事部留学回国人员资助项目 (人发[ 2002 ]99 号) ;广西“新世纪十百千人
才工程”资助项目 (2001209) ;广西高校人才小高地建设创新团队资助计划
作者简介 :周燕园 (1978 —) ,女 (回族) ,湖南祁阳人 ,讲师 ,硕士 ,主要从事中药、药学方面的教学与科研工作 ,研究方向为天然药物、中药
及民族药的质量与成分分析研究。Tel :13217811600 或 (0771) 2219867 (办) 　E2mail :zhou_yanyuan @1631com