全 文 ：十革番cMn曲eTraditionalandHerbalDrugs第38卷第11期2007年11月·1685·
青龙衣多糖对Stso小鼠红细胞膜唾液酸水平、
ATP酶活性及膜电位的影响
汲晨锋1，肖 风2，季宇彬1
(1．啥尔滨商业大学生命科学与环境科学研发中心。黑龙江哈尔滨150076}2．哈尔滨商业大学
药物研究所博士后科研工作站，黑龙江哈尔滨150076)
摘要：目的考察青龙衣多糖对S。ao荷瘤小鼠红细胞膜唾液酸(SA)的量、Na+，K+一ATP酵和Ca+，Mg+一ATP
酶活性，以及红细胞膜电位的影响。方法应用试剂盒测定Sm荷瘤小鼠红细胞膜SA的量、红细胞膜Na+．K+-
ATP酶及Ca抖．Mg抖-ATP酶的括性。剃用流式细胞仪测定s瑚荷癌小鼠红细胞膜电位。结果青龙衣多糖能增
加SⅢ荷瘤小鼠红细胞膜表面SA的量，3个剂量组作用显著(P
关键词：青龙衣多糖；唾液酸(sA)INa+，K4=-ATP醇}Ca抖，MgZ4-_ATP酶，膜电位
中盈分粪号：R286．91 文献标识码：A 文章编号t0253—2670(2007)11—1685—03
EffectofQinglongyipolysaccharideonsialica idlevel，ATPaseactivity，
andmembranepotentialinerythrocytesofSⅢmice
JIChen—fen91，XIA0Fen92，JIYu—binl
(1．CanterofResearchandDevelopmentOnLifeSciencesandEnvironmentalSciences，HarbinUniversity
ofCommerce，Harbin150076．Chinal2．PostdoctalResearhofInstituteofMateriaMedea，
HarbinUniversityofCommerce，Harbin150076，China)
Abstract：ObjectiveTostudytheffectsofQinglongyipol saccharideonsialica id(SA)content，
Na+，K+-ATPandCa2+，M92十一ATPaseactivity，andmembranepot ntialinerythrocytesofSmmice．
MethodsU ingKitodeterminetheSAcontenta dNa+tK-kATPase，Ca”，Mg”一ATPaseactivity，
usingflowcytometrytodeterminethem mbranepot ntialoferythrocytesofS18。mice．ResultsInthe
treatedgroupswiththreedoses，itshowedQinglongyipol saccharidecouldmaketheSAcontenti creased
(P<0．05)，theac ivitiesofNa+，K+一ATPaseandCa2+，M92+一ATPa8eenh nced(P<0．05)，andthe
membranepotentialinerythrocytesofSI$omiceadvanced；Amongthem，low—dosegr upwasremarkable
(P<0．05)，middle—andhigh dosegroupswereveryremarkable(P<0．01)．ConclusionQinglongyi
polysaccharidecanenhanceth rythrocyteimmunity，whichmaybeoneofitsmostimportantantitumor
mechanisms．
Keywords：Qinglongyipo[ysaccharide；sialicacid(SA)}Na+，K+一ATPase；Ca2+，Mg抖一ATPase}
membranepot ntial
青龙衣是胡桃科胡桃树属植物胡桃Juglans
mandshuricaMaxim．和胡桃楸JuglandsragiaL．
未成熟果实的肉质果皮，为民间常用中药，其药理作
用广泛。近年来对青龙衣的临床应用已经较为广泛，
主要用于抗肿瘤治疗，但青龙衣抗肿瘤确切作用机
制并不明确。本实验在前期研究基础上口“]，从红细
胞膜功能角度探讨青龙衣多糖抗肿瘤作用机制，特
别针对红细胞膜唾液酸(sA)、ATP酶、膜电位间相
互关系的影响。
1材料与方法
1．1 实验动物及瘤株：昆明种小鼠，体重(20士
2．O)g，雄性，哈尔滨医科大学动物实验中心提供}
S。。。(肉瘤)购自黑龙江省肿瘤医院。
1．2主要试剂：青龙衣多糖(质量分数70．08％，
鉴萎是智：眢紧省蒜鲁学基金项目(30600816),高等学校博士学科点专项科研基金(20060240001)
作者俺介：恶毒薏嚣嚣}五；’6男692’黑2聋要△i墨：：嚣毒悬i墨志痉嚣争事抗肿瘤药物研究。
万方数据
·1686· 中革焉chin器eTraditionalandHerhdDrugs第3B卷第11期2007年11月
哈尔滨商业大学药物研究所提供)，5-氟尿嘧啶(5一
FU，上海旭东海普药业有限公司)；蛋白定量试剂
盒、SA对照品(浓度1mmol／L)、ATP酶测试试剂
盒、5一甲基苯二酚，均购自南京建成生物工程研究
所；罗丹明123(Rhodamine123，Sigma公司)；溶
液均用重蒸水配制，使用前经0．45p．m滤膜滤过。
1．3主要仪器：低温高速离心机(Beckman)，751
分光光度计(上海第三仪器厂)。EPICS--XL流式
细胞仪(Beekman)。
1．4实验方法
1．4．1小鼠肿瘤模型的建立：将接种后7d生长良
好的S。小鼠，颈椎脱臼处死，置75％酒精浸泡5
rain，腹部皮肤消毒后，剥开腹部皮肤，用无菌注射
器抽取乳白色的浓稠腹水(3～5mL)，放人无菌容
器内，置冰块中保存。另取少量腹水，作为观察细胞
形态及细胞计数用，癌细胞数为97％以上方可使
1．4．4对S。小鼠红细胞膜表面SA量的影响：按
SA测定试剂盒说明操作，于560am波长处，空白管
调零读取各管吸光度(^)值，以此表示SA的量。
1．4．5对S。。小鼠红细胞膜Na+tK十_ATP及
Ca”，Mg”一ATP酶活性的影响：采用试剂盒方法
测定。酶活性以每小时每毫克蛋白所产生的无机磷
的量表示，单位为#mol／(mg·h)。
1．4．6对S。。小鼠红细胞膜电位的影响：调整红细
胞浓度5X106／mL，取200pL红细胞悬液加人200
pL罗丹明123(终质量浓度为lOPg／mL)，37℃
水浴30rain，不断震荡，使其充分染色。加人1mL
PBS，3000r／rain离心5min，弃上清液，洗涤3次；
最后加入0．5mLPBS，充分吹散细胞，300目尼龙
网滤过到流式管中上流式细胞仪检测，激发波长
488nm，发射波长530nm，每个样本采集10000个
细胞。
用，腹水用无菌生理盐水1t 4稀释，使肿瘤细胞数 1．5数据处理：用SPSSII．5软件处理，各组数据
为5×106／mL。取配制好的细胞悬液，无菌操作小以：士s表示，样本比较采用方差分析检验。
鼠左前腋sc接种，每鼠接种0．2mL。 2结果
1．“2实验分组、给药剂量及途径：模型小鼠随机 2．1对s。小鼠红细胞膜表面sA量的影响：结果
分为5组，每组10只，青龙衣多糖低、中、高剂量 见表1。青龙衣多糖低、高剂量组与模型组比较，差
(25、50、100mg／kg)组；阳性对照组(5一氟尿嘧啶异显著(P<0．05)，青龙衣多糖中剂量组能显著升
25mg／kg)；模型组(同体积生理盐水)；另取lo只高s。小鼠红细胞膜表面sA的量，与模型组比较，
正常小鼠为正常对照组。于接种后24h开始ip给 差异非常显著(P
后24h眼球采血。 Ca”，Mg”一ATP酶活性的影响：结果见表1。对于
1．4．3红细胞膜的制备：取全血，3000r／rain离Na+，K+．ATP酶活性来说，青龙衣多糖各剂量组
心，l；3洗涤3次，1·1悬浮在生理盐水中。加人均能升高SIS0荷瘤小鼠红细胞膜Na+，K+一ATP酶
lOmmo]／LTris—HCI(1l 20)，4℃溶血24h，然后 活性，与模型组比较，差异显著(P<0．05)。对于
以12000r／rain离心30rain，弃上清。5mmol／LCa”，Mg”．ATP酶活性来说，青龙衣多糖各剂量
PBS洗涤3次(同样转速)，吸取白色沉淀物，将其组同样能升高s，。。荷瘤小鼠红细胞膜Ca”，Mg”一
1。1悬浮在PBS溶液中。用蛋白试剂盒定量膜蛋白，ATP酶活性，青龙衣多糖低剂量组与模Mint比较，
将样品最终称释至lmg／mL，放置低温冰箱备用。 差异显著(P
Table1 Eff∞tofQinglongylpolysaccharideonSAcontent，Na+，K+一ATP∞eandCa”，Mg”·ATP∞eacUvRy
蚰dmemb咖eP0tentiaIinerythrocyte0rS__mI∞(；士j，4=lO)
与模型组比较{’P
中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第ll期2007年11,El· 687·
型组比较，差异非常显著(P
表l。S。。小鼠经药物作用后，Rhl23荧光染色显示
红细胞膜膜电位明显升高。青龙衣多糖低剂量组与
模型组比较，差异显著(P<0．05)；而5-FU组，青
龙衣多糖中、高剂量组与模型组比较，差异非常显著
(P<0．01)，其中，青龙衣多糖中、高剂量组的药效
比阳性对照组好。
3讨论
红细胞是血液循环中最重要的固有免疫细胞，
在抗肿瘤免疫反应中，红细胞不仅具有识别、黏附、
浓缩、杀伤抗原，清除循环免疫复合物，增强NK细
胞、LAK细胞和淋巴细胞杀伤肿瘤细胞的能力，参
与机体免疫调控，而且在完整的tl我调控系统，受到
神经内分泌系统、红细胞免疫调节因子等多种因素
的调节。SA是糖蛋白和糖脂糖链末端的残基，广泛
分布在哺乳动物细胞膜表面(包括红细胞)，为细胞
表面负电荷的主要来源，亦为胞膜受体的重要成分，
参与细胞分化、识别、黏附等许多重要生理过程，决
定着细胞膜的特征。
细胞膜Na+，K+一ATP酶和Ca”，Mg”一ATP
酶维持细胞Na+、Ca”内环境的稳定，维持细胞内
外的渗透压平衡和跨膜电化学梯度。当Na+，K+。
ATP酶和Ca”，Mgz+-ATP酶活性降低，就会引
起细胞内高Na+、Ca”。
青龙衣多糖能增加S。小鼠红细胞膜表面SA
的量，则意味着负电荷的量增加，SA与Ca”结合，
增强红细胞膜表面的Na+，K+一ATP酶和Ca”，
Mg”一ATP酶活性，使红细胞排钠排钙能力增强，
这就激活了离子的跨膜转运，从而升高了红细胞膜
膜电位水平。本实验表明青龙衣多糖能提高S：。荷
瘤小鼠红细胞膜表面SA的量，升高红细胞膜表面
的Na+，K_-ATP酶和Ca”，Mg”一ATP酶活性，
从而使S，。。荷瘤小鼠红细胞膜电位升高；对红细胞
具有保护作用，增强了红细胞的免疫功能，这可能是
青龙衣多糖抗肿瘤的作用机制之一。
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山楂叶总黄酮对高脂血症大鼠血管功能损伤的保护作用
杨宇杰1，王春民2，党晓伟2，左彦珍1
(1．承德医学院，河北承德067000；2．承德颈复康药业集团有限公司，河北承德067000)
摘要：目的探讨山楂叶总黄酮(FHL)对高脂血症大鼠血管功能损伤的保护作用及机制。方法采用维生素D；
加脂肪乳剂造成大鼠高脂血症模型，观察离体血管舒张及收缩反应，同时检测血清总胆固酵(Tc)、甘油三酯
(TG)、低密度脂蛋白一胆固醇(LDL—c)、高密度脂蛋白一胆固醇(HDLc)、NO和内皮素(ET)的量。结果FHL可
明显降低血清Tc、TG和LDL-c的量，提高HDL—C与TC比值。FHL可增强大鼠离体血管舒张及收缩反应，且可
使血清NO的量升高，ET的量降低。结论FHL具有调血脂作用，对高脂血症所致大鼠血管功能损伤具有明显保
护作用。其对血管内皮依赖性舒张反应的保护作用可能与增加NO，减少ET合成、分泌有关。
关键词：山楂叶总黄酮}高脂血症}血管功能损伤
中图分类号：R286．26 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)11一1687—04
ProtectionofflavonoidsinhawthornIeafagainstvasculardisfunction
ofhyperlipoidemicrats
YANGYu—jiel，WANGChun—rain2，DANGXiao—wei2，ZUOYan—zhenl
(1．ChetlgdeMe icalCo legetChengde067000，China；2．CheflgdeJFKPharmaceutic
GroupCo．，Ltd．，Chengde067000，China)
Keywords：flavonoidsinhawthornlear(FHL)lhyperlipoidemiatvascul rdisfunction
嚣莩品霁：翟辈罴哥景9一)，女，医学硬士，副教授，研究方向为中药新药开发与研究。T。I，(0314)2291149
万方数据
青龙衣多糖对S180小鼠红细胞膜唾液酸水平、ATP酶活性及膜
电位的影响
作者： 汲晨锋， 肖凤， 季宇彬， JI Chen-feng， XIAO Feng， JI Yu-bin
作者单位： 汲晨锋,季宇彬,JI Chen-feng,JI Yu-bin(哈尔滨商业大学,生命科学与环境科学研发中心
,黑龙江,哈尔滨,150076)， 肖凤,XIAO Feng(哈尔滨商业大学,药物研究所博士后科研工作
站,黑龙江,哈尔滨,150076)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(11)
被引用次数： 2次
参考文献(4条)
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引证文献(2条)
1.汲晨锋.肖凤.季宇彬 青龙衣多糖对S180小鼠红细胞Ca2+,Mg2+-ATP酶活性及[Ca2+]i的影响[期刊论文]-中草药
2008(12)
2.杜艳萍 青龙衣抗癌作用研究进展[期刊论文]-安徽农业科学 2012(4)
本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200711032.aspx