全 文 ：［收稿日期］ 20140424(014)
［通讯作者］ * 李喜香，硕士，主任中药师，硕士生导师，从事中药新制剂及其质量评价研究，Tel:0931-2687855，E-mail:lixixiang929
@ 163. com
双波长 ＲP-HPLC同时测定骨刺膏渗漉液中
马钱子碱、士的宁和乌头碱的含量
李喜香1* ，包强1，毕映燕1，郭敏2
( 1. 甘肃省中医院 药学部，兰州 730050; 2. 甘肃省中医药研究院，兰州 730050)
［摘要］ 目的:建立 ＲP-HPLC同时测定骨刺膏渗漉液中马钱子碱、士的宁和乌头碱含量的方法。方法:Symmetry C18色谱
柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相乙腈(A)-水(B) (含 0. 01 mol·L －1磷酸二氢钾溶液，用磷酸调节 pH 3)梯度洗脱(0 ～
22 min，11%A;22 ～ 23 min，11% ～33%A;23 ～ 36 min，33%A;36 ～ 37 min，33% ～11%A;37 ～ 40 min，11%A) ，检测波长为乌头
碱 235 nm，马钱子碱和士的宁 260 nm。结果:马钱子碱、士的宁和乌头碱的线性范围分别为 0. 026 4 ～ 0. 264，0. 039 6 ～ 0. 396，
0. 016 ～ 0. 160 μg;平均加样回收率分别为 98. 44%，98. 63%，99. 08%，ＲSD分别为 1. 84%，1. 66%，0. 97%;样品中三者的平均
质量浓度分别为 1. 29，1. 92，0. 79 mg·L －1。结论:该方法操作简便、准确可靠、重复性好，为完善骨刺膏的质量标准提供实验依
据。
［关键词］ 梯度洗脱;马钱子碱;士的宁;乌头碱;骨刺膏
［中图分类号］ Ｒ283. 6;Ｒ284. 1;Ｒ284. 2 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)22-0081-04
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfjx． 2014220081
Simultaneous Determination of Brucine，Strychnine and Aconitine in
Guci Pastes Leachate by Dual Wavelength ＲP-HPLC
LI Xi-xiang1* ，BAO Qiang1，BI Ying-yan1，GUO Min2
(1. Department of Pharmacy，Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730050，China;
2. Gansu Province Academy of Chinese Medicine，Lanzhou 730050，China)
［Abstract］ Objective:To establish a method for determining contents of brucine， strychnine and
aconitine in Guci pastes leachate by ＲP-HPLC． Method:Symmetry C18 column (4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，
mobile phase was constituted by acetonitrile (A)-water (B) (containing 0. 01 mol·L －1 potassium dihydrogen
phosphate solution，adjusted pH to 3 by phosphoric acid)for gradient elution (0-22 min，11% A;22-23 min，
11% -33% A;23-36 min，33% A;36-37 min，33% -11% A;37-40 min，11% A) at a flow rate of
1. 0 mL·min －1，detection wavelength was set at 235 nm for aconitine，260 nm for brucine and strychnine． Ｒesult:
Linear ranges of brucine，strychnine and aconitine were 0. 026 4-0. 264，0. 039 6-0. 396，0. 016-0. 160 μg;their
average recoveries were 98. 44%，98. 63% and 99. 08% with ＲSD of 1. 84%，1. 66% and 0. 97%; their
average concentrations in samples were 1. 29，1. 92，0. 79 mg·L －1，respectively． Conclusion:This method is
simple，accurate and reproducible，it can be provide experimental basis for quality control of Guci pastes．
［Key words］ gradient elution;brucine;strychnine;aconitine;Guci pastes
骨刺膏为甘肃省中医院医院制剂(批号甘药制
字 Z11012102) ，由制马钱子、制草乌、川芎及木瓜等
7 味中药组成，外用具有活血化瘀、活利关节的功
效，用于治疗各类骨质增生性关节疼痛等［1］。骨刺
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 22
Nov．，2014
膏为中药外用膏剂，方中制马钱子和制草乌用酸溶
液渗漉，浓缩后经其他工序研制而成。制马钱子具
有通络止痛、散结消肿之功效，主要成分为生物碱类
的马钱子碱和士的宁，二者均为具有竞争性的甘氨
酸突触后膜抑制作用拮抗剂［2］。制草乌具有祛风
除湿、温经止痛的功效，主要含二萜类乌头碱。乌头
碱既是有效活性成分，也是毒性成分，在外用镇痛方
面具有独到之处，镇痛作用强且连续用药不易产生
耐受现象［3］。制马钱子和制草乌均为毒性药材，因
此需对二者进行严格限量。制马钱子和制草乌中生
物碱类成分的单独测定方法已有较多报道［4-5］。但
在同一色谱条件下同时测定两种药材中马钱子碱、
士的宁和乌头碱含量的方法尚未见报道。故本实验
拟建立 ＲP-HPLC同时测定制马钱子和制草乌中马
钱子碱、士的宁和乌头碱含量的方法，为提升骨刺膏
的质量标准提供实验依据。
1 材料
2695 型高效液相色谱仪(1525 型四元泵，2487
型紫外检测器，717 型自动进样器，美国 Waters 公
司) ，NW型超纯水处理器(上海力康生物医疗科技
控股有限公司) ，AＲ124CN 型电子天平(美国奥豪
斯公司)。
马钱子碱、士的宁、乌头碱对照品(中国食品药
品检定研究院，批号分别为 110706-200505，110705-
200306，110789-200404) ，骨刺膏渗漉液 (批号
20130604，20130621，20130705，甘肃省中医院制剂
室提供) ，乙腈为色谱醇，水为纯化水，其余试剂均
为国产分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Symmetry C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ，流动相乙腈(A)-水(B) (含 0. 01
mol·L －1磷酸二氢钾溶液，用磷酸调节 pH 3)梯度洗
脱(0 ～ 22 min，11% A;22 ～ 23 min，11% ～ 33% A;
23 ～ 36 min，33%A;36 ～ 37 min，33% ～ 11% A;37 ～
40 min，11%A) ，流速 1. 0 mL·min －1，柱温室温，检
测波长为乌头碱 235 nm，马钱子碱和士的宁 260
nm，进样量 20 μL，见图 1。
2. 2 混合对照品溶液的制备 精密称取马钱子碱、
士的宁和乌头碱对照品适量，分别加三氯甲烷配置
成 0. 110，0. 165，0. 200 g·L －1的对照品贮备液。依
次精密吸取上述对照品贮备液 3，3，1 mL 置于
25 mL量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，即得。
2. 3 供试品溶液的制备 精密量取骨刺膏渗漉液
25 mL置锥形瓶中，用 10%氢氧化钠溶液调节渗漉
A，D．混合对照品;B，E．供试品;C，F．阴性样品;
1. 马钱子碱;2. 士的宁;3. 乌头碱;
A，B，C． 235 nm;D，E，F． 260 nm
图 1 骨刺膏渗漉液 HPLC
液 pH 10，转移至分液漏斗中，分别用 25，25，15 mL
的乙醚萃取，合并乙醚层，挥干溶剂，残渣用三氯甲
烷溶解并转移至 5 mL量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻
度，摇匀，经 0. 45 μm微孔滤膜滤过，即得。
2. 4 阴性样品溶液的制备 按骨刺膏的处方与制
备方法制备不含制草乌和制马钱子药材的骨刺膏渗
漉液，作为阴性样品。取阴性样品 25 mL，按 2. 3 项
下方法制备供试品溶液，即得。
2. 5 线性关系考察 精密量取混合对照品溶液 2，
4，6，8，10，20 μL，按 2. 1 项下色谱条件测定，以峰面
积积分值为纵坐标，进样量为横坐标，得马钱子碱、
士的宁、乌头碱回归方程分别为 Y = 3. 726 × 106X +
2. 700 × 104 (r = 0. 999 2) ，Y = 8. 038 × 105X +
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Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 22
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8 488. 84(r = 0. 999 0) ，Y = 9. 655 × 105X + 2 009. 22
(r = 0. 999 5) ，线性范围依次为 0. 026 4 ～ 0. 264，
0. 039 6 ～ 0. 396，0. 016 ～ 0. 160 μg。
2. 6 精密度试验 精密量取同一混合对照品溶液，
按 2. 1 项下色谱条件连续进样 6 次，计算马钱子碱、
士的宁和乌头碱峰面积值的 ＲSD 分别为 1. 5%，
0. 94%，2. 0%，表明仪器精密度良好。
2. 7 重复性试验 取骨刺膏渗漉液 (批号
20130705)6份，按 2. 3项下方法制备供试品溶液，按
2. 1项下色谱条件测定，计算马钱子碱、士的宁和乌
头碱平均质量浓度分别为 1. 26，1. 90，0. 76 mg·L －1，
ＲSD分别为 1. 3%，0. 9%，2. 2%。
2. 8 稳定性试验 取同一供试品溶液，室温放置，
分别在 0，2，4，6，8，10，12，24 h 按 2. 1 项下色谱条
件测定，计算马钱子碱、士的宁和乌头碱峰面积的
ＲSD分别为 1. 8%，1. 5%，2. 1%，表明供试品溶液
在 24 h内基本稳定。
2. 9 加样回收率试验 精密量取已知含量的样品溶
液(批号 20130705)6 份，每份 25 mL，置具塞锥形瓶
中，各精密加入2. 2项下混合对照品溶液2. 50 mL，按
2. 3 项下方法制备供试品溶液，按 2. 1 项下色谱条
件测定，计算回收率，结果见表 1。
表 1 骨刺膏渗漉液中指标成分含量测定的加样回收率试验
成分
样品中
量 /μg
加入量
/μg
测得量
/μg
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
马钱子碱 32. 5 33. 0 64. 90 98. 18 98. 44 1. 84
32. 4 33. 0 64. 10 96. 06
33. 0 33. 0 65. 70 99. 09
32. 4 33. 0 64. 40 96. 97
32. 5 33. 0 65. 01 98. 52
32. 1 33. 0 65. 70 101. 82
士的宁 47. 8 49. 5 96. 70 98. 79 98. 63 1. 66
48. 1 49. 5 96. 10 96. 97
47. 8 49. 5 98. 04 101. 49
48. 5 49. 5 96. 98 97. 94
48. 0 49. 5 97. 11 99. 21
48. 3 49. 5 96. 50 97. 37
乌头碱 20. 20 20. 0 39. 76 97. 80 99. 08 0. 97
19. 02 20. 0 38. 91 99. 45
19. 05 20. 0 38. 95 99. 50
19. 92 20. 0 39. 97 100. 25
19. 80 20. 0 39. 70 99. 50
19. 82 20. 0 39. 42 98. 00
2. 10 样品测定 取 3 批骨刺膏渗漉液，每批平行
3 份，按 2. 3 项下方法制备供试品溶液，按 2. 1 项下
色谱条件测定，采用外标法计算样品中马钱子碱、士
的宁和乌头碱的平均质量浓度分别为 1. 29，1. 92，
0. 79 mg·L －1，ＲSD依次为 1. 6%，1. 0%，1. 9%。
3 讨论
检测波长考察时，将马钱子、士的宁、乌头碱对
照品溶液和混合对照品溶液在 200 ～ 760 nm进行全
波长扫描，结果显示马钱子碱、士的宁的 λmax依次为
260，254 nm，混合对照品溶液在 260 nm 处呈强吸
收，乌头碱在 260 nm 亦有吸收，但吸收强度较弱且
吸收值低，在 235 nm 附近有最大吸收，故选择马钱
子和士的宁的检测波长 260 nm，乌头碱的检测波长
235 nm。
文献报道马钱子碱和士的宁的含量测定采用乙
腈-0. 01 mol·L －1庚烷磺酸钠与 0. 02 mol·L －1磷酸二
氢钾等量混合溶液(用 10%磷酸调节 pH 2. 8)为流动
相，检测波长 260 nm［6-8］。乌头碱类常选择乙腈-
0. 2%冰乙酸(加三乙胺调节 pH 6. 25) (29 ∶ 71) ，
40 mmol·L －1乙酸铵溶液-乙腈梯度洗脱及甲醇-
0. 05%磷酸溶液(含 0. 04%三乙胺) (68∶ 32)为流动
相［9-10］。结合预试验分析，本文采用乙腈-0. 01
mol·L －1磷酸二氢钾溶液在 pH 3 的弱酸性条件下梯
度洗脱，结果显示样品中 3 种成分可同时检出，峰型
对称，干扰组分少，分离度好。
制草乌中乌头碱、次乌头碱和新乌头碱等为有
效成分，但也是毒性成分，治疗剂量与中毒剂量接
近，安全范围小。中药的临床疗效是多组分协同作
用的结果，尽可能多地测定其所含成分是实现中药
复方有效质控的有效途径［11］。李智勇等［12］对癌痛
巴布剂进行含量测定时，以君药草乌中乌头碱、次乌
头碱和新乌头碱为检测指标，采用 HPLC 同时对这
3 种成分进行测定。本文将马钱子和草乌中主要成
分在同一色谱条件下同时检出，可为全面提升骨刺
膏的质量水平提供参考。
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［责任编辑 刘德文］
［收稿日期］ 20140806(020)
［第一作者］ 李炳东，从事医院制剂的制备与分析研究，Tel:0427-7650589，E-mail:libingdong@ sina． com
［通讯作者］ * 田金苗，主管药师，从事药品检验及中药质量标准研究，Tel:024-25425645，E-mail:tianjinmiao@ sina． com
鸦胆子油乳注射剂 HPLC-ELSD指纹图谱分析
李炳东1，田金苗2* ，郭汉文2，王怡君2，孔令锋2
( 1. 辽河油田总医院，辽宁 盘锦 124000; 2. 辽宁省药品检验检测院，沈阳 110023)
［摘要］ 目的:建立鸦胆子油乳注射剂的 HPLC-ELSD指纹图谱，为科学评价其质量提供依据。方法:运用岛津 2010C高
效液相色谱仪和奥泰 2000 蒸发光检测器，采用Waters C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相乙腈-二氯甲烷(65∶ 35) ，流
速 1. 0 mL·min －1，检测温度 70 ℃，柱温 30 ℃，进样量 10 μL。结果:在 10 批鸦胆子油乳注射剂基础上，建立了有 8 个共有峰
的鸦胆子油乳注射剂的 HPLC-ELSD色谱图，方法的精密度、重复性与稳定性良好，相对保留时间和相对峰面积的 ＲSD 均 ＜
3. 0%，相似度均 ＞ 0. 99，各峰分离度良好，指纹信息完整，符合指纹图谱技术规范。结论:所建方法简单、可靠，可作为鸦胆子
油乳注射剂质量控制的重要依据之一。
［关键词］ 指纹图谱;鸦胆子油乳注射剂;高效液相色谱法
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)22-0084-04
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfjx． 2014220084
HPLC-ELSD Fingerprint of Bruceae Fructus Oil Latex Injection
LI Bing-dong 1，TIAN Jin-miao2* ，GUO Han-wen2，WANG Yi-jun2，KONG Ling-feng2
(1. Liaohe Oilfield General Hospotal，Panjin 124000，China;
2. Liaoning Provincial Institute for Control of Drug，Shenyang 110023，China)
［Abstract］ Objective:To establish a method of fingerprint analysis on Brucea Javanica oil latex Injection
by HPLC-ELSD and provide a reference for the quality evalation of Brucea Javanica oil latex Injection． Method:
The sample were determined by shimadzu 2010C HPLC and Alltech 2000 ESLD with Waters C18 analytical column
(4. 6 mm ×250 mm，5μm) ，by using acetonitrile-dichloromethane (65∶ 35)as the mobile phase at the flow rate of
1. 0 mL·min －1 and the detection temperature of 70 ℃，column temperature 30 ℃，inject volume 10 μL． Ｒesult:Its
fingerprint exhibited better separation for each peak，revealing amount of finger information，based on the ten batches
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