全 文 ：通经草的化学成分研究
赵迎春1 ,于 鹏2 ,赵云丽3 ,栗 晖3 ,于治国3*
( 11 大连市药品检验所,辽宁 大连 116021; 21 天津药物研究院, 天津 300193;
31 沈阳药科大学药学院, 辽宁 沈阳 110016)
摘 要:目的 研究通经草 A leur itop ter is argentea 的化学成分。方法 采用硅胶和 Sephadex LH-20 柱色谱等方
法进行分离纯化,通过理化性质和光谱数据确定化合物的结构。结果 分离得到 8 个化合物, 分别鉴定为B-谷甾
醇( Ñ )、鼠李柠檬素( Ò )、对映-3-羟基-8( 17) , 13E-半日花二烯-15-羧酸( Ó )、鼠尾草素( Ô )、3, 5, 4c-三羟基-7, 8-二
甲氧基黄酮( Õ )、槲皮素( Ö )、滨蓟黄素( ×)、槲皮素-3-O-B-D-吡喃半乳糖苷 ( Ø )。结论 化合物 Ñ 、Ò 、Õ、Ö 和
Ø 均为首次从该植物中分离得到。
关键词:通经草; 鼠李柠檬素;鼠尾草素; 滨蓟黄素
中图分类号: R2841 1 文献标识码: A 文章编号: 0253-2670( 2009) 07-1043-03
通经草为中国蕨科植物银粉背蕨 A leur i top-
ter is ar gentea ( Gml1 ) Fe 的全株, 广泛分布于我
国各个省份。其性平, 味淡, 苦, 具有活血调经, 止
咳,利湿, 解毒消肿等功效,在民间常用于月经不调、
肺结核咯血等症的治疗[ 1] , 临床应用历史悠久,疗效
可靠。为了阐明通经草的药效物质基础, 进一步研
究开发新药资源,本实验对其化学成分进行了系统
研究,采用硅胶和 Sephadex LH-20等色谱方法从
中分离得到 8个化合物, 结合理化性质、色谱数据及
化学反应等确定各化合物的结构,分别为 B-谷甾醇
( Ñ )、鼠李柠檬素( Ò )、对映-3-羟基-8( 17) , 13E-半
日花二烯-15-羧酸( Ó )、鼠尾草素( Ô )、3, 5, 4c-三羟
基-7, 8-二甲氧基黄酮 ( Õ )、槲皮素 ( Ö )、滨蓟黄素
( ×)、槲皮素-3-O-B-D-吡喃半乳糖苷( Ø )。其中化
合物 Ñ、Ò 、Õ、Ö和 Ø为首次从该植物中分离得到。
1 材料与仪器
通经草购自河北省安国药材市场, 经沈阳药科
大学孙启时教授鉴定为中国蕨科植物银粉背蕨 A1
ar gentea ( Gml1 ) Fe 的全株。
Fluke 51 Ò 型显微熔点测定仪; H itachi 200 )
20型紫外分光光度计; Bruker ARX ) 300型核磁共
振仪( T MS 为内标, DM SO- d6 为溶剂) ; Shimadzu
LC-MS 2010 EV 型质谱仪; 柱色谱用硅胶( 100 ~
140 目, 200~ 300 目)及薄层色谱用硅胶 G 均为青
岛海洋化工厂产品; Sephadex LH-20( Pharmacia)。
所用化学试剂均为国产分析纯。
2 提取与分离
取通经草干品 ( 4 kg ) , 切段, 加入 10 倍量的
75%乙醇回流 2 h,提取 2次,滤过,合并滤液,减压
浓缩。浸膏加水分散后依次用石油醚、氯仿、醋酸乙
酯和正丁醇萃取。取氯仿萃取液, 减压回收溶剂得
粗提物约 90 g, 经硅胶柱色谱分离,石油醚-醋酸乙
酯系统梯度洗脱。石油醚-醋酸乙酯( 10B 1)部分得
到化合物Ñ。石油醚-醋酸乙酯( 5B 1)洗脱, 合并相
同流份,得到 1~ 3号合并液。1、3 号经过甲醇重结
晶分别得到化合物 Ò 和 Ó ; 2号再经硅胶柱色谱分
离,用氯仿-甲醇洗脱, 分别将( 25 B 1)和( 10 B 1)部
分的洗脱液经过 Sephadex LH-20纯化得到化合物
Ô 和Õ。石油醚-醋酸乙酯( 4 B 1)部分的洗脱液采
用甲醇重结晶得到化合物 Ö ,然后将其母液经硅胶
柱色谱分离,收集氯仿-甲醇( 10 B 1)洗脱得到的流
份反复通过 Sephadex LH-20 纯化, 最终得到化合
物×。醋酸乙酯部分得到化合物 Ø。
3 结构鉴定
化合物 Ñ :白色针晶, mp 140~ 142 e , 与 B-谷
甾醇对照品混合测定熔点温度不下降。Lieber-
mann-Burchard反应阳性, 与 B-谷甾醇对照品多系
统共薄层色谱展开 Rf值相同。
化合物 Ò : 鲜黄色针晶 ( 甲醇 ) , mp 222~
223 e 。盐酸-镁粉反应阳性; FeCl3 反应阳性。UV
K
MeOH
max nm: 256, 365;
1
H-NMR( 300 MHz, DM SO-d6 )
D: 121 47( 1H , s, OH-5) , 101 12( 1H , s, OH-4c) , 91 54
( 1H , s, OH-3) , 81 08( 2H , d, J = 81 9 H z, H-2c, 6c) ,
61 93( 2H , d, J = 81 9 H z, H-3c, 5c) , 61 74( 1H , d, J=
#1043#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月
* 收稿日期: 2009- 01-30 作者简介:赵迎春( 1981 ) ) ,女,内蒙古通辽人,硕士研究生,药师,主要从事药品检验及质量控制方法的研究。
T el : (0411) 84255303 E-mail: f eihu amail@ tom1 com
* 通讯作者 于治国 T el: ( 024) 23986295 E- mail: yuzhiguocnn@ hotm ail. com
21 1 Hz, H-8) , 61 34( 1H , d, J= 21 1 Hz, H-6) , 31 85
( 1H , s, OCH 3-7) ;
13
C-NMR( 75 MHz, DM SO-d6 ) D:
1761 1( C-4) , 1651 0( C-7) , 1601 5( C-9) , 1591 4( C-5) ,
1561 2( C-4c) , 1471 3 ( C-2) , 1361 1 ( C-3) , 1291 7 ( C-
2c, 6c) , 1211 7 ( C-1c) , 1151 5 ( C-3c, 5c) , 1041 1 ( C-
10) , 971 6( C-6) , 921 1( C-8) , 561 1( OCH 3-7)。以上
数据与相关文献报道[ 2] 一致, 从而鉴定该化合物为
山柰素-7-甲醚,即鼠李柠檬素。
化合物 Ó : 无色柱状结晶 (甲醇 ) , mp 164~
166 e 。难溶于石油醚, 易溶于氯仿、甲醇。UV
KM eOHmax nm: 215; APCI-MS m/ z : 319[ M ) H] ) , 639
[ 2M ) H ] ) ; 1H-NMR ( 300 MH z, CDCl3 ) D: 01 63
( 3H , s, CH 3-10) , 01 67, 01 97(各 3H , s, 2CH 3-4) ,
21 07 ( 3H , s, CH 3-13) , 31 03 ( 1H , m, H-3) , 41 35
( 1H , dd, OH-3) , 41 50, 41 84 (各 1H , s, 2H-17 ) ,
51 54 ( 1H , s, H-14) , 111 86 ( 1H , s, COOH-15 ) ;
1 3
C-NMR( 75 MHz, CDCl3 ) D: 1711 2 ( C-15) , 1631 9
( C-13) , 1471 6( C-8) , 1141 7( C-14) , 1061 9( C-17) ,
781 8( C-3) , 551 8 ( C-9) , 541 5 ( C-5) , 391 9 ( C-12) ,
391 4( C-4) , 391 1 ( C-10) , 381 1 ( C-7) , 371 0 ( C-1) ,
281 3( C-18) , 271 9 ( C-2) , 241 0( C-6) , 211 6( C-11) ,
191 2( C-16) , 151 4( C-19) , 141 5( C-20)。根据以上数
据并参照文献报道[ 3] ,鉴定该化合物为对映-3-羟基-
8( 17) , 13E-半日花二烯-15-羧酸。
化合物Ô : 无色针晶(甲醇) , mp 188~ 189 e 。
不溶于石油醚, 易溶于氯仿, 微溶于甲醇。EI-MS
m/ z : 328 [ M ]
+
, 313 [ M ) CH 3 ] + ; 1H-NMR ( 300
MHz, DM SO-d6 ) D: 121 90( 1H , s, OH-5) , 81 01( 2H ,
d, J = 81 2 Hz, H-2c, 6c) , 71 14( 1H , d, J= 81 2 Hz,
H-3c, 5c) , 61 99 ( 1H , s, H-8) , 61 97 ( 1H , s, H-3) ,
31 93( 3H , s, OCH 3-7) , 31 87( 3H , s, OCH 3-6) , 31 74
( 3H , s, OCH 3-4c) ; 13C-NMR ( 75 MHz, DM SO-d6 )
D: 1821 4( C-4) , 1631 7( C-2) , 1621 5( C-4c) , 1581 8( C-
7) , 1521 8( C-5) , 1521 1( C-9) , 1321 0( C-6) , 1281 5( C-
2c, 6c) , 1221 8 ( C-1c) , 1141 7 ( C-3c, 5c) , 1051 2 ( C-
10) , 1031 5( C-3) , 911 8( C-8) , 601 1( OCH 3-6) , 561 6
( OCH 3-7) , 551 7( OCH3-4c)。以上数据与相关文献
报道[ 4] 一致,从而鉴定该化合物为鼠尾草素。
化合物 Õ : 淡黄色簇晶 ( 甲醇) , mp 244~
246 e 。盐酸-镁粉反应阳性; FeCl3 反应阳性。UV
KM eOHmax nm: 224, 272, 329, 380; 1H-NMR( 300 MHz,
DM SO-d6 ) D: 121 31 ( 1H , s, OH-5) , 101 18( 1H , s,
OH-4c) , 91 55 ( 1H , s, OH-3) , 81 08( 2H , d, J = 91 0
Hz, H-2c, 6c) , 61 96( 2H , d, J= 91 0 Hz, H-3c, 5c) ,
61 59 ( 1H , s, H-6) , 31 92 ( 3H , s, OCH3-7 ) , 31 82
( 3H , s, OCH 3-8) ; 13 C-NMR( 75 MHz, DMSO-d6 )D:
1761 4( C-4) , 1591 5( C-4c) , 1571 9 ( C-7) , 1561 0( C-
5) , 1471 8( C-9) , 1471 3( C-2) , 1351 8( C-3) , 1291 6( C-
2c, 6c) , 1281 4( C-8) , 1211 8( C-1c) , 1151 7( C-3c, 5c) ,
1031 5 ( C-10) , 951 4 ( C-6 ) , 611 1 ( OCH 3-8 ) , 561 6
( OCH 3-7)。根据以上数据并参照文献报道[ 5, 6] , 推
断该化合物为 3, 5, 4c-三羟基-7, 8-二甲氧基黄酮。
化合物 Ö : 黄色粉末(甲醇) , mp > 300 e 。盐
酸-镁粉 反 应 阳 性。 UV KM eOHmax nm: 256, 372;
1
H-NMR ( 300 MHz, DMSO-d6 ) D: 121 50 ( 1H , s,
OH-5) , 101 80 ( 1H , s, OH-7) , 91 62 ( 1H , s, OH ) ,
91 39( 1H , s, OH ) , 91 33( 1H , s, OH ) , 71 68( 1H , d,
J= 21 0 Hz, H-2c) , 71 54( 1H , d, J= 81 5 Hz, H-6c) ,
61 84( 1H , d, J = 81 5 Hz, H-5c) , 61 40 ( 1H , d, J=
21 0 Hz, H-8) , 61 20 ( 1H , d, J= 21 0 Hz, H-6) ;
13
C-NMR ( 75 MHz, DM SO-d6 ) D: 1751 9 ( C-4 ) ,
1641 0( C-7) , 1601 8 ( C-9) , 1561 2 ( C-5) , 1471 8 ( C-
4c) , 1461 9( C-2) , 1451 2 ( C-3c) , 1351 8( C-3) , 1221 0
( C-1c) , 1201 1 ( C-6c) , 1151 7 ( C-5c) , 1151 1 ( C-2c) ,
1031 1( C-10) , 981 3( C-6) , 931 5( C-8)。以上数据与
相关文献报道[ 7]一致,从而鉴定该化合物为槲皮素。
化合物 ×: 淡黄色针晶 ( 甲醇 ) , mp 264~
266 e 。UV KMeOHmax nm: 220, 276, 334; EI-M S m/ z :
314[ M ] + , 299 [ M ) CH 3 ] + ; 1H-NMR ( 300 MHz,
DM SO-d6 ) D: 121 94( 1H , s, OH-5) , 101 40 ( 1H , s,
OH-4c) , 71 98( 2H , d, J= 81 7 Hz, H-2c, 6c) , 61 94
( 1H , d, J = 81 7 Hz, H-3c, 5c) , 61 95( 1H , s, H-8) ,
61 87 ( 1H , s, H-3) , 31 93 ( 3H , s, OCH3-7 ) , 31 73
( 3H , s, OCH 3-6) ; 13 C-NMR( 75 MHz, DMSO-d6 )D:
1821 3( C-4) , 1641 1( C-2) , 1611 4 ( C-4c) , 1581 7( C-
7) , 1521 7( C-5) , 1521 1( C-9) , 1321 0( C-6) , 1281 6( C-
2c, 6c) , 1211 2 ( C-1c) , 1161 0 ( C-3c, 5c) , 1051 1 ( C-
10) , 1021 7( C-3) , 911 7( C-8) , 601 1( OCH 3-6) , 561 5
( OCH 3-7)。以上1H-NMR和13C-NMR数据与相关
文献报道[ 8]一致,从而鉴定该化合物为滨蓟黄素。
化合物 Ø : 黄色粉末(甲醇) , mp 227~ 229 e 。
盐酸-镁粉反应呈阳性; 与 A lCl3 反应呈黄绿色荧
光。APCI-MS m/ z : 463[ M ) H] ) , 301[ M ) Gal )
H] ) ; U V KMeOHmax nm: 205, 257, 297, 360; 1H-NMR
( 300 MHz, DM SO-d6 ) D: 121 64 ( 1H , s, OH-5) ,
101 86( 1H , s, OH-7) , 91 73( 1H , s, OH ) , 91 16( 1H ,
s, OH ) , 71 67( 1H , dd, J = 71 5, 21 2 Hz, H-6c) , 71 52
( 1H , d, J= 21 2 H z, H-2c) , 61 81 ( 1H , d, J = 71 5
#1044# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月
Hz, H-5c) , 61 40 ( 1H , d, J= 21 0 Hz, H-6 ) , 61 20
( 1H , d, J= 21 0 Hz, H-8) , 51 38( 1H , d, J= 71 5 Hz,
H-1d) ; 13C-NMR( 75 MHz, DM SO-d6 ) D: 1771 6( C-
4) , 1641 2( C-7) , 1611 3( C-5) , 1561 3( C-2) , 1561 3( C-
9) , 1481 5 ( C-4c) , 1441 9( C-3c) , 1331 5 ( C-3) , 1221 1
( C-6c) , 1211 2 ( C-1c) , 1161 0 ( C-5c) , 1151 3 ( C-2c) ,
1041 0( C-10) , 1011 8( C-1d) , 981 7( C-6) , 931 6( C-8) ,
751 9( C-5d) , 731 3( C-3d) , 711 3 ( C-2d) , 681 0( C-4d) ,
601 2( C-6d)。以上数据与相关文献报道[ 9] 一致, 从
而确定该化合物为槲皮素-3-O-B-D-吡喃半乳糖苷。
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紫杉醇完全抗原的合成鉴定及免疫原性分析
马丽玲1 ,晁 志2* , 田中 宏幸3
( 11 广州医学院护理学院,广东 广州 510450; 21 南方医科大学中医药学院,广东 广州 510515;
31 九州大学大学院药学研究院,日本 福冈 812-8582)
摘 要:目的 制备红豆杉属植物中抗癌成分紫杉醇( paclitax el, TAX)的人工抗原及抗血清, 为获取分泌抗紫杉醇
抗体的单克隆细胞系及分离单链抗体基因、进而以之提高植物中紫杉醇的量,及建立快速检测 TAX 的酶联免疫吸
附测定( EL ISA( )法提供技术基础。方法 将7-木糖基紫杉醇( 7- xylotax ol, 7- xy-l T AX)经 NaIO4 氧化打开糖环, 与
载体蛋白牛血清白蛋白( BSA)反应偶联,制得半抗原-载体蛋白复合物后,用基质辅助激光解吸飞行时间质谱测定
其中结合的半抗原数目;以此抗原免疫 BALB/ c小鼠, 制备抗血清,并通过 ELISA法检测其抗体效价和特异性。结
果 合成的人工抗原 TAX-BSA 中 TAX 与 BSA 的结合比约为 4~ 5 B 1; 免疫小鼠到特异针对 TAX 的抗血清,
TAX抗体的效价为 1B 3 200。结论 成功地合成了 TAX的人工抗原, 且该抗原有较好的免疫原性。
关键词:紫杉醇; 半抗原-载体蛋白复合物;免疫原性; 基质辅助激光解吸飞行时间质谱
中图分类号: R2841 1 文献标识码: A 文章编号: 0253-2670( 2009) 08-1045-04
紫杉醇( paclitaxel, Taxol oR ,以下简称 TAX)是
一种结构复杂的二萜生物碱, 1971年从短叶红豆杉
Taxus br evi f ol ia Nutt1 的树皮中提取而得[ 1] , 可
以通过独特的微管聚合促进作用而抑制癌细胞的生
长[ 2] ,相继被证明对卵巢癌、子宫癌、乳腺癌等 10余
种癌症具有很好的疗效, 1992年经美国 FDA 批准
上市,是目前治疗乳腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌的
临床一线用药, 需要量逐年递增[ 3, 4]。
紫杉醇主要来源于红豆杉属植物, 但其量甚微,
即使是含量最高的树皮部位, 亦仅为 01 01%左右。
据计算, 处理一个卵巢癌患者需要 6 棵树龄 60 ~
100年的红豆杉, 每年 200 kg 紫杉醇的消耗量意味
着要砍伐红豆杉 100万株。而红豆杉属植物资源稀
少,生长缓慢,自然更新困难,单纯依靠自然资源必
然造成物种的濒危甚至灭绝。因而, 紫杉醇的生产
远不能满足临床需求, 售价高居不下[ 5] 。如何解决
日益尖锐的紫杉醇来源问题,自其上市之日起, 即成
为世界范围内药学、植物学等领域研究者面临的重
大课题。研究发现, 往植物中转入针对其生物活性
成分的单链抗体( scFv)基因,可以诱导其产生更多
的该成分。据此, 笔者提出了向红豆杉植物细胞中
转入抗紫杉醇单链抗体基因,提高红豆杉植物中紫
#1045#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月
* 收稿日期: 2009- 01-15 基金项目:国家自然科学基金资助项目( 30500652) ;教育部留学回国人员科研基金资助项目;广东省中医药局科研计划项目( 1060131)作者简介:马丽玲,女,高级讲师。
* 通讯作者 晁 志 T el: ( 020) 61648256 E- mail: chaozhi1971@ yahoo1 com1 cn