全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月·711·
素、黄芩苷、盐酸小檗碱、甘草酸4个指标的权重系
数分别为40、25、25、10；4个指标评分的结果规定为
权重系数乘以相对提取效率(每个质量分数／组内最
大质量分数)；考察指标规定为葛根素、黄芩苷、盐酸
小檗碱、甘草酸4个指标评分之和。
采用沈阳药科大学曾昭均教授的均匀设计统计
软件处理实验结果n]。将实验结果输入计算机，进行
逐步回归得回归方程，并进行检验，对综合指标进行
分析，优化结果得Y。。。一136．2861，第一次提取pH
值为10、第二次提取pH值为10、第三次提取pH值
为1，每次30min，提取3次，每次12倍量水。
y一一151．1326+70．2969 X。+0．7996 X22+
3．8800 X42+15．7693 XlX4—4．4034 X2X3—
14．6677 X2X4+4．6966 X2X5—0．3674 X3X。
Q一0．1463，S一0．3825，R2—1．000，F一
2811．4147。
对均匀设计回归分析后，获得的最佳条件是：提
取3次，第一次提取用pH10的水溶液；第二次提取
用pH10的水溶液；第三次提取pH1的水溶液，每
次提取30min，12倍量的水。
2．3验证试验：按照该组条件进行验证试验，结果
葛根素、黄芩苷、小檗碱、甘草酸的质量分数分别为
0．220％、5．26％、4．97％、8．95％，评分为98．53％
(以一3)。
3讨论
葛根芩连汤药味简单，配伍得当，疗效确切。根
据每味药材的成分组成，选取有《中国药典》所定指
标成分葛根素、黄芩苷、盐酸小檗碱、甘草酸作为指
标，以确定半仿生提取的最佳提取条件。在进行指标
的权重系数分配时主要参考了复方的配伍规律，根
据4味药的君臣佐使关系进行确定。
通过对回归方程分析结果提示，影响提取效果
的各个因素之间存在复杂的交互作用，均匀设计法
比较适合用来研究影响因素多、相互作用较复杂的
仿生提取法。
References：
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Semi—binicextraction口]．ChinaJChinMaterMed(中国中
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[4]ZengZJ．ApplicationofUniformDesign(均匀设计及其应
用)[M]．Shenyang：LiaoningPeople’SPublishingHouse，
1 994．
马黄酊中马钱子碱和士的宁的HPLC测定
＼
傅 军1，梁基智2，梁从庆1
(1．广东药学院，广东广州’510006；2．广州市中医医院，广东广州510130)
马黄酊是由马钱子、黄连等中药材经提取精制
而成的制剂，有活血化瘀、抗菌抗炎之功效，用于血
栓闭塞性脉管炎，经20多年临床使用证明疗效确
切。马钱子主要成分为生物碱，马钱子碱和士的宁各
占其总量约40％，两者均为典型的具有竞争性的甘
氨酸突触后膜抑制作用的拮抗剂[1]，有剧毒，必须严
格控制其用量。本制剂的质量标准对马钱子碱和士
的宁均无量的控制，为了保证临床用药安全、保证药
品质量，本实验建立了同时测定该制剂中马钱子碱
和士的宁的反相高效液相色谱法。
1仪器与试药
日本岛津LC一10ATvp高效液相色谱仪和
SPD一10Atvp紫外器，HW一2000色谱工作站。
马钱子碱、士的宁对照品(中国药品生物制品检
定所)；马黄酊由广州市中医医院药剂科提供；乙腈
为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
2．1 色谱条件及检测方法：色谱柱为DiamonsilC。。
柱(250mm×4．6mm，5肛m)；流动相为乙腈一0．01
mol／L庚烷磺酸钠与0．02mol／L磷酸二氢钾等量
混合溶液(用10％磷酸调节pH2．8)(20：80)；体
积流量为1．0mL／min；检测波长为260am；柱温
30℃。此色谱条件下，供试品溶液色谱中马钱子碱
与士的宁均得到较好分离，其色谱峰保留时间与相
收稿日期：2005—08—12
作者简介：傅军(1949一)，女，四川人，副主任药师，从事药品检验、药物分析、药品质量标准的教学和研究工作。
Tel：(020)34076426E—mail：zchfj@tom．eom
万方数据
·712· 中草芮 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月
应对照品一致(图1)。理论板数以士的宁峰计算应
不低于5000。
N∞
卜口
C
下]厂一～
a一马钱子碱b一士的宁
a-brucineb—strychine
图1混合对照品(A)、马黄酊(B)及缺马钱子的
阴性对照(c)的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsfmixedreference
substance(A)、MahuangTincture(B)，
andnegativesample(C)
2．2对照品溶液的制备：精密称取马钱子碱对照品
9．01mg、士的宁对照品11．01mg，置20mL量瓶
中，加三氯甲烷使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量
取1mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇
匀，即得含马钱子碱45．05／-g／mL、士的宁55．05
／tg／mL的对照品溶液。
2．3供试品溶液的制备：精密量取本品10mL，置
水浴上挥干，加氨水0．5mL，再加三氯甲烷5mL，
滤过，滤液置10mL量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻
度，摇匀，滤过，即得。
2．4阴性对照溶液的制备：按处方比例取处方中除
马钱子以外的其余药材，按工艺制备缺马钱子的阴
性样品，照2．3项下的方法制备阴性对照溶液。
2．5线性关系考察：精密吸取马钱子碱和士的宁对
照品溶液2、6、10、12、16、20肛L注入高效液相色谱
仪，记录峰面积。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐
标，绘制标准曲线。得马钱子碱回归方程为：A一
2．5414×103+5．5409×105C，r一0．9997；士的
宁回归方程为：A一1．1019×104+1．0313×106C，
r一0．999。上述结果表明，马钱子碱在0．0901～
0．901P-g、士的宁在0．110～1．101弘g与峰面积
线性关系良好。
2．6空白干扰试验：取阴性对照溶液，依法测定，阴
性对照溶液在与马钱子碱、士的宁色谱峰相同保留
时间位置上，未见干扰峰出来。
2．7精密度试验：取对照品溶液，连续重复进样6
次，结果马钱子碱峰面积的RSD为0．97％，士的宁
峰面积的RSD为0．95％。
2．8稳定性试验：取供试品溶液于0、2、4、6、8h分
别进样10肛L，记录峰面积，计算，结果马钱子碱峰面
积RSD为1．80％，士的宁峰面积RSD为1．43％。
2．9重复性试验：取本品(tit号050103)6份，制备
供试品溶液，依法测定，记录峰面积，计算。结果马钱
子碱平均质量浓度为0．05354mg／mL，RSD为
1．48o／6；士的宁平均质量浓度为0．06315mg／mL，
RSD为1．56％。
2．10 回收率试验：精密量取含马钱子碱0．02668
mg／mL、士的宁0．03152mg／mL样品5mL，共9
份，分别加对照品溶液(马钱子碱45．05／-g／mL，士
的宁55．05ftg／mL)4、5、6mL各3份，制备供试品
溶液，依法测定，计算回收率。结果马钱子碱的平均
回收率为99．0％，RSD为1．22％(咒一9)，士的宁的
平均回收率为99．5％，RSD为1．44％(咒一9)。
2．11样品测定：取本品，制备供试品溶液，依法测
定，记录峰面积，按外标法计算样品中马钱子碱和士
的宁的量，结果见表1。
表1马黄酊中马钱子碱和士的宁的测定结果(甩一3)
Table1 Brucinea dstrychineinMahuang
Tincture(一一3)
3讨论
3．1提取方法：根据游离生物碱易溶于三氯甲烷的
性质，采用碱性条件下使生物碱游离，再用三氯甲烷
提取。根据回收率试验，马钱子碱回收率为99．0％，
士的宁回收率为99．50A，基本提取完全。
3．2流动相的选择：采用C。。作为色谱柱分析生物
碱，因硅胶上残留的Si一0H基而使色谱峰产生拖尾
现象；测定的两种生物碱结构相似(马钱子碱IP--甲
氧基士的宁)，同时分析时两种成分的色谱峰很难分
离。采用甲醇一乙腈一冰醋酸系统作为流动相口]，发现
出峰太早，两种生物碱峰分不开。根据马钱子药材的
分析方法[3“]，采用庚烷磺酸钠作为离子对试剂，与
马钱子碱和士的宁形成离子对，增加其在色谱柱中
的保留，使两种生物碱在0DS柱上的分离成为可
能；在流动相中加入磷酸二氢钾并调节适宜的pH
值，可提高柱效，减少色谱峰拖尾。
3．3测定波长的选择：取马钱子碱对照品溶液、士
的宁对照品溶液、两种生物碱对照品的混合溶液及
供试品溶液，用分光光度计在200500am波长扫
描，绘制吸收光谱图。结果马钱子碱的k。。为264
万方数据
中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月·713·
nm，士的宁的A。；为254nm，两种生物碱对照品混
合溶液的A。。，为256nm，供试品溶液的k。为265
nm，故选择260nm为测定波长。
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HPLC法测定桑姜感冒片中连翘苷
王慧琛1，吴贵华2，吕曙华2
(1．天津市津南区药品检验所，天津300350；2．天津市药品检验所，天津300070)
桑姜感冒片为常用感冒药，收载在《中华人民共
和国卫生部药品标准》中药成方制剂第6册中，由桑
叶、菊花、紫苏、连翘、苦杏仁、干姜6味药材组成，具
有散风清热、祛寒止咳等功效，用于治疗感冒、咳嗽、
头痛、咽喉肿痛症状。连翘具有清热解毒、消肿散结
的功能，与处方功效相佐，故实验中以连翘苷为定量
指标进行HPLC法测定。该方法专属性强、灵敏度
高、重现性好，可作为本品质量控制指标。
1仪器与试药
岛津LCIOAD高效液相色谱仪，SPDloAV紫
外检测器，SILl0A自动进样器，CR54数据处理机。
连翘苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号
0821—200104)，桑姜感冒片由山西景和华禹制药有
限公司提供；GDX一104大孔吸附树脂(60～80目，批
号030221，天津市化学试剂二厂)。中性氧化铝
(100～200目，中国医药集团上海化学试剂公司)。
乙腈为色谱纯，甲醇为分析纯，水为重蒸馏水。
2方法和结果
2．1 色谱条件：色谱柱：PhenomenexC18柱(250
mm×4．6mm，5肛m)；流动相：甲醇一乙腈一水(12：
18：70)；体积流量：1mL／min；检测波长：277nm；
柱温：40℃；进样量：10肛L。
2．2对照品溶液的制备：取连翘苷对照品适量，精
密称定，加甲醇制成15／Mg／mL的溶液，即得。
2．3供试品溶液的制备：取本品10片，精密称定，
研细，取0．7g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加
入甲醇20mL，称定质量，超声处理50min，放冷，再
称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密
吸取续滤液5mL，加水至约15mL，通过已处理好
收稿日期：2005—08—09
的大孔吸附树脂柱(1．3g，内径8mm)，用45％甲
醇40mL洗脱，弃去洗脱液，继用70％甲醇40mL
洗脱，收集洗脱液，洗脱液通过中性氧化铝柱(0．5
g，内径8ram)，用70％甲醇20mL洗脱，合并样品
液及洗脱液，减压浓缩至干，残渣加甲醇使溶解，移
至10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2．4 阴性样品液的制备：按处方配比，取除连翘的
其他药材，按本品制法项下的工艺制成颗粒，再按供
试品溶液的制备制得阴性样品液。
2．5专属性试验：分别精密吸取对照品溶液、供试
品溶液及阴性对照品溶液各10扯L，注入液相色谱
仪中，测定。阴性对照样品在连翘苷相应的保留时间
无色谱峰干扰。见图1。
曼 客
A彗 B 熹 C一_一h一土L
*一连翘苷
*一forsythingenin
图1连翘苷对照品(A)、桑姜感冒片(B)和缺连翘的
阴性对照(C)的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsffOrsythingenin
referencesubstance(A)，SangjiangGanmao
Tablets(B)，andnegativesample(C)
2．6 标准曲线的制备：精密称取连翘苷对照品
10．44mg，置100mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释
至刻度，摇匀。精密吸取3mL，置20mL量瓶中，加
甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取5、10、20、25、30、
33肛L注入液相色谱仪，测定色谱峰面积。以连翘苷
进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，
万方数据
马黄酊中马钱子碱和士的宁的HPLC测定
作者： 傅军， 梁基智， 梁从庆
作者单位： 傅军,梁从庆(广东药学院,广东,广州,510006)， 梁基智(广州市中医医院,广东,广州
,510130)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(5)
被引用次数： 3次

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4. 段晓颖.DUAN Xiao-ying 正交试验法优选马钱子醇提工艺研究[期刊论文]-中国现代应用药学2007,24(5)
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7. 李莹莹.曲明.杨金丽.许贵军 妇癌灵贴片马钱子提取工艺研究[期刊论文]-黑龙江医药2010,23(3)
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9. 邵艳新 腰痛宁胶囊中士的宁含量测定方法及其药代动力学研究[学位论文]2006
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200605029.aspx