全 文 ：·348· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
制备型HPLC法分离2个茅莓皂苷单体成分
都述虎1’2，刘文英¨，饶金华2，白娟2
(1．中国药科大学药物分析教研室，江苏南京210009；2．安徽省医学科学研究所，安徽合肥230061)
茅莓RubusparvifoliusL．是蔷薇科悬钩子属
植物[1]，有清热凉血、活血止血等多种功能。民间用
于妇科止血，疗效显著，其主要有效成分为三萜皂
苷。目前由于缺少此类对照品，无法有效开展相关质
量指标检测工作。据文献报道[2]从茅莓中分得2个
三萜皂苷：甜茶苷R1(suavissimosideR1)和苦莓苷
F。(niga—ichigosidesF。)，主要采用柱色谱法，操作步
骤烦琐，结构确证仅有碳谱和氢谱。因其结构中23
位取代基分别是一COOH和一CH。H(图1)，所以性质
相近，难以用常规的分离方法得到纯度较高的对照
品。本研究以甜茶苷R。为目标分离产物，将70％乙
醇浸膏经大孑L吸附树脂和硅胶前处理，得到具有较
高含量甜茶苷R。的混合物后，使用制备型高效液相
色谱同时分离出甜茶苷R。A和苦莓苷F，2个单体，
操作步骤简便，并经IR、MS和2D—NMR综合解析
确证(另文报道)，满足了常规定量分析检测的需求。
suavissimosideRI：R=COOH
niga—ichigosideF1：R—CH20H
图1 2种茅莓皂苷结构
Fig．1SturcturesofsuavissimosideRlandniga—
ichigosidesFlfromR．parvifolius
1仪器、材料与试剂
SSI2000制备型高效液相色谱色谱仪(天津
LabAlliance公司)；HP1050型高效液相色谱色谱
仪(美国HP公司)；LeitzWe lar显微熔点仪(德
国)；MagnaFTIR750型傅里叶红外光谱仪(美国
Nicolet公司)；Agilent1100型(LC—MSDSystem，
ESIMode)质谱仪(美国Agilent公司)；BrukerAV
500型核磁共振仪(瑞士Bruker公司)。
茅莓药材经安徽中医学院王德群教授鉴定为蔷
薇科悬钩子属植物茅莓R．parvifoliusL．的干燥
根；D，。，型大孔吸附树脂(天津农药股份有限公司树
脂分公司)；柱色谱用硅胶(100～200目，青岛海洋
化工厂)，薄层色谱硅胶板(10cm×5cm，烟台化学
工业研究所)；所用试剂均为分析纯。
2条件和方法
2．1 色谱条件：分析色谱柱：KromasilC。。(250
mm×4．6mm，5v-m)，流动相：甲醇一水(46：54)，体
积流量：1．0mL／min，检测波长：209Dm，柱温：室
温，进样量：10肛L。
制备色谱柱：KromasilC18(250mm×10mm，
10弘m)，流动相：甲醇一水(40：60)，体积流量：6．0
mL／min，检测波长：204nm，柱温：室温，进样量：
200ttL。
2．2茅莓皂苷混合物样品的制备：将茅莓根10kg
切片减压烘干至恒重，70％乙醇提取，滤过，回收乙
醇得浸膏，水浴蒸至无醇味，加2～3倍量热水溶解，
放置冷却，滤过。滤液上大孑L吸附树脂柱，依次用蒸
馏水、40％乙醇洗脱，收集40％乙醇洗脱液[3]，减压
蒸干，硅胶柱色谱分离，氯仿一甲醇一水(50：10：1；
40：10：1；30：10：1)梯度洗脱，收集氯仿一甲醇一
水(30：10：1)流份，TLC监测，甲醇重结晶，得白
色针状结晶约2g(甜茶苷R。和苦莓苷F，的混合
物)，得率约0．02％。
取上述白色针状结晶适量，用甲醇溶解，微孔滤
膜滤过，进样，分析谱图见图2，可知甜茶苷R。纯度
约为82．31％。
2．3制备色谱分离：将上述所得到白色针状结晶用
甲醇溶解，作为制备色谱用样品溶液，每次进样200
肛L，根据检测结果收集相应流出液，减压旋转蒸发，
分别收集得到甜茶苷R。和苦莓苷F，。
3鉴定
收稿日期：2004—05—04
基金项目：“十五”安徽省重大科技专项资助课题(01803014)；安徽省优秀青年科技基金资助皖科基[2001]02—23)
作者简介：都述虎，男，研究员，博士生。 E—mail：shuhudul@yahoo．tom．an
*通讯作者Tel：(025)83271251E—mail：wycpu@tom．tom
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月·349·
12．730
I
I 15．034
遗
0，00 400 8．00 1200 1600 20002400 2800
时间t／min
1一甜茶苷Rl2一苦莓苷Fl
1一suavissimosideR1 2-niga—ichigosideFl
图2茅莓皂苷混合物样品的分析色谱图
Fig．2HPLCchromatogramofsuavissimosideRl
andniga—ichigOsideFlmixture
甜茶苷R1(suavissimosideR1)：C36H58012，白色
针状结晶(Me0H)，mp255～257℃(分解)，易溶于
吡啶，可溶于甲醇、乙醇和水。L—B试验和Molish试
验均呈阳性。ESI—MS(m／z)：703(M+Na)+。IRv熙
cm：3420、2932、1720、1455、1074、1031。
1H—NMR(C5D5N)艿：1。15，1．19，1．37，1．61，1．70
(各3H，S，5×CH3)，1．05(3H，d，L厂=6．4Hz，
CH，CH)，2．91(1H，S，H一18)，4．17～4．47(6H，H一
27，37，47，5’，67)，5．53(1H，brs，H一12)，6．26(1H，d，
t，一8Hz，H一17)。13C—NMR(C5DsN5)艿：48．28(C一1)，
68．37(C～2)，80．73(C一3)，54．11(C一4)，52．0l(C一
5)，21．20(C一6)，33．00(C一7)，40．43(C一8)，47．89
(C一9)，37．36(C—10)，24．20(C一11)，127．89(C一12)，
138．98(C一13)，41．81(C一14)，28．85(C一15)，25．78
(C—16)，47．97(C一17)，54．49(C一18)，72．36(C一19)，
41．84(C一20)，26．39(C一21)，38．30(C一22)，179．74
(C一23)，13．13(C一24)，17．17(C一25)，17．09(C一26)，
24．53(C一27)，176．60(C一28)，26．69(C一29)，16．38
(C一30)，95．53(C一17)，73．75(C一27)，78．64(C一37)，
71．00(C一47)，78．90(C一57)，62．10(C一67)。以上数据
与文献一致[4]。
苦莓苷F1(niga—ichigosidesF1)：C36H58011，白
色针状结晶(MeOH)，mp229～231℃(分解)，易溶
于吡啶，可溶于甲醇、乙醇和水。L—B试验和Molish
试验均呈阳性。ESI—MS(m／z)：689(M+Na)+。IR
v。K。B。rcm～：3427、2930、1728、1630、1460、1071。
1H—NMR(CsD5N)8：0．94，1．09，1．24，1．28，1．63
(各3H，S，5xCH3)，0．92(3H，d，，=6．5Hz，
CH。CH)，2．38(1H，S，H一18)，4．20～4．54(6H，H一
27，37，47，57，67)，5．30(1H，brs，H一12)，6．30(1H，d，
t，一8Hz，H一17)。”C—NMR(C5D5N5)8：48．02(C一1)，
69．02(C一2)，78．76(C一3)，43．67(C-4)，48．36(C一
5)，18．92(C一6)，33．37(C一7)，40．84(C一8)，48．02
(C一9)，38．57(C一10)，24．32(C一11)，127．18(C一12)，
138．38(C一13)，42．35(C一14)，30．05(C一15)，26．30
(C一16)，48．78(C一17)，54．56(C一18)，72．86(C一19)，
42．22(C一20)，26．84(C一21)，37．79(C一22)，67．21
(C一23)，14．29(C一24)，17．61(C一25)，17．71(C一26)，
24．66(C一27)，175．71(C一28)，27．16(C一29)，16．74
(C一30)，94．25(C一17)，74．19(C一27)，79．02(C～37)，
71．59(C一47)，79．15(C一57)，62．68(C一67)。以上数据
与文献一致[5]。
4讨论
4．1 流动相比例和体积流量的确定：根据分析色谱
流动相的组成来调节制备色谱流动相的组成。适当
增加流动相中水的比例，可提高色谱峰的分离度，但
水量过多，制备时间过长。综合考虑流动相比例和体
积流量的关系，本实验选择流动相甲醇一水(40：
60)，体积流量6．0mL／min，整个制备分离在30
min内完成。
4．2被分离物质的收集：在制备型分离工作中，需
使用大量的洗脱溶剂，因此要采用适当的收集器。如
有可能，应将溶剂回收后再使用。在使用反相或聚合
物吸附剂进行分离时，有时从含水量大的溶液中回
收样品较困难。如以甲醇一水为洗脱液，可将收集的
流份用甲醇稀释5倍，然后减压旋转蒸干，用甲醇将
纯化合物溶解出来。另一方法是将收集的样品加到
SephadexLH一20柱上，以水洗除HPLC洗脱液中含
有的其他成分，而后用甲醇将纯化合物洗下。
4．3边缘切割和循环色谱分离：由于甜茶苷R。和
苦莓苷F。色谱峰相距很近，色谱系统的选择性不足
以将该混合物分开，因此采用循环色谱分离。方法是
在确定最佳分析型分离条件后进行制备型色谱分
离，通过切割相应色谱峰的前部和后部可获得纯甜
茶苷R。和苦莓苷F。。利用此法，对两者的混和物
(循环组份)重新进行分离，进一步获得了纯品。如果
一次循环分离还未将两者部分完全分开，则可重复
进行循环色谱分离。
4．4单体纯度测定：由于至今国内尚无茅莓皂苷类
成分的法定对照品，本次实验采用制备型高效液相
色谱分离出甜茶苷R。和苦莓苷F。，经HPLC归一
化法检测2个单体纯度均达到98．o％以上，符合
要求。
References：
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万方数据
·350· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
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青蛇藤的化学成分研究(1I)
郭红丽，周金云+
(中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所，北京100050)
青蛇藤Periplocacalophylla(Wight)Falc．是
萝蘼科(Asclepiadaceae)杠柳属植物。杠柳属植物全
世界约有12种，在我国有4种，主要分布在西南地
区。青蛇藤具有祛风散寒、活血化瘀之功效，四川藏
民用来泡酒，预防及治疗风湿性关节炎。青蛇藤根茎
的乙醇提取物及醋酸乙酯、正丁醇萃取部位显示较
好的抗炎及抗肿瘤活性。前文[13报道了青蛇藤醋酸
乙酯萃取部分9个化合物的分离和结构鉴定，本文
继续报道从中分离得到的另外7个化合物，通过理
化常数、光谱数据分析及化学方法鉴定了结构，分别
为：glycosideE(I)，cleomiscosinA(Ⅱ)，芥子酸
(sinapicacid，Ⅲ)，香草醛(vanillin，IV)，水杨酸
(salicylicac d，V)，(67一O—palmitoyl)一sitosterol一3一
O—B—D—glucoside(VI)，正三十醇(1-triacontanol，
Ⅶ)。所有化合物均为首次从青蛇藤中分离得到。
1仪器、试剂与材料
熔点用XT。一100x显微熔点仪测定；旋光用
Perkin—Elmer241型旋光仪测定；质谱用ZAB一2F
型质谱仪测定；核磁共振用Mercury300型和INO—
VA一500型核磁共振仪测定；色谱及重结晶用溶剂
均为分析纯；色谱用硅胶(200～300目)均为青岛海
洋化工厂生产；SephadexLH一20(Pharmacia进口)
为上海化学试剂厂分装生产；RA型大孑L树脂为北
京化工七厂生产。青蛇藤根茎采自四川凉山金沙江
边，由本所宋万志研究员鉴定。
2提取分离
青蛇藤根茎24kg，粉碎，95％乙醇回流提取3
次，得棕黑色浸膏2．5kg，适量水溶解后依次用石
油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，分别得萃取物400、
200、540g。醋酸乙酯萃取物170g经大孔树脂以不
同体积分数的醇洗脱，分别得30％、50％、80％、
95％醇洗脱物8．9、40．1、52．5、30g。50％醇洗脱物
经硅胶柱色谱分离，氯仿一甲醇梯度洗脱，再经
SephadexLH一20分离纯化得化合物I～V，95％醇
洗脱物经硅胶柱色谱分离，二氯甲烷一甲醇梯度洗脱
得化合物Ⅵ、Ⅶ。
3 结构鉴定
化合物I：无色针状结晶(CH。C1。一MeOH)，mp
239～240oC，Xanthohydrol和Keller—Kiliani反应
均呈阳性。FAB—MS(m／z)：465EM+H]+，447
EM+H—H20]+，316EM—can]+，299，288，185，
131，113，91。1H—NMR(CDCl。，500MHz)占：0．73
(3H，S)，1．01(3H，S)，1．31(3H，d，J一6．5Hz)
1．34(3H，d，t，一6．5Hz)，3．11(1H，t，J一9．0Hz，
can一4)，3．29(1H，dq，J一9．0，6．0Hz，can一5)，3．51—
3．61(2H，m，H一3，can一3)，3．75(1H，q，J一6．5Hz，
H一20)，4．62(1H，dd，J一9．5，1．5Hz，can一1)，5．35
(1H，m，H一6)。13C—NMR(CD。COCD3，125MHz)6：
14．5(C一18)，18．4(C一21)，19．8(C一19)，21．3(C一
11)，24．2(C一15)，31．8(C一7)，32．5(C一12)，32．8(C一
2)，32．8(C一8)，37．3(C一10)，38．3(C一1)，38．0(C一
16)，43．4(C一4)，46．1(C一13)，51．0(C一9)，51．9(C一
14)，72．2(C一3)，82．6(C一20)，85．7(C一17)，121．6
(C一6)，142．3(C一5)，102．1(can一1)，40．7(can一2)，
72．6(can一3)，78．5(can一4)，71．7(由n一5)，17．8(can一
收稿日期：2004—05—16
基金项目：北京市重点科技项目(9550214900)
作者简介：郭红丽(1975一)，女，吉林省通化市人，中国医学科学院药物研究所2000级硕士。
*通讯作者Tel：(010)63165229E—mail：jinyunzhou@imm．ac．cn
万方数据
制备型HPLC法分离2个茅莓皂苷单体成分
作者： 都述虎， 刘文英， 饶金华， 白娟
作者单位： 都述虎(中国药科大学,药物分析教研室,江苏,南京,210009;安徽省医学科学研究所,安徽,合
肥,230061)， 刘文英(中国药科大学,药物分析教研室,江苏,南京,210009)， 饶金华,白娟
(安徽省医学科学研究所,安徽,合肥,230061)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(3)
被引用次数： 2次

参考文献(5条)
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引证文献(2条)
1.刘德胜.郑红.韩景田 茅莓总黄酮提取工艺的优化[期刊论文]-湖北农业科学 2012(15)
2.邱宗荫.王继生 茅莓的化学成分及药理学研究进展[期刊论文]-中国药房 2007(6)

本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200503011.aspx