全 文 ：表 1 　不同产地药材中的猪苓酸 C、去氢土莫酸( n = 3)
Table 1 　Polyporenic acid C and dehydrotumulosic acid
in P1 cocos from different habitats ( n = 3)
产地
猪苓酸 C
/ (mg ·g - 1)
RSD
/ %
去氢土莫酸
/ (mg ·g - 1)
RSD
/ %
云南 01191 3 ±01 001 5 01 81 01 096 5 ±01000 7 0173
安徽 01225 8 ±01 001 2 01 55 01 114 0 ±01000 8 0176
四川 01319 8 ±01 003 5 11 09 01 163 2 ±01001 3 0177
浙江 01575 6 ±01 003 4 01 60 01 216 7 ±01001 7 0177
河南 01200 3 ±01 005 6 21 84 01 114 5 ±01000 9 0185
河北 01188 6 ±01 004 5 21 36 01 113 7 ±01001 7 1150
湖南 01283 3 ±01 003 8 11 35 01 177 7 ±01001 8 1102
湖北 01263 7 ±01 002 1 01 78 01 145 8 ±01001 0 0165
之 ,其他几个产地的量相对较低。
312 　本实验比较了甲醇2含酸水、乙腈2含酸水流动
相系统的洗脱情况 ,结果表明乙腈2含酸水流动相系
统明显优于甲醇2含酸水系统 ,因甲醇2含酸水系统不
能实现较好的分离 ,故选择乙腈2含酸水流动相系统。
以乙腈2含酸水为流动相系统 ,比较了流动相乙腈2
015 %磷酸水 (70 ∶30 ,75 ∶25 ,80 ∶20)及梯度洗脱的
方法 ,结果表明流动相为 70 ∶30 洗脱效果较好 ,故本
实验流动相采取乙腈2015 %磷酸水 70 ∶30。
313 　在样品提取过程中 ,比较了 5 种不同提取溶媒 (甲醇、甲醇25 %乙酸、乙醇、乙醇25 %乙酸、5 %乙酸2水) ,结果表明甲醇25 %乙酸提取效率高于其他 4 种溶媒 ;以甲醇25 %乙酸为提取溶媒 ,比较了两种不同的提取方法 ,热回流提取法、超声提取法 ,结果超声提取法提取率明显高于热回流提取方法 ;采用超声提取法 ,分别考察了加入 10、20、30 mL 甲醇25 %乙酸的提取效率。结果表明 20、30 mL 提取率无明显差异 ,故提取溶剂量选择 20 mL ;采用超声提取法 ,加入 20 mL 甲醇25 %乙酸 ,又分别考察了提取 20、30、40 min 的提取效率 ,结果表明提取 30、40 min 提取率无明显差别 ,故提取时间选择 30 min。314 　本实验测定了 8 省区主要产地的茯苓中猪苓酸 C 和去氢土莫酸的量 ,对进一步确定茯苓最佳产地 ,扩大药用资源具有一定的参考意义。参考文献 :[1 ] 　《中华本草》编委会1 中华本草 [ M]1上海 :上海科学技术出版社 ,19981[ 2 ] 　金　琦 ,曹　静 ,王淑华1 大剂量茯苓的药理作用及临床应用概况[J ]1浙江中医杂志 ,2003 ,38 (9) :41024111[ 3 ] 　许　津 ,吕　丁 ,钟启平 ,等 1 茯苓素对小鼠 L1210 细胞的抑制作用[J ]1中国医学科学院学报 ,1988 ,10 (1) :452491[ 4 ] 　中国药典[ S]1一部1 2005
HPLC法测定青天葵中鼠李柠檬素和鼠李秦素
周燕园 ,甄汉深 ,袁叶飞 ,钟振国 ,梁臣艳 3
(广西中医学院 ,广西 南宁 　530001)
摘 　要 :目的 　建立青天葵中鼠李柠檬素与鼠李秦素的定量测定方法。方法 　运用 HPLC 法测定 ,色谱柱为 Inert2
sil ODS23 C18 (250 mm ×416 mm ,5μm) ,流动相为甲醇2014 %磷酸水溶液 (63 ∶37) ,体积流量 :110 mL/ min ,检测波
长 :368 nm ,柱温 :40 ℃。结果 　鼠李柠檬素在 012～017μg 线性关系良好 ( r = 01999 9) ,平均回收率为 100104 % ,
RSD 为 1135 %( n = 6) 。鼠李秦素在 218～918μg 线性关系良好 ( r = 01999 9) ,平均回收率为 100126 % , RSD 为
0178 %( n = 6) 。结论 　本方法简便、快速、准确 ,可作为青天葵药材的质量控制方法。
关键词 :青天葵 ;鼠李柠檬素 ;鼠李秦素 ;定量测定 ;高效液相色谱法
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0721152203
　　青天葵来源于兰科植物毛唇芋兰 N ervi l i a
f oa di i ( Hance) Schlt r1 [ 1 ] ,为广西特产药材 ,具有
清肺止咳、健脾消积、镇痛止痛、散瘀消肿、清热解毒
之功效 ,主治肺痨、咳嗽咳血、中毒、跌打损伤、小儿
疳积、精神病、口腔炎、急性咽喉炎等症。近年来还
用含有青天葵复方制剂治疗鼻咽癌以缓解症状[2 ] ,
在目前对青天葵化学成分的研究中[ 3～5 ] ,已分离鉴
定出有三萜、氨基酸、甾体、黄酮类化学成分 ,并显示
出有皂苷、有机酸类成分的反应。其中鼠李柠檬素
与鼠李秦素是 2 种重要黄酮类成分 ,经本课题小组
·2511· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月
3 收稿日期 :2008210220　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家自然科学基金地区联合项目 (30160095) ;国家人事部留学回国人员资助项目 (人发[ 2002 ]99 号) ;广西“新世纪十百千人
才工程”资助项目 (2001209) ;广西高校人才小高地建设创新团队资助计划
作者简介 :周燕园 (1978 —) ,女 (回族) ,湖南祁阳人 ,讲师 ,硕士 ,主要从事中药、药学方面的教学与科研工作 ,研究方向为天然药物、中药
及民族药的质量与成分分析研究。Tel :13217811600 或 (0771) 2219867 (办) 　E2mail :zhou_yanyuan @1631com
实验研究表明鼠李柠檬素有抗肿瘤作用[6 ] ,且有报
道其为治疗慢性气管炎的有效成分[7 ] ,具有抗氧化
活性[ 8 ,9 ] ,细胞毒素作用 ,杀锥虫活性[10 ] ;对 PEP (脯
氨酰基辅酶) 有显著的抑制活性[8 ] 。鼠李秦素具有
抗氧化活性[11 ,12 ] ,且研究中发现鼠李秦素在青天葵
中也有较高的量 ,可作为控制青天葵质量的一个重
要指标。目前 ,在特征成分的定量测定方面 ,未收载
H PL C 的测定方法。由于黄酮是青天葵的主要有效
成分 ,且鼠李柠檬素与鼠李秦素在青天葵中的量均
较高 ,因此建立同时测定 2 种黄酮类成分的 HPL C
测定方法 ,对青天葵药材或制剂的质量标准研究具
有很重要的意义。本实验在确定了测定方法后 ,对
不同产地 10 批青天葵药材中的鼠李柠檬素与鼠李
秦素进行了定量测定。
1 　仪器与药材
Agilent 1100 Series 高效液相色谱仪 (美国安
捷伦公司) (包括在线脱气、四元泵、柱温箱、自动进
样器、二极管阵列检测器、Hp —Chemstation) ,Agi2
lent 8453 紫外2可见分光光度计 (美国安捷伦公司) ,
BP211D 电子分析天平 (德国赛多利斯) , Simplici2
ty185 超纯水系统 ( 美国 MILL IPORE 公司 ) ,
SB3200 —T 超声清洗器 (上海必能信有限公司) ,
L G16 —W 离心机 (北京医用离心机厂) 。青天葵药
材经广西中医学院中药研究所刘寿养副教授鉴定为
N ervi l i a f ordi i ( Hance) Schlt r1 的全草 ,干燥、粉
碎 ,过 20 目筛。鼠李柠檬素对照品、鼠李秦素对照
品 (自制 ,经 UV、IR、MS、NMR 确证结构 ,其质量分
数均为 98 %以上) 。水为超纯水 ,甲醇 (中国医药集
团上海化学试剂公司) 、乙腈 (天津市四友生物医学
技术有限公司)为色谱纯 ,其余试剂均为分析纯。
2 　方法与结果
211 　色谱条件 : Inert sil ODS23 C18 (250 mm ×416
mm ,5 μm) ( GlScience1 Co1 Ltd) ; 流动相 :甲醇2
014 %磷酸水溶液 ( 63 ∶37) ,体积流量 : 110 mL/
min ,检测波长 : 368 nm ,柱温 : 40 ℃。进样量 : 10
μL 。对照品与样品的色谱图见图 1。
212 　对照品溶液的制备 :精密称定鼠李柠檬素对照
品 0140 mg 于 10 mL 量瓶中 ,甲醇溶解并加至刻
度 ,使成 40μg/ mL 溶液 ,得到鼠李柠檬素对照品溶
液。精密称定鼠李秦素对照品 5160 mg 于 10 mL
量瓶中 ,甲醇溶解并加至刻度 ,使成 560μg/ mL 溶
液 ,得到鼠李秦素对照品溶液。
213 　供试品溶液的制备 :精密称取青天葵药材粉末
1 g 于 50 mL 具塞三角瓶中 ,精密加入 20 mL 75 %
t/ min
12鼠李柠檬素　22鼠李秦素
12rhamnocit rin 　22rhamnazin
图 1 　对照品( A)与样品( B) HPLC色谱图
Fig11 　HPLC Chromatograms of reference substance
( A) and N1 f ordii sample ( B)
甲醇 ,称定质量 ,超声提取 1 h ,取出 ,冷却后补回原
质量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,离心 ,即得。
214 　线性关系的考察 :取鼠李柠檬素对照品溶液
5、715、10、1215、15、1715μL 进样分析 ,以峰面积对
进样质量作线性回归 , 所得回归方程为 Y =
1 9791614 56 X - 101230 767 , r = 01999 91。结果
表明鼠李柠檬素在 012～017μg 与峰面积呈良好的线
性关系。取鼠李秦素对照品溶液 5、715、10、1215、15、
1715μL 进样分析 ,以峰面积对进样质量作线性回归 ,
所得回归方程为 Y = 1 9131653 65 X + 321167 478 , r =
01999 92。结果表明鼠李秦素在 218～918μg 与峰面
积呈良好的线性关系。
215 　精密度试验 :取鼠李柠檬素和鼠李秦素对照品
溶液各 10μL 进样 ,平行测定 5 次 ,计算 ,结果鼠李
柠檬素和鼠李秦素峰面积的 RSD 值分别为 0131 %
和 0105 %。
216 　重现性试验 :精密称取同一批青天葵药材 (样
品 1)粉末 5 份 ,每份 1 g ,制备供试品溶液 ,分别进
样 10μL ,外标法分别计算鼠李柠檬素和鼠李秦素
的量 ,结果鼠李柠檬素的 RSD 为 0127 % ,鼠李秦素
的 RSD 为 0132 %。
217 　稳定性试验 :精密称定青天葵药材粉末 1 g ,制备
供试品溶液 ,于 0、6、12、18、24 h 分别进样 10μL ,外标
法分别计算鼠李柠檬素和鼠李秦素的量 ,结果鼠李柠
檬素的 RSD 为 0131 % ,鼠李秦素的 RSD 为 0133 %。
结果表明 ,供试品溶液在 24 h 内稳定性良好。
218 　加样回收率试验 :精密称取同一批青天葵药材
粉末 6 份 ,每份 015 g ,分别精密加入 40μg/ mL 鼠
·3511·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 7 期 2009 年 7 月
李柠檬素对照品溶液和 560μg/ mL 鼠李秦素对照
品溶液各 1 mL ,制备供试品溶液 ,分别进样 10μL
进行分析 ,外标法分别计算鼠李柠檬素和鼠李秦素
的量。结果鼠李柠檬素的平均加样回收率为
100104 % ,RSD 为 1135 % ;鼠李秦素的平均加样回
收率为 100126 % ,RSD 为 0178 %。
219 　样品测定结果 :对采集到的 10 批青天葵药材
按供试品溶液制备项下方法制备样品溶液 ,分别进
样 10μL 测定 ,外标法计算鼠李柠檬素和鼠李秦素
的量。结果见表 1。
表 1 　不同产地青天葵中鼠李柠檬素和鼠李秦素的量
( n = 3)
Table 1 　Determination of rhamnocitrin and rhamnazin
in N1 f ordii from various habitats ( n = 3)
编号 产地 鼠李柠檬素/ % 鼠李秦素/ %
1 　 广西南宁 01 078 70 11 119 8
2 　 广西靖西 01 076 82 11 235 6
3 　 广西陆川 01 086 12 11 352 1
4 　 广西天等 01 077 54 11 285 7
5 　 广西昭平 01 066 89 11 178 5
6 　 云南思茅 01 041 53 21 012 1
7 　 云南红河 01 057 86 11 923 1
8 　 广东　　 01 065 87 21 314 5
9 　 海南　　 01 075 42 11 835 2
10 　 四川　　 01 071 46 11 078 5
3 　讨论
311 　以鼠李柠檬素和鼠李秦素的峰面积作为考察
指标 ,筛选并确定最佳的提取方式 ,实验选择了超声
提取方式。目前 ,超声技术广泛应用于中草药有效
成分的提取 ,超声波产生强烈振动、空化效应、搅拌
作用等 ,都可以加速药物有效成分进入溶剂 ,从而提
高提取效率 ,缩短提取时间 ,并且免去了高温对提取
成分的影响。
312 　以鼠李柠檬素和鼠李秦素的峰面积作为考察
指标 ,筛选并确定最佳的提取方法 ,实验考察了甲醇
不同体积分数 (50 %、75 %、100 %) 、甲醇不同体积
(10、20、30 mL ) 和超声不同提取时间 ( 30、60、90
min)对两指标成分的量的影响 ,以两成分权重 15 ∶
1计算 ,比较最佳提取条件 ,结果表明甲醇体积分数
对试验结果影响较大。用 75 %甲醇 20 mL 超声提
取 60 min ,可以获得最佳提取效果。
313 　鼠李柠檬素和鼠李秦素最大吸收波长分别为
366 和 370 nm ,且 368 nm 波长处两物质吸收都很
强 ,为提高检测灵敏度 ,在同一波长下把两种物质的
量同时测出 ,试验选择 368 nm 作为检测波长。
314 　不同批药材因产地、采收时间、贮存时间长短
等因素不同 ,量存在差异 ,须建立统一的药材质量标
准。本实验建立了青天葵药材中鼠李柠檬素和鼠李
秦素的定量测定方法 ,为青天葵药材的质量控制规
范法、标准化提供了依据。
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