全 文 ：·928· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月
0、1、2、4、6、8h依法操作，进样量20弘L，测定峰面
积。结果5一羟基4一氧代戊酸峰面积的RSD为
2．67％，表明供试品溶液在8h内稳定性较好。
2．8重现性试验：精密称取同一批的药材的样品5
份，制备供试品溶液，结果5一羟基4一氧代戊酸质量
分数的RSD为2．29％。
2．9加样回收率试验：精密称取已测知5一羟基4一
氧代戊酸质量分数的样品约0．5g，再分别精密加
入约0．24mg5-羟基4一氧代戊酸对照品，按样品测
定项下操作依法测定，计算得平均回收率为
100．46％，RSD为2．51％(行一5)。
2．10样品测定：按上述测定方法测定不同批次的
九节菖蒲药材中5一羟基4一氧代戊酸的质量分数。结
果见表1。
表1样品测定结果(n一3)
Table1 Determinationresultsofsamples(H一3)
5一羟基4一氧代戊酸／％
0．512
0．496
0．475
3讨论
3．1 5一羟基4一氧代戊酸紫外最大吸峰波长位于
210nm处，由于处于末端吸收，易受药材中其他成
分干扰，故将检测波长移至214nm。
3．2供试品溶液制备曾采用直接用水超声提取，但
出峰多干扰大，分离度差，故采用水提后，醋酸乙酯
萃取制备供试品溶液，以除去极性大的杂质。
HPLC法测定沪地龙中次黄嘌呤
胡 馨，王倩
(上海市中药研究所，上海 200127)
沪地龙是钜蚓科通俗环毛蚓Pheretimavul—
garisChen、威廉环毛蚓P．guillelmiMichaelsen
或栉盲环毛蚓P．pectiniferaMich elsen的干燥
体。夏季捕捉，及时剖开腹部，除去内脏及泥砂，洗
净，晒干或低温干燥。地龙具有清热定惊、通络、平
喘、利尿的功能，用于高热神昏、惊痫抽搐、关节痹
痛、肢体麻木、半身不遂、肺热喘咳、尿少水肿及高血
压[1]。地龙分为广地龙与沪地龙，过去主要使用广地
龙，而近年来上海也养殖地龙，但对沪地龙的研究较
少，据报道次黄嘌呤是地龙扩张支气管成分，从地龙
中分离出的次黄嘌呤有抗组胺、降血压等作用[1]。笔
者曾经用紫外分光光度法测定沪地龙中次黄嘌
呤[2]，本实验在此基础上采用RP—HPLC法测定了
上海地区沪地龙中的次黄嘌呤，方法简便可靠。
1仪器与材料
Agilent1100高效液相色谱仪。甲醇、四氢呋喃
为色谱纯，水为超纯水。次黄嘌呤对照品由Sigma
公司提供，沪地龙为上海德华药业有限公司提供。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱用十八烷基键合相硅胶为填
充剂；水一甲醇一四氢呋喃(100：0．12：0．04)为流
动相；检测波长为254nm。理论塔板数按次黄嘌呤
峰计应不低于2000。
2．2对照品溶液的制备：精密称取次黄嘌呤对照品
适量，加水制成30p．g／mL的溶液，即得储备液。
2．3供试品溶液的制备：取沪地龙粉末(过60目
筛)0．2g，精密称定，置100mL量瓶中，加入80
mL水，超声提取30min，放冷，加水至刻度，摇匀，
静置，上清液用微孔滤膜(o．45肛m)滤过，即得。
2．4标准曲线的制备：分别精密吸取次黄嘌呤储备
液0．25、0．5、1、2、3、4和5mL置于50mL量瓶
中，加水至刻度，精密吸取10肛L，注入液相色谱仪，
测定，以质量浓度(C)为横坐标，峰面积(A)为纵
坐标，绘制标准曲线，得方程：A一35．956C一
0．1702，r一0．999。结果表明次黄嘌呤在0．15～
3．0／29／mL与峰面积具有良好的线性关系。
2．5精密度试验：同一次黄嘌呤对照品溶液，以相
同进样量重复进样5次，测定，结果峰面积RSD为
0．83％(孢一5)。
2．6重现性试验：取同一批号的样品6份，制备供
试品溶液，进样，测定，计算得次黄嘌呤的质量分数，
结果RSD为0．16％(卵一6)。
收稿日期：2004—07—19
作者简介：胡馨(1963一)，女，满族人，高工，上海市中药研究所分析测试中心主任，研究方向为中药及天然药物分析研究，新药质量标
准研究。Tel：(021)58810853310E—mail：huxin736@126．com
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月·929·
2．7 稳定性试验：取同一批供试品溶液分别于0、
1、2、4、5、6、7、8h，进样，依法测定次黄嘌呤的峰面
积，其RSD为1．55％(以一5)。结果表明供试品溶
液在8h内稳定。
2．8 回收率试验：采用加样回收法。已知质量分数
的沪地龙样品中加入一定量的次黄嘌呤对照品，制
备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算回收率，
结果次黄嘌呤平均回收率为99．67％，RSD为
1．71％(咒一5)。
2．9样品测定：分别吸取次黄嘌呤对照品溶液及沪
地龙供试品溶液各10肛L进样，测定，按外标一点
法计算，结果见表1。高效液相色谱图见图1。
3讨论
表1样品中次黄嘌呤的测定结果白一2)
Table1 Determinationof6一hydroxypurine
insamples(珂=2)
4 6 8 10 4 6 8 10
t／+mm
*一次黄嘌呤
*～6一hydroxypurine
图1样品(A)和次黄嘌呤(B)HPLC色谱图
Fig．1HPLCchromatogramsfsample(A)
and6-hydroxypurine(B)
3．1地龙中的次黄嘌呤在水中溶解性最好，稀乙醇
中次之，随着乙醇体积分数的升高溶解度下降。
3．2在分离条件的筛选中曾经使用过磷酸氢二铵
缓冲液为流动相，但分离较差，在反复比较后采用了
水与甲醇的流动相加四氢呋喃改善峰形。
3．3沪地龙样品中含次黄嘌呤的量差别较大，在不
同季节里收获的沪地龙中也有较大差别，该方法可
以作为衡量地龙品质好坏的依据之一。
References：
[1]ZhengHZ，DongZ，SheJ．ModernStudyandApplication
ofChineseMat riaMedica(中药现代化研究与应用)[M3．
Beijing：XueyuanPr ss，1998．
[23Hux，HuangWH．Comparisonandeterminationof6-hy—
droxypurineindifferentPheretimabetweenShanghaiand
Guangdong口]．ChinTraditPatMed(中成药)，1994，16
(1)二42—43．
(上接第865页)
行测定。以峰面积积分值为纵坐标，质量浓度为横坐
标，经处理得回归方程：y一41571C+9287．2，r一
1．000，表明葛根素在1．736～43．400弘g时，质量浓
度与峰面积呈良好的线性关系。
2．5精密度试验：精密吸取8．68vg／mL葛根素对
照品溶液10弘L，照上述色谱条件进样测定，重复进
样5次，计算得葛根素峰面积积分值RSD一
0．52％。
2．6重现性试验：取同一批号(批号：020410)的样
品制备5份供试品溶液，测定，结果葛根素质量分数
的RSD一1．37％(咒=5)。
2．7稳定性试验：取同一份供试品溶液，每隔2h
进样1次，连续考察10h，测定葛根素峰面积积分
值，结果其RSD=1．15％(超一6)。
2．8 回收率试验：称取葛根素9．11nag，置25mL
量瓶中，加30％乙醇稀释至刻度，摇匀，再吸取2
mL置10mL量瓶中，加3％乙醇稀释至刻度，摇匀
即得。取同一批(批号：020410)表实感冒颗粒5份，
各lg，分别置具塞三角瓶中，各加入葛根素对照品
溶液1rnL，按供试品溶液制备方法制备，测定，计算
回收率，结果葛根素回收率为98．91％，RSD为
1．15％。
2．9样品测定：照上述色谱条件及方法测定3批表
实感冒颗粒中的葛根素，结果见表1。
表1 表实感冒颗粒中葛根素的测定结果(疗=3)
Table1 PuerarininBiaoshiGanmaoGranule(n一3)
批号 葛根素／(ug·g-1) RSD／％
020515 6i．89 1．2l
020517 61．89 1．51
020520 77．27 1．13
020410 73．14 1．Z7
3讨论
经测定，葛根素在251．0nm处有最大吸收，故
选为检测波长，保证了检测的灵敏度。
通过方法学考察、样品定量测定分析，该方法简
便、准确，为表实感冒颗粒的质量控制提供了保证。
万方数据
HPLC法测定沪地龙中次黄嘌呤
作者： 胡馨， 王倩
作者单位： 上海市中药研究所,上海,200127
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(6)
被引用次数： 3次

参考文献(2条)
1.Zheng H Z;Dong Z;She J 中药现代化研究与应用 1998
2.Hu X;HuangWH Comparison and determination of 6-hydroxypurine in different Pheretima between
Shanghai and Guangdong 1994(01)

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2.卢绮雯.李坚.何琳 高效液相色谱法测定地龙配方颗粒中次黄嘌呤的含量[期刊论文]-时珍国医国药 2007(9)
3.王昶.魏文峰.张树明.王伟明 地龙β-环糊精包合除味工艺研究[期刊论文]-中草药 2013(3)


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