全 文 ：中革鸯ChineseTraditionalandHerl№lDrugs第38卷第9期2007年9月
片的重要指标，收率越高越容易压片，选定为制粒工
艺筛选的主要指标。同时崩解时限也是考察片剂的
重要参数，崩解时限越小越好，作为辅助参考指标。
裹4正交试验设计与结粜
Table4 Designandresultsoforthogonaltest
可见影响香云肝泰颗粒高速湿法制粒的因素主
次顺序为B>C>A>D，即主药占处方量对香云肝
泰颗粒高速湿法制粒有显著影响，乙醇用量对崩解
时限影响最小。因此最佳制粒条件为A-B。c。D。，即
主药占处方量60％，70％乙醇用量为25mL／100g，
搅拌2rain。
2．3验证试验：称取香菇多糖1800g、云芝多糖
l200g、淀粉2000g混合均匀，加70％乙醇1250
mL，搅拌2rain。16目筛网制粒，置热风循环干燥箱
内，75℃条件下干燥，16目筛网整粒，压片包衣，测
得薄膜片的崩解时限为41rain。
3讨论
。
影响高速湿法制粒的因素陈搅摔时问、主药占
处方量的比例、乙醇体积分数和乙醇用量外，还有药
粉的细度、环境空气湿度等[‘】，具体影响情况还有待
在以后的工艺研究中进一步探讨。
本实验以颗粒收率为主要评价指标，包衣片崩
解时限为辅助参考指标。正交试验的结果分析以颗
粒收率为单一指标，而崩解时限在保证合格的前提
下不影响对整个试验的科学分析。
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大孔吸附树脂分离纯化珍珠菜总黄酮的研究
游本刚，唐丽华’，徐向毅，周晓霞
(苏州大学药学院，扛苏苏州．215007)
珍珠菜系报春花科植物虎尾珍珠菜Lysimachia
clethroideDuby的根或全草，味苦、辛，性平，具有清
热利湿、括血散瘀、解毒消痈之功效。国外学者从20
世纪70年代开始相继从中分离得到槲皮素苷、山柰
酚等黄酮类化合物l““，国内学者近年来对其化学成
分也有所研究[3“]。本实验室对珍珠菜提取物进行药
理学研究发现，珍珠菜全草总黄酮具有良好的抗肿
瘤作用“]。因此本实验采用大孔吸附树脂对珍珠菜
总黄酮的分离纯化工艺进行了研究。
1仪器与试剂
UV--240IPC紫外一可见分光光度计(日本岛津
公司)，电子分析天平(Starorious)，Dz一900回转振
荡器Ck仓市实验设备厂)。
D4020、NKA一9、AB一8树脂(南开大学化工厂)，
芦丁对照品(中国药品生物制品检定所)，试剂均为
分析纯，珍珠菜药材由苏州雷允上药材采购站提供，
经本院生药教研室刘春字副教授鉴定为虎尾珍珠菜
L．clethroideDuby的全草。
2方法与结果
2．1上样液的制备：取经粉碎的珍珠菜药材适量，
鐾銎品留；纂薪吴￥叠学发展基金(EEl3260口)，苏州大学青年教师研兜基盒(Q3132532)
譬翥景雍擎智髻翠77之：器；要秀盎i嚣器’罨：‰，。。。胁。。@。。血．d。，。。
万方数据
·1338· 中草番ChineseTraditionalndHerbalDrugs第38卷第9期2007年9月
依次加人12、10、8倍量的80％乙醇，加热回流提
取，每次1．5h，合并提取液，滤过。滤液减压回收溶
剂，并浓缩至含生药0．5g／mL。浓缩液加2倍量水
稀释，静置，抽滤除去不溶性物质，滤液再次浓缩，即
得珍珠菜上样液，冷藏保存备用。
2．2珍珠菜总黄酮的UV法测定：珍珠菜中含有
多种黄酮和黄酮苷类化合物，且曾分离得到芦丁等
黄酮类成分”，所以本实验利用黄酮类化合物的3，
5羟基与Al”生成络合物．在可见区有最大吸收的
特点，以芦丁作为对照品，采用紫外分光光度法测定
珍珠菜总黄酮。
2．2．1 对照品溶液的制备：精密称取芦丁对骤品
20．07mg于100mL量瓶中，以95％乙醇溶解并加
至刻度，摇匀即得(质量浓度为200．7Pg／mL)。
2．2．2最大吸收波长的确定：分别取芦丁对照品溶
液和上样液适量，置25mL量瓶中，分别加入1mL
10％AICl；溶液，加95％乙醇至刻度，摇匀，在
200～600nm波长进行扫描。结果芦丁对照品溶液
和上样液与Al”络合后均在405rim有最大吸收，
所以本实验选择405nm作为测定波长。
2．2．3标准曲线的制备：精密量取芦丁对照品溶液
0．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0、3．5、4．0mL于25mL
量瓶中，分别加入imL10AAICI。溶液，加95％乙
醇至刻度，播匀，于紫外分光光度计下测定其吸光
度。以吸光度对质量浓度作最小二乘法回归，得标准
曲线方程为C=38．672A+0．075，r一0．9999(H=
5)，线性范围为4．014～32．112pg／mL。
2．2．4测定：取一定量待测供试品溶液于25mL
量瓶中，加人1mLl0％AICla，加95％乙醇至刻度，
在405nm处测定其吸光度值，代入标准曲线方程
计算总黄酮的质量浓度。
2．3静态吸附一洗脱试验
2．3．1静态吸附曲线的制备：精密称取经处理的湿
树脂4．0g，于i00mL具塞磨口三角烧瓶中，分别
加入经稀释的上样液50mL，摇匀，置电子振荡器上一
振摇(110r／min，20℃)，每隔30rain取样测定总黄
酮的质量浓度，计算该时间点供试品溶液中总黄酮
的质量浓度(C)与初始上样液中总黄酮的质量浓度
(c。)的比值，并绘制c／co～f吸附曲线，结果见图
1。可见，在90rain时，3种树脂均已基本达到吸附
平衡，以AB一8树脂对总黄酮质量浓度下降最大，
NKA一9树脂的下降最小，说明AB-8树脂对珍珠菜
总黄酮吸附最好，NKA一9树脂最差。
2．3．z静态饱和吸附量的测定：上样液振摇24h，
o 30 60 90 120150180210
f／nin
圈1树脂对珍珠菜总黄醇的静态吸附曲线(”一3)
Fig．1Staticadsorption∞rvesofL·clethroideoDtotal
flavonesbymacroreticularresins(月=3)
使总黄酮达到饱和吸附，吸取上层供试品溶液适量，
测定，计算总黄酮的质量浓度，按饱和吸附量=(上
样液中总黄酮的质量浓度×体积一吸附后溶液中总
黄酮的质量浓度×体积一取出的总黄酮量)／湿树脂
质量，计算树脂静态饱和吸附量，结果见表1。3种树
脂的静态饱和吸附量依次为AB一8>D4020>NKA一
9。以AB一8树脂对珍珠菜总黄酮吸附性能最好。
衰1树膳静态饱和吸附■的测定结果(n一3)
Table1 Staticadsorptioncapacltyinsaturation
bymacroretlcuiorres ns抽一3)
2．3．3静态洗脱曲线的制备：将上述吸附饱和的树
脂抽滤，用少量水冲洗后，再置于三角烧瓶中，分别
加人50mL95％乙醇，再次置于电子振荡器上振摇
(110r／mln，20℃)，每隔30min取样测定，计算溶
液中总黄酮浓度，按静态洗脱率=(洗脱液中总黄酮
的质量浓度×取样前洗脱液体积+之前取出的总黄
酮量)／饱和吸附量×100％计算洗脱率，绘制洗脱曲
线，结果见图2。可见，采用95％乙醇洗脱时，3种树
脂均在30min时基本达到洗脱平衡，洗脱率依次为
D4020>AB一8>NKA一9。
2．3．4静态洗脱率的测定：上述溶液继续振摇24
h，再吸取上层溶液，测定总黄酮的质量浓度，计算
洗脱率，结果见表2。可见，在3种树脂中，95“乙醇
对珍珠菜总黄酮的平衡洗脱率与洗脱曲线呈现的结
果一致。结合洗脱量来评价，A13-8树脂远远高于其
他两种树脂，洗脱效果最好。
2．4动态吸附一洗脱试验
2。4．1动态吸附曲线的制备：精密称取3种湿树脂
各20g，湿法装柱，加入经稀释的上样液200mL，调
¨
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瞄
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万方数据
中革番ChineseTraditionalndHerb4dDrugs第38卷第9期2007年9月
t
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圈2树脂对珍珠蔡总黄酮的静态洗脱曲线(H=3)
Fig．2Statkelutioncurv曙ofL．clethroideontotal
flavonesbymaeroreticulⅡresins“=3)
寰2 3种树脂的静态洗脱结果“一3)
Table2 Staticelutinnratiobythreetyp幅
ofmafrorettcularresins抽=3)
节体积流量为1．0mL／min，待上样液流至下液面
时，开始计时并收集流出液，每10rain收集一管，采
用紫外分光光度法测定每管中的总黄酮质量浓度，
以流出液中总黄酮质量浓度(c)与初始样品液中总
黄酮质量浓度(Co)的比值对收集中点时间作图，绘
制c／co～f吸附曲线，结果见图3。可见，c／c。越大，
吸附效果越差，3种树脂吸附总黄酮达到饱和的时
间相差较大。NKA一9在80min时即接近吸附饱和，
D4020在80min时接近吸附饱和，而AB一8在150
rain时才达到饱和吸附，且AB一8树脂达到吸附饱
和的速度最小。说明AB-8树脂吸附总黄酮达到饱
和所需的时间最长，吸附量也最大，从而可以提示
AB一8树脂对珍珠菜总黄酮的吸附性能较其他两种
树脂为好。 t
g
0 60 180
l／11．in
噩3树脂对珍珠菜慧黄酮的动态驳附曲线“一3)
F堙·3 Dynamdeadsorptioncurv4NJofL．clethroideoR
totalfinvonesbymacroretlcularresin(4—3)
2．4．2动态饱和吸附量的测定：上样完毕后，用少
量水冲洗，使树脂床中的上样液完全流出．合并流出
液。测定流出液体积和其中总黄酮的质量浓度。再用
水冲洗树脂，直至流出的水洗液接近无色，收集水洗
液，测定体积和总黄酮的质量浓度。按照动态饱和吸
附量=(上样液中总黄酮的质量浓度×上样体积一
流出液中总黄酮的质量浓度×体积一水洗液中总黄
酮的质量浓度×体积一所取出的总黄酮量)／湿树脂
质量计算树脂动态饱和吸附量，结果见表3。可见，3
种树脂对珍珠菜总黄酮的动态饱和吸附量以AB一8
树脂最大，D4020树脂其次，NKA-9树脂最差，这也
与穿透越线呈现的结果一致，说明A13-8树脂对珍
珠莱总黄酮的吸附性能最好。
裹3树腰动态饱和吸附■的潮定结果(^一3)
Table3 DynamicadsorptioncapacityInsaturation
hymacroreticularresins(^=3)
2．4．3动态洗脱试验：将上述动态饱和吸附后的树
脂加95％的乙醇进行洗脱，至乙醇开始流出时进行
收集，至洗脱液中不舍总黄酮时停止收集，记录洗脱
液体积和总黄酮的质量浓度。按照动态洗脱率=洗
脱液中总黄酮的质量浓度×洗脱液体积／饱和吸附
量×100％计算动态洗脱率，结果见表4。可见，在3
种树脂中，95％乙醇对珍珠菜总黄酮的动态洗脱量
与洗脱率均以AB-8树脂最大，洗脱效果最好。
寰4树脂动态洗脱的测定结秉“=3)
Table4 Dynamicelutiooratiobythreetypes
ofmacroreticularresins(Ⅳ=3)
3讨论 。
3．1总黄酮分析方法的选择：黄酮类化合物多具有
3，4，5羟基，可与许多金属试剂反应生成有色络合
物，根据此特点可以利用uV来测定总黄酮的量。
珍珠菜中黄酮类化合物大多含有3，5羟基，可以与
Al”生成络合物。芦丁对照品和珍珠菜提取液在
370nm左右均有最大吸收，络合后在400nm左右
均有最大吸收，为避免非黄酮类成分在370nm波
长下对总黄酮吸收产生干扰，本实验选择采用络合
显色法测定珍珠菜提取液中总黄酮的量。
加
¨
％
¨
吡
o
万方数据
·1340· 中革芮ChineseTraditionalandHerhlDrugs第38卷第9期2007年9月
3．2影响树脂吸附性能的因素：本实验所采用的树
脂有非极性(D4020)，极性(NKA一9)和弱极性
(AB一8)3种类型，由实验结果可见，弱极性树脂
AB-8的吸附量较大，这是由于珍珠菜总黄酮具有多
酚结构，具有一定极性和亲水性，生成氢键的能力较
强，有利于弱极性和极性树脂的吸附。另外，大孔树
脂吸附原理主要为物理吸附，所以具有较高的比表
面对吸附也有利，比表面增加，表面张力随之增大，
吸附量提高。弱极性树脂AB-8的比表面明显大于
NKA一9，所以其对黄酮吸附量也显著大于极性树
脂NKA一9。
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北豆根中蝙蝠葛酚性碱提取工艺的正交试验优选
刘长丽1，杨绍云2，曾繁典”
(1．华中科技大学同薪医学院药理系，湖北武汉430030；2．湖北省医药工业研究院．湖北武汉430061)
蝙蝠葛酚性碱(phenolica kaloidsfMenisper-
mumdauHcum，PAMD)是从防己科植物蝙蝠葛
MenispermumdaurlcumDC．干燥根茎中提取得到
的双苄基异哇啉类酚性生物碱，其主要成分为蝙蝠
葛碱(dauricine)n]。蝙蝠葛碱具有舒张冠脉，增加冠
脉血流、抗心肌缺血、抗血小板聚集和抗动脉粥样硬
化作用口”]。PAMD中的生物碱均为双苄基异喹啉
类生物碱，具有相同的分子骨架，相似的化学结构．
宜作为有效部位进行研究和开发。PAMD有明显的
抗实验性心律失常和抗心肌缺血的作用[6】。此类生
物碱兼有脂溶性和酸碱两性，据此特点设计PAMD
提取工艺，通过酸水渗漉和乙醇回流提取得到
PAMD。本实验采用正交试验设计以总生物碱的得
量和蝙蝠葛碱的得量为考察指标对提取过程中酸水
渗娩工艺和乙醇提取工艺的条件进行优选，以期优
化提取工艺条件。
1仪器与药品
RE--52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)I
SP2000泵(美国光谱物理公司)，UVl000紫外检测
器，HP3394A数据处理器；pHs一3c数字式酸度计
(上海理达仪器厂)}瑞士AE200型电子分析天平。
蝙蝠葛根茎(北豆根药材)由伊春药业有限公司
质量检验中心提供并鉴定}蝙蝠葛碱对照品为自制，
用归一化法测定其质量分数在99．0％以上f高效液
相色谱用试剂为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2．1 总生物碱的测定：参照《中国药典》2005年版
一部北豆根片项下中和法。取粗总生物碱约0．1g，
精密称定，置具塞锥形瓶中，加醋酸乙酯25mL，振
摇30rain，滤过，用醋酸乙酯lOmL分3次洗涤容
器和滤渣，洗液与滤液合并，置水浴上蒸干，加无水
乙醇10mL使溶解，精密加0．01tool／L硫酸滴定
液25mL与甲基红指示液2滴。用0．02mol／L氢
氧化钠滴定液滴定，即得。每毫升0．01mol／L硫酸
滴定液相当于6．248mg蝙蝠葛碱口]。
2．2蝙蝠葛碱的HPLC法测定
2．2．1 色谱条件：色谱柱InertsilODS一3C。8柱
(150mm×4．6mm。5pm)#流动相：乙腈一永一磷酸一
三乙胺(15：85t 0．2：0．2)；检测波长：279ilm；体
积流量：1．5mL／minI柱温：室温。
2．2．2对照品溶液的制备：精密称取蝙蝠葛碱对照
品50．35mg，置100mL量瓶中，加流动相适量，超
声处理使其溶解，加流动相至刻度，摇匀，即得。
2．2．3标准曲线的制备；从蝙蝠葛碱对照品溶液中
精密移取5、10、15、20、25mL置50mL量瓶中，加
收稿B期；2006—1l-11
作者简介‘型蔷夏薯留2F备奎毒§i§舞要春)E,．一m20训04；gIuc获得，l，。羔盅霉篡夺惹璺蠹医学院药理学硬士学位t理在上海美迪西生物医药有限
·通讯作者曾繁妊Tel=(027)8363065ZE—mailI|dzeng@163．c。m
万方数据
大孔吸附树脂分离纯化珍珠菜总黄酮的研究
作者： 游本刚， 唐丽华， 徐向毅， 周晓霞
作者单位： 苏州大学药学院,江苏,苏州,215007
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(9)
被引用次数： 6次

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