全 文 ：中国药品标准 2016 年第 17 卷第 1 期 34 Drug Standards of China 2016，Vol. 17 No. 1
TAL进行检验，用 BET水将 CSE 溶解后稀释成 4λ、
2λ(阳性对照溶液)浓度的溶液，再将供试品用 BET
水溶解后进行稀释，使其终浓度为 7. 5 mg·mL －1，
3. 75 mg·mL －1的溶液(供试品溶液)，同时在浓度
为 7. 5 mg·mL －1的溶液中添加 4λ的等体积细菌内
毒素标准溶液，作为供试品阳性对照溶液，并设阳性
和阴性对照。结果表明，不同规格的 127 批样品均
通过验证。
3 讨论与小结
注射用阿莫西林钠舒巴坦钠对鲎试剂与细菌
内毒 素 反 应 不 产 生 干 扰 的 浓 度 大 于 7. 5
mg·mL －1，当限值设定为 0. 067 EU·mg －1时，使
用现市售灵敏度为 0. 5 ～ 0. 03 EU·mL －1的鲎试
剂均可对其进行细菌内毒素检查。本研究结果表
明:注射用阿莫西林钠舒巴坦钠标准统一采用细
菌内毒素检查法是可行的，建议标准中细菌内毒
素检查项修订为:取本品，依法检查(中国药典
2010 年版二部附录Ⅺ E)，每 1 mg 中含细菌内毒
素的量应小于 0. 067 EU。
参考文献
［1］ 中国药典［S］． 2010 年版． 二部． 附录 99
［2］ 中国药典［S］． 2010 年版． 二部． 附录 212
［3］ 中国药品生物制品检定所． 中国药品检验标准操作规范
(2010 年版)［M］． 中国医药科技出版社，2010:310
(收稿日期:2015-10-14)
作者简介:姜涛，副主任药师;研究方向:药品检验与质量控制。Tel:13756537797;E-mail:tnt_tao@ sina． com
HPLC法测定山药丸中士的宁和马钱子碱的含量
姜涛1，滕统华2，韩松涛1(1． 吉林省药品检验所，长春 130000;2． 吉林职工医科大学，吉林 132011)
摘要 目的:建立测定山药丸中士的宁和马钱子碱含量的方法。方法:采用 HPLC 法，色谱柱为 Luna C18(4. 6 mm × 250 mm，
5 μm);流动相为乙腈-0. 01 mol·L －1庚烷磺酸钠与 0. 02 mol·L －1磷酸二氢钾等量混合溶液(用 10%磷酸调节 pH值至 2. 8)
(21∶ 79)，流量 1. 0 mL·min －1，柱温 35 ℃，检测波长为 260 nm。结果:士的宁和马钱子碱的线性范围分别为 0. 03 ～ 0. 95 μg
(r = 1. 000 0)、0. 03 ～ 1. 17 μg(r = 0. 999 5)，平均回收率(n = 6)分别为 98. 5%、99. 0%，其 ＲSD分别为 1. 4%、0. 8%。结论:所
建方法可靠、准确，可用于该制剂的质量控制。
关键词:高效液相色谱法;山药丸;士的宁;马钱子碱
中图分类号:Ｒ 921. 2 文献标识码:A 文章编号:1009 － 3656(2016)－ 1 － 34 － 4
Determination of Strychnine and Brucine in Shanyao Pills by HPLC
Jiang Tao1，Teng Tonghua2，Han Songtao1(1． Jilin Institute for Drug Control，Changchun 130000;2． Jilin Worker Medical University，
Jilin 132011)
Abstract Objective:To establish a method for determining Strychnine and Brucine in Shanyao Pills. Methods:HPLC method was
adopted ona Luna C18 column(4. 6 mm × 250 mm，5μm)with acetonitrile － 0. 01 mol· L
－1 sodium heptanesulfonate and 0. 02
mol·L －1 potassium dihydrogen hosphate mixed solution (adjusted pH to 2. 8 with 10% phosphoric acid)(21∶ 79)as mobile phase.
The flow rate was 1. 0 mL·min －1，column temperature was 35 ℃ and detection wavelength was 260 nm. Ｒesults:The linear range of
Strychnine and Brucine was 0. 03 － 0. 95 μg(r = 1. 000 0)and 0. 03 － 1. 17 μg(r = 0. 999 5)，respectively. The average recovery rate
of Strychnine and Brucine was 98. 5% and 99. 0% (n = 6)with ＲSD of 1. 4% and 0. 8%，respectively. Conclusion:The method is
reliable and accurate，which can be used for the quality control of the preparation.
Key words:HPLC;Shanyao Pills;Strychnine ;Brucine
山药丸是由山药、杜仲、牛膝等 18 味中药组成 的复方制剂，具有祛风通络，强筋壮骨之功效，用于
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痹症，筋骨痿软，关节不利，跌打损伤，瘀血作痛。山
药丸方中马钱子粉所含生物碱既是有效成分也是有
毒成分，原标准未对其进行含量测定［1］。为此，本
文主要针对山药丸中马钱子粉进行了含量测定方法
研究。所建方法可靠、准确，可用于该制剂的质量
控制。
1 仪器与试药
Agilent 1100 型高效液相色谱仪;岛津 2010
CHT高效液相色谱仪。
士的宁对照品 (批号 110705-200306，纯度
97%)、马钱子碱对照品(批号 110706-200505，纯度
95. 9%)均由中国食品药品检定研究院提供;山药
丸(生产企业提供，共 8 批);乙腈为色谱纯，其他试
剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱为 Luna C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm);
以乙腈-0. 01 mol·L －1庚烷磺酸钠与 0. 02 mol·L －1
磷酸二氢钾等量混合溶液(用 10%磷酸调节 pH 值
至 2. 8)(21 ∶ 79)为流动相;检测波长 260 nm;柱温
35 ℃;进样量 10 μL。理论板数按士的宁峰计算应
不低于 5 000。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液 取士的宁对照品 10 mg，马钱
子碱对照品 10 mg，精密称定，分别置 100 mL 量瓶
中，加三氯甲烷适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。分
别精密量取 2 mL，置同一 10 mL 量瓶中，用甲醇稀
释至刻度，摇匀，即得(每 1 mL 中约含士的宁 0. 02
mg，马钱子碱 0. 02 mg)。
2. 2. 2 供试品溶液 取重量差异项下的供试品，研
细，取约 3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氢氧化
钠试液 9 mL，混匀，放置过夜，精密加入三氯甲烷 40
mL，密塞，称定重量，置水浴中回流提取 2 h，放冷，
再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，分
取三氯甲烷提取液，精密量取三氯甲烷提取液
4 mL，置 10 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，
即得。
2. 2. 3 阴性对照溶液 按照处方比例和工艺将不
含马钱子粉的其他药味制成阴性样品，按供试品溶
液的制备方法制成不含士的宁和马钱子碱的阴性对
照溶液。
2. 3 专属性试验
取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液，依
“2. 1”项下色谱条件进行测定，结果阴性样品色谱
在与对照品相应保留时间附近无干扰峰出现，表明
阴性对照无干扰，专属性好。见图 1。
A. 混合对照品;B. 供试品;C. 阴性对照
图 1 HPLC色谱图
2. 4 线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液(含士的宁 0. 106 3
mg·mL －1，马钱子碱 0. 130 6 mg·mL －1)1，3，5，7，
9 mL，置 10 mL 量瓶中，分别加三氯甲烷-甲醇
(1∶ 4)至刻度，摇匀，依法分别注入液相色谱仪，记
录色谱图，再精密吸取对照品溶液(士的宁 0. 106 3
mg·mL －1、马钱子碱 0. 130 6 mg·mL －1)1 mL用三
氯甲烷-甲醇(1 ∶ 4)溶液稀释至 10 mL 量瓶中，精
密量取 3 μL，注入液相色谱仪，按拟定色谱条件
测定，以对照品的进样量为横坐标，色谱峰面积
为纵坐标绘制标准曲线。计算回归方程为士的
宁 Y = 5. 716 37 + 1 976. 017 455X，r = 1. 000 0;
马钱子碱 Y = 16. 953 044 + 1 461. 248 608X，
r = 0. 999 5。结果表明，士的宁在 0. 03 ～ 0. 95
μg，马钱子碱在 0. 03 ～ 1. 17 μg 范围内线性关系
良好。
2. 5 精密度试验
2. 5. 1 精密度 精密吸取供试品溶液 10 μL，注入
中国药品标准 2016 年第 17 卷第 1 期 36 Drug Standards of China 2016，Vol. 17 No. 1
液相色谱仪，依法重复进样 6 次。结果士的宁峰面
积值的 ＲSD为 0. 2%，马钱子碱峰面积值的 ＲSD 为
0. 5%，表明所用仪器进样精密度良好。
2. 5. 2 中间精密度 变更实验人员，取 3 批样品，
按“2. 2. 2”项下方法制备供试品溶液，依法在不同
仪器上测定样品中士的宁和马钱子碱的含量。结果
3 批样品中士的宁的 ＲSD 分别为 1. 6%、1. 7%、
0. 8%;马钱子碱的 ＲSD 分别为 1. 2%、1. 3%、
1. 2%。测定结果见表 1。
表 1 3 批样品中间精密度试验结果 mg·g －1
批号
Agilent 1100型
高效液相色谱仪
岛津2010 CHT
高效液相色谱仪
士的宁 马钱子碱 士的宁 马钱子碱
20120801 0. 63 0. 40 0. 65 0. 41
20120802 0. 57 0. 37 0. 59 0. 38
20120803 0. 63 0. 40 0. 64 0. 41
2. 6 稳定性试验
取供试品溶液，经放置不同时间，按上述色谱条
件测定，结果士的宁峰面积值的 ＲSD为 1. 3%，马钱
子碱峰面积值的 ＲSD为 1. 5%，表明 30 h 内供试品
溶液中的士的宁、马钱子碱基本稳定。
2. 7 重复性试验
取同一供试品，依法独立测定 6 次，按外标法计
算士的宁和马钱子碱的含量，结果士的宁平均含量
为 0. 63 mg·g －1，其 ＲSD为 1. 0%;马钱子碱平均含
量为 0. 40 mg·g －1，其 ＲSD 为 1. 2%。表明方法的
重复性良好。
2. 8 加样回收率试验
取已知含量的供试品(士的宁含量为 0. 63
mg·g －1，马钱子碱含量为 0. 40 mg·g －1)6 份，每份
约 1. 5 g，精密称定，加硅藻土 1. 5 g，精密加入对照
品溶液(含士的宁 0. 075 43 mg·mL －1，马钱子碱
0. 093 45 mg·mL －1，三氯甲烷溶液)10 mL，再精密
加入三氯甲烷 30 mL，按“2. 2. 2”项下方法制备供试
品溶液，依法测定，按外标法计算士的宁和马钱子碱
的含量，计算回收率。结果见表 2。
2. 9 样品测定
取 8 批样品，依法测定，结果见表 3。
3 讨论
3. 1 提取方法的考察
由于该剂型为丸剂，故要考虑样品的溶散和能
表 2-1 士的宁加样回收率试验结果
取样量
/ g
测得量
/mg
样品中含量
/mg
加入量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
ＲSD
/%
1. 515 2 1. 716 1 0. 954 6 0. 754 3 100. 95
1. 544 1 1. 727 0 0. 972 8 0. 754 3 99. 99
1. 592 2 1. 729 2 1. 003 1 0. 754 3 96. 26 98. 5 1. 4
1. 551 4 1. 722 6 0. 977 4 0. 754 3 98. 79
1. 598 8 1. 745 6 1. 007 2 0. 754 3 97. 89
1. 581 4 1. 728 3 0. 996 3 0. 754 3 97. 04
表 2-2 马钱子碱加样回收率试验结果
取样量
/ g
测得量
/mg
样品中含量
/mg
加入量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
ＲSD
/%
1. 515 2 1. 513 2 0. 606 1 0. 934 5 97. 07
1. 544 1 1. 538 1 0. 617 6 0. 934 5 98. 50
1. 592 2 1. 572 1 0. 636 9 0. 934 5 100. 07 99. 0 0. 8
1. 551 4 1. 549 7 0. 620 6 0. 934 5 99. 42
1. 598 8 1. 570 5 0. 639 5 0. 934 5 99. 63
1. 581 4 1. 562 0 0. 632 6 0. 934 5 99. 45
表 3 8 批样品含量测定结果 mg·g －1
批号 士的宁含量 马钱子碱含量
20120801 0. 63 0. 40
20120802 0. 57 0. 37
20120803 0. 63 0. 40
20120901 0. 58 0. 35
20120902 0. 55 0. 34
20120903 0. 62 0. 39
20121001 0. 60 0. 38
20121002 0. 58 0. 37
否提取完全。取样品适量，研细，取 3 g，精密称定，
置具塞锥形瓶中;①加入硅藻土 4 g，混匀，精密加入
氢氧化钠试液 9 mL，混匀，放置过夜，精密加入三氯
甲烷 40 mL，密塞，称定重量，置水浴中回流提取
2 h;②精密加入氢氧化钠试液 9 mL，混匀，放置过
夜，精密加入三氯甲烷 40 mL，密塞，称定重量，置水
浴中回流提取 3 h;③精密加入氢氧化钠试液 9 mL，
混匀，放置 30 min，精密加入三氯甲烷 40 mL，密塞，
称定重量，置水浴中回流提取 2 h;④精密加入氢氧
化钠试液 9 mL，混匀，放置过夜，精密加入三氯甲烷
40 mL，密塞，称定重量，置水浴中回流提取 2 h;放
冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，
分取三氯甲烷提取液，精密量取三氯甲烷提取液
4 mL，置 10 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，
作为供试品溶液。四种提取方法的结果见表 4。
Drug Standards of China 2016，Vol. 17 No. 6 中国药品标准 2016 年第 17 卷第 1 期 37
表 4 提取方法考察结果 mg·g －1
提取方法 ① ② ③ ④
士的宁含量 0. 63 0. 63 0. 60 0. 63
马钱子碱含量 0. 40 0. 40 0. 35 0. 40
四种提取方法结果表明:加入硅藻土对提取没
有影响，故选择不加硅藻土;浸泡过夜明显优于放置
30 min，故选择浸泡过夜;2 h 提取已经完全，故选
择回流 2 h。
3. 2 耐用性考察
取同一供试品溶液及对照品溶液，依法分别采
用三个不同的色谱柱:Luna C18(4. 6 mm × 250 mm，
5 μm);Agilent HC C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm);
Diamonsil C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)进样测定。
结果显示，三种色谱柱均能达到方法系统适用性的要
求，参照《中国药典》2010 年版一部马钱子粉［2］项下
含量测定理论板数按士的宁峰计不得低于 5 000，故
规定本法的理论板数按士的宁峰计不得低于 5 000。
3. 3 限度的拟定
根据 8 批样品测定结果及生产厂家提供的药材
含量，计算转移率。士的宁和马钱子碱转移率均约
为 92% ～ 100%。参考生产厂家提供的药材转移
率，参考 2010 年版药典一部马钱子粉项下规定“本
品按干燥品计算，含士的宁(C21 H22 N2 O2)应为
0. 78% ～ 0. 82%，马钱子碱(C23H26 N2O4)不得少于
0. 50%”，马钱子粉水分最大值为 14. 0%，按水分为
14% ～0 的限度计算，含士的宁(C21 H22 N2 O2)应为
0. 67% ～ 0. 82%;按水分为 14% 计算，马钱子碱
(C23H26N2O4)不得少于 0. 43%。本品马钱子粉投
料为 120 g，按照处方共制成 1 380 ～ 1 490 g。计算
士的宁含量限度:下限(按照粉末转移率为 80%计
算)为 120 × 0. 67% /1 490 × 80% × 1 000 = 0. 43
mg·g －1;上限(按照粉末转移率为 100%计算)为
120 ×0. 82% /1 380 × 100% × 1 000 = 0. 71 mg·g －1。
计算马钱子碱含量限度:下限(按照粉末转移率为
80%计算)为 120 × 0. 43% /1 490 × 80% × 1 000 =
0. 27 mg·g －1。故拟定本品含马钱子粉以士的宁
(C21H22N2O2)计，每 1 g应为 0. 43 ～ 0. 71 mg，以马钱
子碱 (C23H26N2O4)计不得少于 0. 27 mg。
参考文献
［1］ 卫生部药品标准·中药成方制剂［S］. 第一册 . 18
［2］ 中国药典［S］. 2010 年版 . 一部 . 48
(收稿日期:2015-09-21)
作者简介:沈于兰，副主任药师;研究方向:药物分析。Tel:13814241177;E-mail:beulah0397@ 126． com
HPLC法同时测定止咳平喘类中成药中非法添加的 9 种化学成分
沈于兰1，申兰慧1，苏嘉焱2(1． 江苏省无锡药品检验所，无锡 214021;2． 南京中医药大学，南京 210023)
摘要 目的:建立同时检测止咳平喘类中成药中非法添加的 9 种化学成分的方法。方法:采用资生堂 MG II C18柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm);流动相 A 为乙腈-甲醇(1∶ 1)，流动相 B 为 10 mmol·L －1乙酸铵溶液(含 0. 1%甲酸)，梯度洗脱，流量 1. 0
mL·min －1;检测波长为 225 nm和 360 nm。结果:各成分之间分离良好，9 种化学成分在其线性范围内线性关系良好，平均回
收率为 95. 1% ～ 98. 9%，最低检测限均符合检测需求。结论:本法简便准确，灵敏度高，通用性好，适用于止咳平喘类中成药
中 9 种非法添加化学成分的检测。
关键词:止咳平喘类中成药;高效液相色谱法;非法添加化学成分
中图分类号:Ｒ 921. 2 文献标识码:A 文章编号:1009 － 3656(2016)－ 1 － 37 － 4
HPLC Determination of 9 Chemical Compositions Illegally Added in Traditional Chinese
Medicine for Ｒelieving Cough and Asthma
Shen Yulan1，Shen Lanhui1，Su Jiayan2(1． Wuxi Institute for Food and Drug Control，Wuxi 214021;2． Nanjing University Of Traditional
Chinese Medicine，Nanjing 210023)
Abstract Objective:To establish an HPLC method for determining 9 chemical compositions illegally added in traditional Chinese medi-