全 文 ：·1842· 中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月
青龙衣多糖对S180小鼠红细胞Ca2+，Mgz+-ATP酶活性及[Ca2+]t的影响
汲晨锋，肖 风，季宇彬
(哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心，教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心，黑龙江哈尔滨 150076)
摘 要：目的 考察青龙衣多糖对S。s。小鼠红细胞Ca”，M924-_ATP酶活性及[Ca2+]．的影响。方法青龙衣多糖
对Stso小鼠ip给药7d，比色法结合试剂盒测定s。。。小鼠红细胞膜Ca“，Mg”一ATP酶的活性，采用激光共聚焦显
微镜结合Fluo一3／AM荧光探针测定红细胞内[-Ca2+]i。结果青龙衣多糖能提高S。。。小鼠红细胞膜Ca”，Mg”一
ATP酶活性(尸
关键词：青龙衣多糖；Ca”，Mg”一ATP酶；[Ca”]．
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)12—1842—03
EffectofQinglongyipolysaccharideonCa2+，M92+_ATPaseactivityand[-Ca2+]。
inerythrocytefS180mice
JIChen—feng，XIAOFeng，JIYu—bin
(MinistryofEducation，ResearchC nterofLifeSciencesandEnvironmentalSciences，EngineeringRes a chCenter
ofNaturalAnticancerDrugs，HarbinUniversityofCommerce，Harbin150076，China)
Abstract：ObjectiveTostudytheffectofQinglongyipolysaccharideonCa2+，M92十一ATPaseacti-
vityand[Ca2+]iinerythrocytefS180mice．MethodsS180MicewereipadministratedwithQinglongyi
polysaccharidefor7d．TheCa2+，M92+一ATPaseactivitywasobservedbyspectrophotometerwithtestkit
andthe[Ca抖]iinerythrocytefS180micewasmeasuredbylaserscanningcofocalmicroscope(LSCM)
withFluo一3／AM．ResultsIt howedthatQinglongyipolysaccharideincreasedCa2+，M92+一ATPaseacti—
vity(P
creasetheCa抖，M92+-ATPaseactivityinerythrocytefS180mice，resolvetheobstacleofiontrans—
portion，stabilizethemetabolismofenergyandmaterials，andmaintainthenormalconcentrationofCa2+．
Keywords：Qinglongyipolysaccharide；Ca2十，M92+一ATPase；[Ca2+]i
红细胞膜内的Ca2+，M92+-ATP酶是一个有
效的钙泵，能将过多的Ca2+排出，维持细胞内Ca2+
正常浓度。当病理状态时，红细胞的ATP酶活性降
代，影响了红细胞的正常生理功能n]。细胞内过量的
钙对于红细胞是有害的，通过膜上钙泵依赖于ATP
主动撵出细胞内钙，如果细胞内Ca2+超过钙泵排出
能力或钙泵功能异常，将使细胞内钙积聚，钙沉积在
细胞膜上，使红细胞膜丧失其柔韧应变的性质，变得
僵硬，降低可塑性，使原双凹圆盘形红细胞变成有很
多短的有规则突起的球状体——棘状细胞心~4]。前
期实验表明，青龙衣多糖对S，。。小鼠有抗肿瘤作
用¨’6]。在此基础上，本实验主要研究青龙衣多糖对
S。∞小鼠红细胞Ca2+，Mgz+-ATP酶活性及胞内
Ca2+浓度[Ca2+]，的影响，从而进一步考察其对红细
胞膜功能的影响。
1材料
1．1药物及试剂：青龙衣多糖(哈尔滨商业大学生
命科学与环境科学研究中心提供，质量分数
66．08％)；5-氟尿嘧啶(5一FU，上海旭东海普药业有
限公司)；Fluo一3／AM荧光探针(美国Molecular
Probe公司)；ATP酶测试试剂盒、蛋白定量试剂盒
(购自南京建成生物公司)。
1．2动物及瘤株：昆明种小鼠，体质量(20±2)g，
雌雄各半(哈尔滨医科大学动物实验中心提供)；肉
收稿日期：2008—05—02
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30600816)；高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(20060240001)
作者简介：汲晨锋(1978一)。男，黑龙江人．助理研究员，博上生，主要从事抗肿瘤药物研究。
Tel：(0451)84866922E—mail：smilejcf001@sina．tom
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月·1843·
瘤S。。。(黑龙江省肿瘤医院)。
1．3主要仪器：紫外一可见分光光度计，激光共聚焦
系统(LeicaSP2)。
2方法
2．1实验分组：小鼠随机分成6组，每组10只，分
别为对照组(生理盐水)，模型组，阳性对照组(5一
Fu)，青龙衣多糖低、中、高剂量组。
2．2动物模型制备方法：无菌条件下抽取接种第7
天的生长良好的SⅢ荷瘤小鼠腹水(活癌细胞数>
97％)，无菌生理盐水1：4稀释，按0．2mE／只(细
胞浓度约2×107／mL)，无菌操作小鼠右前腋皮下
接种。对照组不接种。
2．3 给药剂量、途径及观察方法：青龙衣多糖高、
中、低剂量(100、50、25mg／kg)组，阳性对照组给
5一Fu25mg／kg，模型组和对照组给同体积生理盐
水。于接种24h后开始无菌操作ip给药，每只小鼠
0．2mE／次，每天1次，连续给药7d，停药24h后
眼球采血。
2．4红细胞膜的制备：新鲜血液3000r／rain离心
5min，弃上清液，加PBS3000r／min离心5min，
洗涤3次，再以1：1比例悬浮于PBS，制成红细胞
悬液，血球计数板计数。红细胞悬液加入5mL10
mmol／LpH7．4Tris—HCl溶液，同时加入蛋白酶抑
制剂对甲苯磺酰氟(PMSF)，4’C溶血12h，将所
得红细胞溶血液以12000×g，4℃离心15min，弃
上清液，10mmol／I。pH7．4Tris—HCI溶液洗涤3
次，同上离心，吸取白色沉淀物，最后1：1悬浮在
pH7．4PBS缓冲液中。
2．5红细胞膜蛋白定量：采用考马斯亮蓝法。取样
品0．05mL加入3mL显色液，混匀，静置10min，
于595nm波长处，1cm光径，蒸馏水调零后，测各
管吸光度。计算蛋白的量。
2．6红细胞Ca2+，MgZ+_ATP酶活性的测定：采
用试剂盒方法测定。酶活性以每小时每毫克蛋白所
产生的无机磷摩尔数表示，单位为：pmol／(rag·h)。
2．7 红细胞[-Ca2十]t的测定：新鲜血液加3倍体积
0．1mol／L，pH7．4PBS，3000r／min离心5min，
洗涤4次。准确吸取红细胞沉淀100肛L，PBS定容
至5mL，吸取定容后血液100弘I．，PBS定容至2
mL，即得所需红细胞悬液。准确吸取红细胞悬液
100弘L，加500pL无钙台氏液，200弘LFluo一3／AM
(用DMSO溶解，再加无钙台氏液，终质量浓度为
4}j．g／mL)，37。C避光染色120min，350r／rain，
离心10min，弃上清液，加300pL无钙台氏液，充
分吹散细胞，置于盖玻片上，上激光共聚焦检测。激
发激光488nm，狭缝500btm，扫描激光强度30％，
PMTI30％，物镜40倍。
2．8数据处理：用SPSS11．5软件处理，各组数据
以z±s表示，样本比较采用方差分析检验。
3 结果
3．1 青龙衣多糖对SⅢ小鼠红细胞膜Ca2+，
M92+一ATP酶活性的影响：结果见表1。模型组小鼠
红细胞膜Ca2+，M92十一ATP酶活性降低，青龙衣多
糖各剂量组能升高S。。。小鼠红细胞膜Ca2+，M92+一
ATP酶活性，青龙衣多糖低剂量组与模型组比较，
差异显著(P
活性及红细胞内[Ca2+]I的影响(工士s，庸一10)
TableEffectofQinglongyipolysaccharideOilCa”，
M92+-ATPaseactivityof rythrocyte
membraneand[Ca2+]Iinerythrocyte
ofSⅢmice(；±s。n一10)
剂量／ CaZ+，Mg”一ATP酶／[ca”]i
组别(mg．kg一1)(t．￡m01．mg1．h一1) (荧光强度)· 一1) · · )
与模型组比较：+P
3．2青龙衣多糖对SⅢ小鼠红细胞[-Ca2+]i的影响：
结果见表1。模型组荧光强度值明显大于对照组，说
明SⅢ小鼠红细胞内[-Ca2十]i增加，且模型组之间比
较有非常显著性差异(P
型组相比低剂量组有显著性差异(P
ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷，因
此，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。本
实验则通过此种方法，研究青龙衣多糖对S。。。小鼠
红细胞膜Ca2+，M92+-ATP酶活性的影响。结果表
明，青龙衣多糖可以升高S。。。小鼠红细胞膜Ca2十，
92+一ATP酶活性，从而有利于排除离子跨膜转运
障碍，稳定其能量代谢和物质代谢，恢复红细胞的正
常功能。
细胞内Ca2+作为第二信使和细胞功能的重要
万方数据
·1844· 中草喃 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月
调节者，参与机体许多生理过程和发病机制。Ca2+
引起的红细胞变形能力的下降的主要原因是[7’8]：
Ca2+引起红细胞膜骨架网络的结构改变和脂双层组
成的改变，使膜脂流动性减小；红细胞表面积与体积
比的改变(膜成分的减少，细胞形态的改变)；
Gardos效应和Hb的聚集使细胞内黏度增加；Ca2+
引起膜蛋白的水解、聚集、交叉连接等结构改变使红
细胞膜机械特性发生变化。研究结果表明，当机体处
于肿瘤状态时，红细胞内[Ca2+]i升高。给药后，红细
胞内ECa2+]i降低，各给药组与模型组之间相比，均
有不同程度的差异，提示青龙衣多糖通过提高红细
胞表面钙泵活性，排出Sm小鼠红细胞内Ca2+，使
ECa2+]；降低，恢复红细胞正常的生理状态和功能。
参考文献：
[1]吴克复．细胞通讯与疾病[M]．北京：科学出版社，2006．
石玉玲，习松．Fluo一3荧光微量法测定人红细胞胞浆内游
离钙离子浓度EJ]．检验医学，2005，20(3)；290—291．
刘群威，汤圣兴，胡焕昭，等．高血压病患者红细胞内ca浓
度及ATP酶活性与红细胞变形性的关系[J]．皖南医学院
学报，2005，24(1)：38—40．
田红燕，马爱群，沈泾锡．高血压患者红细胞ATP含量、红
细胞膜ATP酶活性与钙、镁代谢的研究EJ]．中国分，子心脏
病学杂志，2002，2(5)：183一185．
汲晨锋，肖 风，季宇彬．青龙衣多糖对s180小鼠红细胞膜
唾液酸水平、ATP酶活性及膜电位的影响EJ]．中草药，
2007。38(11)：1685—1687．
季宇彬，马宏图．杨波，等．青龙衣不同提取部位的抗肿
瘤作用研究[J]．中草药，2004，35(Io)：1145—1147．
MasakiT，YasokawaN，TohnishiM．Flubendiamide，a
novelCa2+channelmodulator，revealsevid nceforfunctional
cooperationbetweenCa2+pumpsandCa2+release[J]．
MoleculPharmacol。2006。69(5)：1733—1739．
MoreauB，StraubeS，FisherRJ，以口Z．Ca2+calmodulin—
dependentfacilitationndCa2+inactivationofC 2+release—
activatedCa2+channels[J1．JBioc船m，2005，280(10)：
8776—8783．
复肾降纤宁对糖尿病肾病大鼠的影响及机制研究
陈益山，曹文富’，焦颖华
(重庆医科大学附属第一医院中西医结合科，重庆400016)
摘要：目的 观察复肾降纤宁对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏蛋白激酶C(PKC)、血管内皮生长因子(VEGF)和
血小板衍生生长因子一p(PDGF一口)的影响及对。肾脏的保护作用。方法建立链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病
(DN)大鼠模型，将成模糖尿病大鼠随机分成4组：模型组、复肾降纤宁组、厄贝沙坦组、厄贝沙坦+复肾降纤宁组，
同时取正常大鼠设对照组。各组大鼠采用相应的干预措施处理12周。常规方法检测各组大鼠肾脏指数、血糖、尿素
氮(BUN)、血肌酐(Scr)、尿白蛋白排泄率(uAER)，免疫组化法检测肾PKC和VEGF表达，Westernblotting检
测肾组织PDGF—p的表达，透射电镜观察肾脏超微结构。结果模型组大鼠肾皮质PKC、VEGF和PDGF—p表达显
著升高，肾脏超微结构改变明显，血糖、UAER、BUN、Scr、肾脏指数显著增高；复肾降纤宁组、厄贝沙坦组和厄贝沙
坦+复肾降纤宁组七述指标显著低于模型组(P<0．05)’，肾脏超微结构改变明显改善；厄贝沙坦+复肾降纤宁组
各项指标改善明显优于模型组、复肾降纤宁组和厄贝沙坦组(P
组织纤维化有关。
关键词：复肾降纤宁；糖尿病；蛋白激酶C；血管内皮生长因子；血小板衍生生长因子
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)12—1844一05
EffectofFushenjiangxianningondi beticnephropathyr tsandstudyonitsmechanism
CHENYi—shan，CAOWen—fu，JIAOYing—hua
(DepartmentofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicine，theFirstAffiliatedHospital
ofChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016·China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffeetofFushenjiangxianningonrenalproteink naseC
(PKC)，renalvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)，renalplatelet—derivedgrowthfactorp(PDGF一
13)，andrenalprotectionindiabeticnephropathy(DN)rats．MethodsThediabeticSDratsinducedby
STZweredividedintofourgroups：diabeticeontrolgroup，Fushenjiangxianninggroup，Irbesartangroup，
收稿日期：2008—07—11
基金项目：重庆市卫生局资助项目(渝中医[2003132号B一26)
作者简介：陈益山，重庆石柱人。在读硕士，主要研究方向为代谢病与肾病中西医结合治疗研究。E—mail：ehenys06311@163．eom
*通讯作者曹文富
]
]
]
]
]
]
]
乜
口
I!I
口
№
口
醢
万方数据
青龙衣多糖对S180小鼠红细胞Ca2+,Mg2+-ATP酶活性及
[Ca2+]i的影响
作者： 汲晨锋， 肖凤， 季宇彬， JI Chen-feng， XIAO Feng， JI Yu-bin
作者单位： 哈尔滨商业大学,生命科学与环境科学研究中心,教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心,黑龙
江,哈尔滨,150076
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(12)
被引用次数： 3次
参考文献(8条)
1.吴克复 细胞通讯与疾病 2006
2.石玉玲;习松 Fluo-3荧光微量法测定人红细胞胞浆内游离钙离子浓度[期刊论文]-检验医学 2005(03)
3.刘群威;汤圣兴;胡焕昭 高血压病患者红细胞内Ca浓度及ATP酶活性与红细胞变形性的关系[期刊论文]-皖南医学
院学报 2005(01)
4.田红燕;马爱群;沈泾锡 高血压患者红细胞ATP含量、红细胞膜ATP酶活性与钙、镁代谢的研究[期刊论文]-中国分
子心脏病学杂志 2002(05)
5.汲晨锋;肖凤;季宇彬 青龙衣多糖对S180小鼠红细胞膜唾液酸水平、ATP酶活性及膜电位的影响[期刊论文]-中草
药 2007(11)
6.季宇彬;马宏图;杨波 青龙衣不同提取部位的抗肿瘤作用研究[期刊论文]-中草药 2004(10)
7.Masaki T;Yasokawa N;Tohnishi M Flubendiamide,a novel Ca2+channel modulator,reveals evidence for
functional cooperation between Ca2+ pumps and Ca2+release[外文期刊] 2006(05)
8.Moreau B;Straube S;Fisher R J Ca2+calmodulindependent facilitation and Ca2+inactivation of
Ca2+releaseactivated Ca2+channels[外文期刊] 2005(10)
本文读者也读过(10条)
1. 季宇彬.汲晨锋.马宏图.JI Yu-bin.JI Chen-feng.MA Hong-tu 青龙衣冷、热乙醇提取物对H22小鼠肿瘤细胞膜
生化功能影响的研究[期刊论文]-中国中药杂志2005,30(7)
2. 汲晨锋.肖凤.季宇彬.JI Chen-feng.XIAO Feng.JI Yu-bin 青龙衣多糖对S180小鼠红细胞膜唾液酸水平、ATP酶
活性及膜电位的影响[期刊论文]-中草药2007,38(11)
3. 季宇彬.马宏图 青龙衣提取物对荷瘤小鼠细胞膜流动性的影响[期刊论文]-中草药2004,35(12)
4. 徐巍.高景泰.杨志红.高奎滨 青龙衣粉针剂抑瘤与免疫作用的实验研究[期刊论文]-中国中医基础医学杂志
2002,8(10)
5. 季宇彬.陈海继.汲晨锋.JI Yu-bin.CHEN Hai-ji.JI Chen-feng 青龙衣多糖的提取及单糖组分和质量分数测定
[期刊论文]-哈尔滨商业大学学报（自然科学版）2006,22(4)
6. 徐巍.郭彩玲.高奎滨 青龙衣粉针剂对人肝癌细胞株的作用[期刊论文]-中医药学报2002,30(5)
7. 季宇彬.陈海继.汲晨锋.JI Yu-bin.CHEN Hai-ji.JI Chen-feng 青龙衣多糖对H22型肿瘤细胞的ATPase活性影响
的研究[期刊论文]-药品评价2006,3(6)
8. 任生.孟丽.王桂花 中药青龙衣注射剂复合化疗药物介入治疗肺癌13例报告[期刊论文]-中国中医基础医学杂志
2000,6(7)
9. 孙桂君.李越 复方青龙衣颗粒抗肿瘤作用的实验研究[期刊论文]-中国中医药科技2004,11(6)
10. 刘薇.季宇彬 青龙衣毒性作用及体内抗肿瘤作用的实验研究[期刊论文]-哈尔滨商业大学学报(自然科学版)
2004,20(1)
引证文献(3条)
1.季宇彬.严琴琴.曲中原.邹翔.陆婉 正交试验法优选青龙衣中胡桃醌的提取工艺[期刊论文]-现代药物与临床
2009(3)
2.季宇彬.袁会成.高世勇.孙海波 龙葵多糖细胞毒活性物质基础研究[期刊论文]-中草药 2011(11)
3.俞文婕.王添敏.翟延君 胡桃楸抗肿瘤作用及其机制研究概况[期刊论文]-中国实验方剂学杂志 2012(20)
本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200812029.aspx