全 文 ：·1880- 中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月
发育，或提高寄主植物的抗性Da,143等。但对于菌根
真菌AR—15和AR一18促进福建金线莲生长的机制
仍有待深入研究。
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芍药种子内源抑制物质活性的研究
张荣荣，王康才+
(南京农业大学中药材研究所，江苏南京210095)
摘 要：目的 通过对芍药种子内源抑制物质的研究，探讨芍药种子休眠的原因。方法 采用生物测定和离体培养
的方法对芍药种子种皮、胚乳中抑制物的活性进行研究。结果证实了芍药种子胚乳、种皮中含有一定活性的抑制
物质，且两者对白菜幼根生长的抑制活性均高于对白菜种子萌发的抑制活性；胚乳乙醚萃取液纸色谱Rf值为0．5
区段对白菜幼根生长抑制活性最强(根长相对百分率36．36％)；接种在不同的培养基上的离体胚均能生根，但未
加GA。培养基上的胚上胚轴不能伸长生长。说明离体胚也存在上胚轴休眠现象，或存在抑制物质。结论芍药种子
中的内源抑制物质是导致其休眠的主要原因。
关键词：芍药种子；抑制物质；胚离体培养
中图分类号：R282．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)12—1880一04．
ActivityofintrinsicinhibitornseedofPaeonialactiflora
ZHANGRong—rong．WANGKang—cai
(InstituteofChineseMedicinalMaterials。NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatethedormancyreasonftheseedsbystudyingo intrinsic
inhibitorntheseedofPaeonialactiflora．MethodsBiologicalmethodsandembryoculturewerecarried
outostudytheactivityofintrinsicinhibitorn hetestaandendospermoftheP．1actiflD凇seeds．Results
TheActivityofintrinsicinhibitorexistsinthetestaandendosperm，andbothoftheintrinsicinhibitors
showedstrongerinhibitoryeffectonthegrowthofyoungerrootsofBrassicapekinensisthanthatontheir
seedgermination．TheRfO．5sectionofthetherxtractofendospermshowedthestrongestinhibitionon
thegrowthofyoungerrootsofB．pekinensis(relativerate：36．36％)．Allembryosthatinoculatedon
differentculturem diumcouldroot，butthe picotylsofembryosthatinoculatedonculturemedium
withoutGA3couldnotelongate，whichshowedt atthe mbryoinvitroalsoexistshedormancyof
收稿日期：2008—04一16
基金项目：江苏省资源开发局项目支持(IAIL3—2007一KJ一02)
作者简介：张荣荣(1983一)，女，在读硕上研究生。河南洛阳人。研究方向为药用植物栽培与生理。
E—mail：2006104121@njau．edu．ca
*通讯作者王康才Tel：(025)84396125E—mail：Wangkc@njau．edu．cn
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万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月·1881·
epicotyl，oremb yowithinhibitor．ConclusionIntrinsicinhibitorntheseedofP．1actifloraisthemain
factorthatresultsinitsdormancy．
Keywords：theseedofPaeonialactifloraPall．；inhibitor；embryocultureinvitro
芍药PaeonialactifloraPall．为毛茛科多年生
草本植物，以根入药，传统中医认为白芍性微寒，味
苦酸，有平肝止痛、养血调经、敛阴止汗等功效[1]。主
产于安徽、浙江、四川等省，栽培历史悠久，长达
3000多年。生产中发现，芍药种子存在发芽缓慢、
发芽率低、发芽不整齐等特性，但关于芍药种子具有
休眠特性的研究不多。陶新宇等[2j认为芍药种子具
有休眠特性是由于种皮机械障碍及外胚乳的约束力
所造成，通过对种子进行机械破皮处理，发芽率可由
35％提高到66．7％；金飚等[33研究得出露地播种芍
药种子休眠萌发过程中，下胚轴开始伸长时脱落酸
(ABA)的量迅速下降，GAH。的量在上胚轴生长前
最高，上胚轴生长后下降，而5。C低温贮藏种子无
萌发，ABA的量未降低。基于此方面的原因，本实验
对芍药种子中的内源抑制物质活性、存在部位进行
了研究，以期进一步研究芍药种子休眠机制、确定种
子预处理方法提供理论依据。
1材料与方法
1．I 材料：供试芍药种子系2007年8月份从连云
港市天源中药材种植有限公司门河镇药材种植基地
采集的种子，湿沙层积于室内阴凉处备用。
1．2方法
‘
1．2．1种子形态与结构观察：采用清水选种法，选
出饱满种粒，观察种子的形态，测定种子的大小、千
粒质量。将种子浸水24h后剥去种皮，剖开胚乳，徒
手切片，于解剖镜下，分别观察种皮、胚乳结构和幼
胚形态。
1．2．2种子胚乳、种皮抑制物质粗提物制备：将芍
药种子的胚乳、种皮分别加入研钵中研碎，加入lo
倍量的水置于56‘C下浸提24h，滤过，残渣再浸提
2次，合并3次滤液，56℃下浓缩成一定体积，定容
后，换算成每毫升粗提液相当于实验材料质量数，即
为0．1g／mL。
1．2．3种子胚乳、种皮粗提物的抑制活性生物测
定：向60mm铺有滤纸的培养皿中，分别注入总体
积2mL的适量水和粗提物，使培养皿中胚乳、种皮
粗提物系列质量浓度分别为：0(对照)、0．01、0．02、
0．03、0．04、0．05g／mL。每个培养皿中放入25粒饱
满均匀的白菜BrassicapekinensisRupr．种子，于
(25±1)’C条件下黑暗中培养，24h测白菜种子发
芽率，48h测定幼根长度，试验重复3次。
1．2．4粗提物对小麦种子萌发及幼苗生长的影响：
取5g种子加30mL蒸馏水，在45℃恒温下密闭
浸提1d，另取一份去种皮后磨碎加30mL蒸馏水
于室温浸提ld后滤过，滤液用作生物测定。在150
mm培养皿中加滤液8mL，再放入饱满均匀小麦
TriticumaestivumL．种子100粒，用蒸馏水作为对
照，于(25±1)℃培养箱中72h后测定小麦发芽
率、芽鞘长和幼根长度，重复3次。
1．2．5胚乳、种皮乙醚提取液制备及纸色谱、分段
生物测定：参考赵敏等L43的方法，将芍药种子胚乳、
种皮粗提物分别用10mL乙醚分两次萃取，得到胚
乳、种皮乙醚提取液与胚乳、种皮乙醚萃取残余液，
再分别定容至50mL，将4种提取液进行纸色谱，展
开剂为正丁醇一水一氨水(80：15：5)，用毛细管沿
色谱纸点样线点样，每张色谱纸点样量相同，分3次
进行，每次点液柱高2cm，待干燥后，再点下1次，
色谱纸宽6cm，长18em，当展开剂前沿距点样线
15cm时结束层析，晾干滤纸，将色谱纸按Rf值不
同剪成10段(每段1．5cm)，每段对折后再剪成3
cm两段，放入60mm小培养皿中，25粒白菜种子，
注入2mL蒸馏水进行生物测定，对照用展开剂推
动过的滤纸，试验重复3次。
1．2．6 种胚离体培养：用流水将种子表皮冲洗干
净，剥开种皮，于洁净工作台上，将去皮种子先用
70％乙醇浸泡30S，无菌水冲洗2次，再用0．1％
升汞消毒10min，无菌水冲洗4～5次。切开胚乳，用
解剖针取出种胚，分别接人不加任何激素的MS固体
培养基与MS+GA。固体培养基上。培养温度(254-
1)℃，光照时间12h／d，光照度1500一-2000lx。
2结果与分析
2．1 芍药种子的形态特征：芍药果实为瞢荚果，当
呈蟹黄色时，种子成熟，种皮红棕色或黑褐色，形状
一般为椭圆形、倒卵形，成熟种子的大小差异较大，
长为6．5～9．4mm，宽为6．0～8．2mm。胚SLSL白
色，遇空气，易氧化变褐；种胚比较小，仅I～2mm，
包埋于胚乳中间，胚根圆锥形，子叶2枚。千粒质量
为217．35g。
‘
2．2 内源抑制物质活性与粗提物浓度的关系：芍药
种子的胚乳、种皮中均存在着活性较高的抑制物质，
万方数据
·1882· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月
当胚乳粗提物质量浓度为0．04g／mL时，抑制白菜
种子萌发作用最强，发芽百分率为22．24％，而种皮
为61．11％。但当质量浓度高于0．04g／mL时，胚
乳、种皮抑制作用减弱，可能与粗提物质量浓度的变
化引起某些萌发促进物质的量(活性)与抑制物质
的量(活性)比值增大，导致抑制萌发向促进萌发
方向转变。胚乳中内源抑制物质活性高于种皮，两者
对白菜幼根生长的抑制活性均高于对白菜种子萌发
的抑制活性，且抑制活性随着粗提物质量浓度增大
而增强的趋势明显，见表1。
表1芍药种子粗提物对白菜种子萌发及对幼根生长的影响
Table1 EffectofcrudeextractofP．1actifloraseeds
onseedgerminationndgrowthofyoung
rootof曰．pekinenis
不同小写字母表不差异显著(pd0．05)，下表同
Valueswithdifferentlittlettersareofsignificantdifference
(JP<0．05)，followingtablesaresame
2．3粗提物对小麦种子萌发和幼苗生长的影响：芍
药的完整种子、磨碎种子的粗提物均对小麦种子萌
发没有抑制作用，而完整种子粗提物基本上对小麦
的生长无抑制作用；但磨碎种子粗提物对小麦幼苗
的芽鞘与幼根生长的抑制作用较明显，尤对小麦的
幼根生长抑制活性最强，见表2。
表2芍药种子粗提物对小麦种子萌发及幼苗生长的影响
Table2 EffectofcrudeextractofP．1actifloraseeds
onseedgerminationndgrowthofyoung
rootofT．aestivum
2．4 乙醚提取液及乙醚萃取残液色谱各区段活性
比较：芍药种子乙醚萃取液纸色谱的不同色谱段，对
种子萌发和幼苗生长的影响不同。胚乳乙醚萃取液
纸色谱在Rf值0．6、1．0区段对白菜种子萌发抑制
活性最强(相对发芽率为75％)，在Rf值0．5区段
对白菜幼根生长抑制活性最强(根长相对百分率为
36．36％)；而种皮乙醚萃取液纸色谱在Rf值0．8
区段对白菜种子萌发抑制活性最强，发芽率为对照
的百分率仅为31．58％，在Rf值0．5区段对白菜幼
根生长抑制活性最强，达到61．56％，见表3。
表3芍药种子胚乳、种皮乙醚萃取液纸色谱各区段
对白菜种子萌发及幼根生长的影响
Table3 EffectofetherxtractofP．1actifloraendosperm
andtestaindifferents c ionsofpaperchromato-
graphyonseedgerminationndgrowthofyoung
rootofB．pekinensis
芍药种子萃取残液中的极性物质经纸色谱展开
后，不同区段对种子萌发和幼苗生长的影响也不同。
胚乳乙醚萃取残液纸色谱在Rf值0．9区段对白菜
种子萌发抑制活性最强(相对发芽率为64．29％)，
在Rf值0．9区段也对白菜幼根生长抑制活性最强
(根长相对百分率30．77％)；而种皮乙醚萃取残液
纸色谱在Rf值0．7区段对白菜种子萌发抑制活性
最强，发芽率为对照的百分率仅为37．50％，在Rf
值1．0区段对白菜幼根生长抑制活性最强，达到
65．93％。见表4。
从总体上看，芍药种子粗提物中可能存在着两
大类内源抑制物质，水溶性物质与脂溶性物质，在一
定程度上都对白菜生长起到抑制作用。其中，种皮中
含有的内源抑制物质对白菜种子萌发抑制活性高于
胚乳，而胚乳对幼根生长抑制活性较高。
2．5种胚离体培养：去除胚乳的胚，接种在MS培
养基上，15d后子叶展开，胚根伸长约3～4cm，60d
后，胚根不断伸长并生长侧根，但胚芽始终未见生长
(图l-A)；而MS+GA。培养基上的胚，培养10d后，
子叶膨大明显，15d后，顶芽开始萌动生长，胚根稍
有露出，约1cm左右，30d后，叶柄伸长，2枚小叶片
展开(图1一B)。根据观察结果，推测接种在未加激素
的MS培养基上的胚，上胚轴处于生理休眠期。可能
是离体胚中存在一定抑制活性物质，抑制胚芽生长；
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月·1883·
表4芍药种子胚乳、种皮乙醚萃取残液纸色谱各区段
对白菜种子萌发的影响
Table4 EffectofresidueinetherxtractofP．1actiflora
endospermandtestaindifferents c ionsofpaper
chromato—graphyonseedgerminationndgrowth
ofyoungrootofB．pekinens括
图1 MS(A)和MS+GA。(B)培养基中的胚
Fig．1EmbryogrownonMS(A)and
MS+GA3(B)culturemedium
而附加GA。的培养基，可以打破胚芽的休眠。
3讨论
在长期的系统演化过程中，芍药种子形成了较
为特殊的休眠萌发特性，主要表现为秋季降温时下
胚轴伸长，长出胚根，经过冬季低温后上胚轴休眠被
破除，春季升温后胚芽出土萌发口]。GA。可以代替低
温打破芍药种子上胚轴休眠，说明芍药种子的激素
休眠占主导地位。许多研究也指出，种子休眠的原因
复杂，一般都是综合性的[6]。
本研究认为芍药种子胚乳乙醚萃取液在Rf值
0．5区段对幼根生长抑制活性最强，对种子的萌发
抑制作用较弱，与胚离体培养试验结果一致；去胚乳
的胚在10d左右就能长出胚根，而适当浓度的GA。
在一定程度上能够代替低温打破上胚轴的休眠，说明
在子叶或胚中存在抑制上胚轴生长的内源抑制物质。
芍药种子胚乳中存在抑制胚根生长的物质，当胚根休
眠打破后，子叶或胚中抑制胚芽萌动的激素占主导，
各部位抑制作用大小为：胚乳>胚(子叶)>种皮。
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关木通HPLC—DAD—ESI／MS指纹图谱研究
樊夏雷·一，丁一冰3，冯有龙2，尚 姝2，刘文英1‘
(1．中国药科大学，江苏南京210009；2．江苏省药品检验所，江苏南京210008；3．南京大学医学院，江苏南京210008)
摘要：目的建立关木通HPLC—DAD—ESI／MS指纹图谱分析方法，可用于关木通质量的评价，为进一步开展关
木通的肾毒性代谢研究提供药材质量依据。方法 用75％甲醇对不同产地的关木通样品进行提取，经HPLC—
DAD—Esl／MS联用技术分析。建立指纹图谱，确定共有指纹峰，并选用两种相似度计算方法进行比较。结果关木
通中含有30个特征指标成分，初步建立了30个共有峰为特征指纹信息的HPLC—DAD—ESI／Ms指纹图谱。24批
被测样品的指纹图谱整体相似度在0．871～O．998，各产地关木通之间相似性良好。结论方法准确可靠。重现性
好，可应用于关木通的品质评价和质量控制。
收稿日期：2008—06—10
作者简介：樊夏雷(1965一)，男，浙江绍兴人，在读博士，主要研究方向为色谱分析、质量标准与质量控制方法研究。
E—mail：fanxialei@sohu．cornTel；13805165256(025)83313672
*通讯作者刘文英Tel：(025)83271251E—mail：1wcpu@126．corn
万方数据
芍药种子内源抑制物质活性的研究
作者： 张荣荣， 王康才， ZHANG Rong-rong， WANG Kang-cai
作者单位： 南京农业大学中药材研究所,江苏,南京,210095
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(12)
被引用次数： 3次

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