全 文 ：中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1月·23·
即香草酸。
化合物Ⅶ：淡黄色粉末(甲醇一水)，mp199℃。
1H—NMR、”C—NMR光谱对照文献数据[1⋯，确定化
合物Ⅶ为2，5一二羟基苯甲酸，即龙胆酸。
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GPC’法测定仙人掌多糖相对分子质量以及HPLC—ELSD法
测定其单糖组成
金鑫1’2，赖凤英1
(1．华南理工大学轻工与食品学院，广东广州510640；2．圣安娜饼屋(深圳)有限公司，广东深圳518126)
多糖类的活性与其相对分子质量大小、聚合度、
分支度以及溶液中高级构象等都有关，多糖相对分
子质量太大或太小均会引起活性的下降。因此，多糖
的结构是其生物活性的基础，多糖的一级结构和高
级结构与其生物活性间的构效关系是当前糖化学和
糖生物学共同关注的焦点问题。多糖结构研究的主
要内容有相对分子质量测定、多糖的单糖组成、糖苷
键构型、聚合度、分支度等基本结构以及多糖的溶液
构象等口]。本研究用热水提取的仙人掌粗多糖，提取
液经Savag法脱蛋白后，采用SephacrylS一400柱色
谱纯化，得到仙人掌多糖(OP)，经过高效凝胶渗透
色谱和常压凝胶柱色谱分析表明，OP为均一多糖。
本实验对纯化后的仙人掌多糖组分OP的理化
性质进行了研究，并利用凝胶渗透色谱法(GPC)测
定仙人掌多糖OP的相对分子质量以及HPLC—
ELSD分析其单糖组成。
1材料与方法
1．1 材料与试剂：米邦塔仙人掌：购于海南省仙科
农业开发有限公司，晒干，磨粉备用。试验所用3，5一
二硝基水杨酸、葡萄糖、苯酚、硫酸、氯仿、正丁醇、磷
酸二氢钾、茚三酮等均为分析纯。各种糖标准品：葡
萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖醛酸
购于Fluka公司。SephacrylS一400HR凝胶填料：
Amersham公司。SephadexG～200凝胶填料：Phar—
macia公司。
1．2试验仪器：旋转蒸发仪，电热恒温水浴锅，Wa—
ters2410示差折光检测器，Waters717plus自动进
样器，Waters1525HPLC泵，柱温箱，Alltech
ELSD2000蒸发光散射检测器，S21—6型电子恒温
水浴锅，80一2型离心机，HL一2A恒流泵，DBSq00电
脑全自动部分收集器，Unico—UV21202PC紫外一可
见分光光度计、WZZ一2A自动旋光仪。
1．3仙人掌多糖OP的理化特性分析：观察仙人掌
多糖OP的外观，测定OP的比旋光度、在不同溶液
中的溶解度以及与不同化学试剂的特异性反应。
1．4凝胶渗透色谱法(GPC)测定多糖相对分子质
量[2]：色谱条件：TSKG一5000PW×L凝胶柱，TSK
G一3000PW×L凝胶柱；流动相为0．02mol／L
KH2P04溶液，pH6．0；体积流量0．6mL／min；柱温
40oC；进样20弘L；标样为已知相对分子质量的葡聚
收稿日期：2006—05—26
作者简介：金鑫(1981一)，女，硕士研究生，主要从事天然产物提纯分离及活性研究。
Tel：13751760520E—mail：jxinemail@126．corn
万方数据
·24· 中草115ChineseTraditiOnalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1月
糖标准品(Dextran，相对分子质量为0．44×104，
2．14×104，1．24×105，1．96×105，2．77×105，
4．01×105，Sigma公司)；检测器为Waters2410示
差折光检测器。
测定方法：将已知相对分子质量的葡聚糖标准
品分别用流动相配制成1．0mg／mL的溶液，进样量
为20弘L，记录GPC色谱图，用BreezeGPC软件以
标准葡聚糖相对分子质量的对数log‰对洗脱体
积ElutionV lume进行回归处理[3]。将多糖样品用
流动相配制成1．0mg／mL的溶液，进样20肛L，测
得多糖样品的保留时间，利用标准曲线求得多糖相
对分子质量。
1．5 HPLC／ELSD分析仙人掌多糖OP的单糖组
成：色谱条件：c。。柱；流动相为乙腈一水(70：30)，体
积流量为1．2mL／min；柱温40℃；ELSD漂移管温
度为100℃；气体压力2．4L／h。仙人掌多糖OP水
解样品制备：取40mg加入到2mL硫酸(2tool／L)
中，105℃封管水解10h后于50℃水浴中以Ba—
CO。中和，高速离心除去沉淀。测定方法：将单糖标
准品分别配制成1．0、2．0、3．0、4．0、5．0mg／mL的
溶液，进样量为5pL，记录色谱图，用origin软件以
峰面积(A)的对数logA对单糖标准品浓度进行回
归处理，得出单糖标准曲线。再配置混合标准单糖溶
液，进样量为5弘L。再将多糖水解样品进样，记录色
谱图，测得多糖水廨样品的各单糖的保留时间及峰
面积，利用混合标准单糖和单糖标准曲线求出仙人
掌多糖组分OP的单糖组成及摩尔比[4|。
2结果与讨论
2．1 OP的理化性质：仙人掌多糖OP为淡黄色粉
末；易溶于水，不溶于乙醇、乙醚及丙酮等有机溶剂；
比旋光度为■]磬℃=+11．25。；与KI—I。作用不显蓝
色；OP与硫酸一苯酚作用显棕黄色；与茚三酮作用显
淡紫色。
2．2 GPC测定OP分子量：图1为经BreezeGPC软
件处理，以标准葡聚糖相对分子质量的对数logMw对
洗脱体积进行回归所得葡聚糖Dextran系列标准品的
GPC标准曲线图，标准曲线方程为logMw一1．03e+
002—1．86e+001V+1．18e+000V2—2．51e一
002V?(其中y表示洗脱体积)。由标准曲线求得OP
的重均分子量(Mw)为1．73×105，数均相对分子质量
(Mn)为1．25×105，峰位相对分子质量(Mp)为
3．47×105，相对分子质量分布宽度为1．42。
2．3 HPLC—ELSD分析仙人掌多糖OP单糖组成：
由各种糖的标准品的ELSD色谱图可得出各种糖
的保留时间和峰面积。用origin软件以峰面积的对
数logA对各种糖的浓度进行回归处理，得出各种
糖的浓度标准曲线，见表1。
图1为混合标准品ELSD色谱图，包括葡萄糖
醛酸、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖。与各
种糖标准品单标准ELSD色谱图比较，根据保留时
间可得出1为葡萄糖醛酸、2为鼠李糖、3为阿拉伯
糖、4为葡萄糖、5为蔗糖、6为麦芽糖。
表1糖类对照品的保留时间和标准曲线
Table1 Retentionmeandstandardcurve
ofreferencemonosaccharides
t／min
图1混合对照品ELSD色谱图
Fig．1ELSDChromatogramofcomplex
referencemonosaccharides
图2OP水解样品的ELSD色谱图由保留时间
和峰面积可得出，仙人掌多糖组分OP是由葡萄糖
醛酸、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖4种单糖组成的杂
多糖，由峰面积代入各单糖标准曲线求出各单糖的
浓度，再除以各单糖的摩尔相对分子质量得出这4
00 I．3 25 3．8 50 63 75 88 100
t／min
图2 OP水解样品的ELSD色谱圈
Fig．2ELSDChromatogramofOPhydrolyzatesample
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1月·25·
种单糖的摩尔比为0．59：1：2．98：2．57。
3小结
3．1 仙人掌多糖0P理化性质为淡黄色粉末；易溶
于水；不溶于乙醇、乙醚及丙酮等有机溶剂；比旋光
度为[a]哿℃一+11．25。；与KI—I。作用不显蓝色；OP
与硫酸一苯酚作用显棕黄色；与茚三酮作用显淡
紫色。
3．2 凝胶渗透色谱法(GPC)测定OP的Mw为
1．73×105，Mn为1．25×105，Mp为3．47×105，相
对分子质量分布宽度为1．42。
3．3用HPLC-ELSD测定OP单糖组成为葡萄糖
醛酸：鼠李糖：阿拉伯糖：葡萄糖=0．59：1t 2．98：
2．57。
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冬凌草化学成分的研究
刘净，谢韬，魏秀丽，杨春华，梁敬钰+
(中国药科大学天然药物化学教研室，江苏南京210038)
冬凌草，学名碎米桠Rabdosiarubescen$(Hem—
s1．)Hara，是一种唇形科香茶菜属植物，产于我国
河南、河北、湖南、湖北、四川、贵州、广西、陕西、甘
肃、山西、浙江、安徽及江西等地。具有清热解毒、消
炎止痛等功效，用于治疗食管癌、贲门癌、原发性肝
癌、咽喉炎、扁桃体炎等。近年来药理实验还证明其
具有中枢抑制、抗氧化等活性。虽然国内外学者自
20世纪70年代起就对冬凌草的化学成分陆续进行
了研究，但主要针对其二萜类成分，而对其他成分研
究很少。为全面了解冬凌草的化学组成，探索其中的
活性成分，笔者对河南济源产冬凌草地上部分的化
学成分进行了研究，从中分离得到10个化合物，经
波谱解析和理化常数对照，确定了它们的结构，分别
为5，8，4-三羟基一6，7，3-三甲氧基黄酮(5，8，4’一
trihydroxy一6，7，3-trimethoxylflavone，I)、苜蓿素
(tricin，Ⅱ)、冬凌草乙素(ponicidin，噩)、lasiodonin
(Ⅳ)、冬凌草甲素(oridonin，V)、胡麻素(pedalitin，
VI)、丁二酸(succinicacid，Ⅶ)、肌醇(inositil，Ⅶ)、
enmenol一1一O—pD—glucoside(Ⅸ)和山奈酚一3，7一O—a一
￡一二鼠李糖苷(kaempferol一3，7-O-a—L—dirhamno—
side，X)。其中，化合物I，lI，Ⅶ，Ⅷ和x为首次从
冬凌草中分离得到。
1仪器与材料
X一4数字显示显微熔点测定仪(温度未校正)；
AgilentUV一2501PC紫外分光光度计测定紫外光
谱；NicoletImpact一410型红外光谱仪(KBr压片)；
BurkerAV一300核磁共振波谱仪(TMS内标)；ESI—
MS质谱用HP一100型质谱仪(LC／MSDSystem，
ESIMode)测定；El—MS质谱用VG型质谱仪测定；
所用试剂均为分析纯；柱色谱、薄层色谱硅胶及高效
GF。。。薄层色谱硅胶板均为青岛海洋化工厂产品。
药材由河南济源医药公司采购，经中国药科大
学中药标本馆宋学华副教授鉴定为唇形科香茶菜属
植物碎米桠R．rubescens(Hemsl．)Hara的地上部
分。
2提取和分离
取冬凌草干燥地上部分10kg，用80％乙醇回
流提取(2000mL×2)，减压浓缩提取液至含醇量
约60％，静置过夜，滤过。滤液减压浓缩至无醇，依
次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取(得石油醚萃取
液、醋酸乙酯萃取液和正丁醇萃取液)。醋酸乙酯萃
取液浓缩，得该部分浸膏151g。正丁醇萃取液浓缩，
得该部分浸膏139g。
醋酸乙酯萃取液浸膏通过反复硅胶柱色谱(氯
收稿日期：2006—02一lO
作者简介：刘净(1981一)，女，湖北省鄂州市人，中国药科大学天然药物化学专业2001级硕士。
Tel：(025)85322738E-mail：tiujin9919@hotmail．com
*通讯作者粱敬钰Tel：(025)85391289E—mail：Jyliang@publicl．ptt．jS．cn
万方数据
GPC法测定仙人掌多糖相对分子质量以及HPLC-ELSD法测定其
单糖组成
作者： 金鑫， 赖凤英
作者单位： 金鑫(华南理工大学轻工与食品学院,广东,广州,510640;圣安娜饼屋(深圳)有限公司,广东
,深圳,518126)， 赖凤英(华南理工大学轻工与食品学院,广东,广州,510640)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(1)
被引用次数： 7次

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2.刘芹.宁嘉玲.丁侃 基于高效凝胶渗透色谱法的银耳多糖质量控制研究[期刊论文]-中草药 2011(9)
3.蔡皓.傅紫琴.李俊松.蔡宝昌 山药麸炒前后多糖成分的含量及单糖组成研究[期刊论文]-南京中医药大学学报
（自然科学版） 2008(2)
4.曾富华.赵龙岩.饶力群 仙人掌多糖研究进展与开发利用前景[期刊论文]-中国生化药物杂志 2011(5)
5.陈琴鸣.刘文英 HPLC-ELSD在中药糖类分析中的应用[期刊论文]-中草药 2008(6)
6.多糖的制备技术及分析方法的研究现状[期刊论文]-中国药师 2009(8)
7.陈丽萍.赵磊.彭雪晶.刘雄 高效液相色谱常用检测器在中药多糖成分分析中的应用概况[期刊论文]-甘肃中医学
院学报 2013(5)


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