全 文 ：收稿日期:2005-01-31;　修订日期:2005-05-22
基金项目:吉林省教育厅科学研究计划项目(No.2004-04)
作者简介:郭晓红(1970-),女(朝鲜族),吉林延吉人 ,现任延边大学医学
院实验师 ,学士学位 ,主要从事中药毒理学研究工作.
＊通讯作者简介:张学武(1973-),男(汉族),吉林大安人 ,现任延边大学医
学院讲师 ,博士学位 ,主要从事中草药开发与肝脏生物化学研究工作.
珍珠梅提取物对亚急性衰老大鼠的抗衰老作用
郭晓红 , 张学武＊
(延边大学医学院 ,吉林 延吉　133000)
摘要:目的:探讨珍珠梅提取物对 D-半乳糖致衰老大鼠的保护作用。方法:60 只Wistar 大鼠随机分正常组 、模型组(Sc
D-半乳糖 48 mg/(kg · d)、人参皂苷组(100 mg/kg , ig , D-半乳糖 48 mg/(kg · d)、珍珠梅大 、中 、小剂量组(200 , 150 , 100
mg/kg.ig , ScD-半乳糖 48 mg/(kg· d), 连续 40 d。用比色分析法测定大鼠大脑皮质超氧化物歧化酶(supero xide dis-
mutase , SOD)、单胺氧化酶(monoamine oxidase , MAO)的活性及丙二醛(ma londialdehyde , MDA)的含量 , 同步观察电子
显微镜下的组织学变化。结果:珍珠梅提取物可提高 D-半乳糖所致大鼠脑组织 SOD 活性 、降低 MDA 含量 , 抑制 MAO
活性;电子显微镜观察到珍珠梅提取物可以减轻 D-半乳糖导致的线粒体等超微结构的改变。结论:珍珠梅提取物对 D-
半乳糖致衰老大鼠具有保护作用。
关键词:珍珠梅;　亚急性;　衰老;　大鼠
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2005)10-0957-01
Anti-senile Effect of Sorbaria sorbi folia Extract on D-galgctose Induced Subacute Senile in
Rats
GUO Xiao-hong , ZH ANG Xue-wu＊
(College of Medicine , Y anbian Universi ty , Y anj i , J i lin , 133000 , China)
Abstract:Objective:To study the anti-senile effec t of Sorbaria sorbi folia ex tract on D-galg ctose induced subacute senile
in rats.Methods:60 Wista r rats w ere randomly into normal gr oup , model g roup(sc D-galacto se , 48 mg/(kg· d), Sorbaria
sorbi f olia gr oups (0.10 , 0.15 , 0.20 g/kg ig.sc D-galactose 48 mg/ kg · d).After 40 day s , the activities of SOD , MAO
and the content MDA w ere measured w ith colorimetric the activ itie s o f SOD , M AO and the content MDA w ere measured
with co lo rimetric me thod , and the histo lo gical change s w ere synchronously observed by electr onic micro scope.Results:
Sorbaria sorbi f olia ex tract significantly increased the activity of SOD in brain tissue , decr eased the content M DA , inhibit
the M AO activity.It was obse rved under mic roscope that Sorbaria sorbi f olia could retrieve the degeneration of mito chon-
drion.Conclusion:Sorbaria sorbi folia ex tract have anti-senile effect on D-galg ctose induced subacute senile in rats.
Key words:Sorbaria sorbi f olia ;　Subacute;　Senile;　Rats
　　珍珠梅 Sorbaria sorbi f olia 属蔷薇科植物 , 又称“山高粱”
“八木条” ,广泛分布于云南 、贵州 、四川 、湖北 、甘肃 、宁夏及东北 ,
有活血化瘀 、消肿止痛 、治骨折及跌打损伤的作用。笔者曾报道
珍珠梅具有抗肿瘤 、清除氧自由基 、抑制脂质过氧化等药理作
用[ 1 ,2] 。
本实验观察珍珠梅对 D-半乳糖致大鼠衰老模型 , 通过生化
指标检测及电子显微镜的观察 ,阐明珍珠梅对大脑衰老的保护作
用 ,为进一步开发应用珍珠梅提供一些实验依据。
1　材料与方法
1.1　药物 珍珠梅茎 、叶 、花采集于吉林省延吉市市郊。醋酸乙
酯提取物:醋酸乙酯分 3 次浸泡珍珠梅 , 温度为 40℃, 12 h/次 , 合
并 3次滤液 ,用旋转蒸发器减压浓缩 , 获珍珠梅醋酸乙酯提取物
浸膏(1 g珍珠梅有效成分相当于 33.3 g生药)。
1.2　试剂 D-半乳糖系上海试剂二厂产品(批号为 980218), 人
参总皂苷系吉林省白山市靖宇县黄封参药业公司产品 , SOD、
MAO 、MDA 试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
1.3　仪器 JEM-1200 透射电镜 , UV -2501PC 型紫外分光光
度计 , 722 型分光光度计 ,旋转蒸发仪 , 电热恒温水浴箱。
1.4　动物 Wista r大鼠 ,雌雄各半 ,体重为 180～ 210 g , 由延边大
学医学院动物科提供。
1.5　方法
1.5.1　衰老大鼠模型的制备及药物投入 60 只Wistar 大鼠随机
分为正常组 ,模型组 , 珍珠梅大 、中 、小剂量组 ,人参皂苷组。各组
动物在实验前禁食 12 h 进行实验 , 模型组皮下注射 D-半乳糖 48
mg/(kg · d),同时生理盐水灌胃 10 mg/(kg· d), 珍珠梅大 、中 、
小剂量组每 d 皮下注射 D-半乳糖并分别灌胃珍珠梅提取物 200 ,
150 , 100 mg/ kg , 人参皂苷组每 d 皮下注射 D-半乳糖同时灌胃人
参总皂苷 100 mg/kg ,连续 40 d。第 41 天处死大鼠 , 迅速取出大
脑 ,取左侧中央回皮质 1×1×1 mm3 小块作电镜观察。
1.5.2　观察指标
1.5.2.1　超微结构观察 左侧小块中央回皮质 ,用 0.1 mo l/ L 磷
酸缓冲液冲洗 3 次 ,经 0.03 g/ L戊二醛固定 2 h , 0.01 g/ L 锇酸
后固定 1 h , 梯度丙酮脱水 , Epon-812 环氧树脂包埋 , 做超薄切
片 ,铀铅双重染色后 , 在 JEM-1200 透射电镜下观察并拍片。
1.5.2.2　生化指标检测 剩余脑组织除去丘脑 、小脑和延髓 , 以
pH 7.4 的磷酸缓冲液冰浴中制成匀浆液后 , 2 000 r/min 离心 10
min ,取上清液 , 用比色分析法检测 SOD , MAO 的活性及 MDA
的含量。
1.6　统计学处理 应用 SPSS-10.0 统计软件进行方差分析。
2　结果
2.1　超微结构观察 正常组细胞器形态基本正常 ,模型组线粒体
出现肿胀变性和空泡样变 , 且核膜不规则;珍珠梅组线粒体轻度
肿胀 ,核膜较规则。
2.2　生化指标检测
2.2.1　SOD 活性 结果见表 1。珍珠梅提取物对 D-半乳糖导致
的大鼠脑组织的 SOD 活性的降低有明显的升高作用(P <
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LISHIZH EN M EDICINE AND MAT ERIA M EDICA RESEARCH 2005 VO L.16 NO.10 时珍国医国药 2005 年第 16 卷第 10 期
0.05),而对 MAO活性 、MDA 含量的升高有明显的降低作用(P
<0.05)。
表 1　珍珠梅提取物对D-半乳糖致衰老大鼠脑组织
SOD , MAO 活性及 MDA 含量的影响( x ±s)
组别 动物数
SOD
/U ·mg-1
MDA
/ nm ol·ml-1
MAO
/ U · g-1
正常　　　　 10 3.7±0.7＊ 　96.6±14.9＊ 　228.4±60.1＊
模型　　　　 10 2.4±0.4 131.6±25.5 373.9±76.7＊
珍珠梅大剂量 10 5.2±1.2＊ 87.3±19.3＊ 245.5±22.1＊
珍珠梅中剂量 10 4.1±0.7＊ 85.4±9.7＊ 243.1±16.5＊
珍珠梅小剂量 10 3.6±0.7＊ 97.3±27.0＊ 216.4±26.8＊
人参皂苷　　 10 3.9±0.7＊ 95.7±17.6＊ 183.1±21.8＊
　　与模型组比较 , ＊P<0.05
3　讨论
衰老是生命过程中正常而又复杂的生物过程 , 有关衰老的学
说很多 ,如代谢废物学说 、免疫功能衰退学说 、基因程序学说 、自
由基学说等 ,每种学说都有一定的实验依据 ,而自由基学说与其
它学说有直接或间接的关系 ,受到众多实验的支持[ 3] 。自由基学
说认为引起人体衰老的主要原因是人体细胞代谢过程中不断产
生的自由基 ,因其具有高度的化学活性 , 并能与活细胞的大部分
发生反应 ,损伤 DNA 分子 , 造成键的断裂 ,使细胞死亡或发生突
变。SOD作为体内重要的抗氧化酶 , 它能促使超氧化物阴离子
自由基变为过氧化氢和氧离子 , 从而减少脂质过氧化反应 ,使机
体细胞和组织免受损害。MDA 是过氧化脂质的分解产物之一 ,
它能使膜交联和聚集 ,并最终导致 DNA 的交联 , 引起突变 ,因此
通过测定 MDA 可以间接反应体内自由基产生和老化程度。
MAO 在正常肝 、肾 、大脑 、脑干等区活性较强 , 其定位于线粒体
外膜及线粒体嵴 ,可催化单胺氧化脱氨基 , 参与神经元去甲肾上
腺素 、5-羟色胺等递质的分解[4] 。
既往研究表明 , D-半乳糖可致 SOD活性降低 , MAO 活性增
高等 ,从而引起大脑功能衰退[ 5] 。本实验研究结果与其相符。本
实验结果表明模型组与正常组 、珍珠梅组 、人参皂苷组锥体细胞
SOD活性 、MDA 含量及 MAO 活性均有显著差异 , 说明珍珠梅
能使亚急性衰老大鼠的脑组织的 SOD 活性增强 , 降低 MDA 的
含量 ,抑制 M AO 活性。本实验超微结构观察表明 , 模型组锥体
细胞内溶酶体 、脂褐素大小和形态不规则 , 线粒体出现肿胀变性
和空泡样变 ,且核膜不规则;而珍珠梅组锥体细胞内线粒体轻度
肿胀 ,核膜较规则。
总之 ,珍珠梅作为一种抗衰老的药物 ,具有广泛的开发前景 ,
对其确切的作用机理今后应从其有效成分中进一步研究。
参考文献:
[ 1 ] 　张学武 ,张玉梅 ,关丽萍 ,等.珍珠梅活性成分的提取分离及体内抑
瘤作用的研究[ J] .中药材 , 2004 , 27(1):36-38.
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sorbi fol ia on DEN-induced precancerous hepatic foci and it s an-
t ioxidative activies in rats[ J] .C hina Jcancer Prev T reat , 2003 , 10
(11):1137-1140.
[ 3 ] 　郑荣梁.衰老的自由基学说[ J] .实用老年医学 , 1992 , 6(1):31-33.
[ 4 ] 　Giardino R , Giavaresi G , Fini M , et al.T he role of dif feren t chemi-
cal modifications of superoxide dismu tase in preventing a prolonged
m uscu lar ischemia/ reperfusion in jury[ J] .Ari f Cel ls B lood Subst i t
I mmobi l Biotechnol , 2002 , 30(1):189-198.
收稿日期:2005-01-21;　修订日期:2005-06-11
基金项目:河南大学基金资助项目(HD0004382)
作者简介:李　钦(1965-),男(汉族),河南中牟人 , 现任河南大学药学院
副教授 ,主要从事中药炮制工艺和质量标准研究工作.
反相高效液相色谱法测定玉米须中尿囊素的含量
李　钦1 , 2 , 田智勇1 , 贾天柱2
(1.河南大学药学院 ,河南 开封　475001;　2辽宁中医学院 ,辽宁 沈阳　110032)
摘要:目的:采用反相高效液相色谱对玉米须中尿囊素的含量进行测定。方法:选用 DiamonsilTM(钻石)C18色谱柱(5
μm , 150 mm×4.6 mm), 氯仿-甲醇-水(0.012∶0.5∶100)为流动相 ,紫外检测波长为 224 nm 条件下对尿囊素进行含量
测定。结果:尿囊素的含量在 0.108 ～ 0.972 μg 范围内 , 进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系 , r= 0.999 9 , 平均回
收率 97.5%, RSD=1.62%。结论:所建立的方法能准确 、快速地进行定量检测 , 可作为玉米须中尿囊素的质量控制方
法。
关键词:尿囊素;　反相高效液相色谱法;　玉米须
中图分类号:R917.40　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2005)10-0958-02
Determination of Allantoin in Corn Silk by RP-HPLC
LI Q in1 , 2 , T IAN ZHi-yong1 , JIA T ian-zhu2
(Pharmacy Col lege o f Henan Universi ty , Kai feng , 475001 , China;2.Liaoning Col lege o f Trad i-
tional Chinese Medicine , S henyang ,110032 , China)
Abstract:Objective:To e stablish an RP-H PLC method for the allantoin in co rn silk , w hich de te rmined the quantity of
allantoin.Methods:The chromatog raphic conditions included DiamonsilTM C18 co lumn (150 mm×4.6 mm)and the mobile
phase consisted of chlo ro form-me thanol-wa te r(0.012∶0.5∶100).The de tection waveleng th w as at 224 nm.Results:al-
lantoin showed a good linear rela tionship at the range of 0.108 ～ 0.972 μg , r =0.999 9.The average recovery rate was
97.5% and RSD w as 1.62%.Conclusion:The me thods are accurate and quick , and can be used fo r the quality contro l of
allantoin in Co rn silk.
Key words:Allantoin;　RP-HPLC;　Co rn silk
　　玉米须最早药用记载见于《滇南本草》。为禾本科植物玉蜀 黍 Zea mays L.的干燥花柱和柱头。能够利尿消肿 , 降血压。临
床用于肾炎水肿 , 小便不利 , 湿热黄疸 , 高血压症。为中国药典
1977 年版收载品种[ 1] 。 玉米须含有皂苷 、多糖和尿囊素等成
分[ 2 , 3] ,尿囊素能修复上皮组织 , 促进皮肤溃疡和伤口愈合 , 具有
生肌作用 ,可用于胃及十二指肠溃疡[ 4] 。文献报道尿囊素的含量
测定多采用 H PLC 法和薄层扫描法[ 5 ～ 7] , 玉米须中尿囊素的含
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时珍国医国药 2005 年第 16 卷第 10 期 LISHIZHEN MEDIC INE AND M ATERIA M EDICA RESEARCH 2005 VOL.16 NO.10