全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月·925·
酸试剂作为显色剂，喷雾后，在110℃下烘5min
后，地上部分有2个蓝黑色斑点，其Rf值分别为
0．47和0．34，根有2个蓝黑色斑点，其Rf值分别
为0．47和0．36。
3．2 紫外光谱：称取药材根和地上部分的粗粉各
10g，分别加95％乙醇100mL水浴加热回流1h，
滤过。分别取滤液0．5mL稀释至50倍，摇匀，在
200～800nm波长测定紫外光谱，结果地上部分在
280、219nm有吸收，根在280、225nm有吸收。
4小结
梵天花根横切面薄壁细胞含众多草酸钙簇晶，
韧皮部射线呈漏斗状。茎横切面表皮有非腺毛，韧皮
部射线呈漏斗状。叶横切面上、下表皮有哑铃状的气
孔及腺毛、星状非腺毛。全草粉末有导管、腺毛、非腺
毛、纤维、草酸钙簇晶、棕色块、淀粉粒。这些显微特
征是重要的鉴别特征。此外，梵天花薄层色谱和紫外
吸收光谱鉴别梵天花根和梵天花茎中所含化学成分
的异同性，可为其开发利用提供参考。
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RP—HPLC法测定龙胆中的当药苦苷和当药苷
魏岚，陈晓辉，毕开顺。
(沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳 110016)
龙胆为龙胆科植物条叶龙胆Gentianama —
shuricaKitag．、龙胆G．scabraBunge、三花龙胆G．
triyToraPall．或坚龙胆G．rigescensFranch．的干
燥根及根茎[1]，尚有非正品草本威灵仙(草龙胆)
Veronicastrumsibiricum(L．)Pennell的干燥根及
根茎和红花龙胆G．rhodanthaFranch．的干燥全
草。龙胆苦、寒，归肝、胆经，具有清热澡湿、泻肝胆火
的功效[1]，主要分布于黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古，
浙江、湖南、江西、福建、江苏、广东、新疆也有分布。
龙胆的主要有效成分为裂环烯醚萜苷类，主含龙胆
苦苷、当药苦苷(swertiamarin，SwT)、当药苷
(sweroside，SWO)等。本实验采用正交试验考察了
龙胆中当药苦苷和当药苷的提取工艺，建立了龙胆
中当药苦苷和当药苷同时定量的RP—HPLC法，并
对38个不同产地的龙胆进行了测定，从而为龙胆
的质量研究提供了科学依据。
1仪器与试药
岛津LC一10A高效液相色谱仪，SPD--10A
紫外检测器，N2000色谱工作站，岛津UV--265FW
型紫外分光光度仪，SartoriusBP210S型电子分析
天平，ZFQ85A型旋转蒸发仪。甲醇、乙腈为色谱
纯，其他试剂为分析纯。龙胆样品共38批，由本校
孙启时教授鉴定，粉碎过40目筛，置于干燥阴凉处
备用。当药苦苷和当药苷对照品，购于昆明同持医药
有限公司，质量分数为99．5％。
2 方法
2．1 提取工艺的考察：以当药苦苷和当药苷为检测
指标，选取溶剂用量、提取时间、提取次数3个因素，
每个因素3个水平，采用L。(34)正交表进行试验，
按2．4项制备样品溶液，按2．5项进行测定。综合
直观分析和方差分析的结果，确定最佳提取工艺为：
用20倍于药材量的甲醇超声提取2次，每次10
rain。
2．2检测波长的选择：取当药苦苷和当药苷的对照
品适量，用甲醇分别配制成质量浓度为10mg／L的
溶液，在400200nm进行紫外扫描，结果显示当
药苦苷的最大吸收波长为235nm，当药苷的最大吸
收波长为243nm，故选择240nm为检测波长。
．3对照品溶液的制备：分别精密称取当药苦苷对
照品10mg，当药苷对照品8mg，置25mL量瓶
收稿日期：2004—08—12
作者简介：魏岚(1978)，女，辽宁省沈阳市人，硕士研究生，从事中药现代化研究。Tel：(024)23986268
*通讯作者毕开顺E—mail：ksbi@mail．sy．In．cn
万方数据
·926· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月
中，甲醇超声溶解并加至刻度，摇匀，备用。
2．4供试品溶液的制备：取龙胆药材粉末0．2g，
加入4mL甲醇，超声提取2次，每次10min，合并
提取液并滤过，回收溶剂后用甲醇溶解并转移至10
mL量瓶中，加至刻度摇匀，经0．45／．tm微孔滤膜滤
过，作为样品溶液。
2．5色谱条件：色谱柱：DiamonsilC18(4．6mm×
200mm，5um)；流动相：乙腈一水一醋酸(10：105：
1)；体积流量：1．0mL／min；紫外检测波长：240am；
柱温：室温；进样量：20扯L。
2．6线性关系：分别精密量取当药苦苷对照品溶液
0．1、0．2、0．4、0．8、1．2、1．6mL，当药苷对照品溶液
0．1、0．6、1．2、1．8、2．4、3．0mL置10mL量瓶中，
用甲醇定容摇匀，按2．5项测定。结果表明，当药苦
苷、当药苷质量浓度(x)分别在4．0～64mg／L，
3．2～96mg／L，与峰面积(y)呈线性关系。回归
方程分别为Y一1．000×107X+1．745×103，
，．一0．999；Y一1．000×107X+2．491×103，r一
0．9998。
2．7 精密度试验：精密吸取同一对照品溶液20
肚L，测定，连续进样6次，当药苦苷和当药苷的峰面
积RSD分别为1．0％、0．7％(咒一6)。
2．8重现性试验：精密称取同一产地(黑龙江省依
兰县)的龙胆药材粉末0．2g，按2．4项制备6份样
品溶液，测定，计算当药苦苷和当药苷的质量分数，
其RSD分另Ⅱ为1．2％、1．0％(咒一6)。
2．9稳定性试验：取同一供试品溶液分别在0、2、
4、8、12、24h测定，结果表明当药苦苷和当药苷在
24h内稳定性良好，峰面积RSD分别为1．3％、
0．8％。
2．10加样回收率试验：精密称取已知质量分数的龙
胆药材粉末(产于黑龙江省依兰县)9份各0．1g，每
3份分别准确加入高、中、低3个不同量的当药苦苷
和当药苷对照品，制备样品溶液，测定，结果当药苦苷
平均回收率98．3％，RSD为0．6％(，z一3)；当药苷
平均回收率98．5％，RSD为0．5％(咒一3)。
2．11样品测定：取各产地的龙胆样品粉末0．2g，
制备样品溶液，测定，结果见表1，色谱图见图1。
3讨论
3．1 曾比较了回流法和超声法对当药苦苷和当药
苷提出率的影响，回流法提出杂质较多，所测成分在
高温时分解、含量变低；而超声法提出杂质较少，并
且不存在高温时物质分解的问题，因此选择超声法。
3．2 38批龙胆样品中均含有当药苦苷，质量分数
表1样品测定结果(一一3)
Table1 Determinationresultsofsample(捍一3)
f 7mlrl
1一当药苦苷2一当药苷
1-swertiamarin2一sweroside
图1 对照品(A)和样品(B)的HPLC图谱
Fig．1HPLCchromatogramsfreferencesubstances(A)
andsample(B)
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月·927·
最高的4个产地依次为桦甸市、吉林市、齐齐哈尔市
和黑龙江省依兰县，且均高于3mg／g，这4个产地
的龙胆样品属于道地药材，且均来源于主产地。
3．3 38批龙胆样品中当药苷质量分数差异很大。
25批样品中检出当药苷，13批样品中未测出当药苷
或其量极低。黑龙江省依兰县所产的龙胆中当药苷
质量分数最高(5．41rag／g)，其余产地的样品中当
药苷均低于0．8mg／g。
Reference：
[1]c仇P(中国药典)Cs3．VolI．2000．
HPLC法测定九节菖蒲中5一羟基4一氧代戊酸
谭文界，游菲，黄敏
(湖北中医学院，湖北武汉430061)
九节菖蒲为毛茛科植物阿尔泰银莲花
AnemonealtaicaFiseh．exC．A．Mey．的根茎，具
有开窍、豁痰、祛风、宣湿、醒脾、解毒等功效。本课题
组从九节菖蒲中分离得多个化合物，其中质量分数
较高、具生物活性(镇静)且在其他中药中尚未发现
的成分是5一羟基4一氧代戊酸。本实验采用HPLC法
对该有机酸进行了分析，分离效果、线性、重现性等
良好，回收率符合要求，可作为该药材质量控制的有
效手段之一。
1仪器与试药
Dionex高效液相色谱仪，UVD一170u检测
器、Chromeleon色谱工作站、PHS一25型pH计。九
节菖蒲A．altaicaFisch．exC．A．Mey．(经本院
陈科力教授鉴定)，5-羟基4一氧代戊酸对照品(自
制，经熔点、IR、13C—NMR、1H—NMR谱确认其结
构)。
2方法与结果
2．1 薄层色谱鉴别：取九节菖蒲药材粉末(过20
目筛)1g，加水10mL提取30rain，滤过，滤液用
醋酸乙酯萃取，醋酸乙酯液浓缩作为对照药材溶液。
另取少量5一羟基4一氧代戊酸用醋酸乙酯溶解作为
对照品溶液。
吸取上述两种溶液各约5ttL分别点于同一羧
甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶薄层板上，以甲苯一醋
酸乙酯一甲酸(4：5：1．5)为展开剂、展开、取出、晾
干，待甲酸挥尽时，喷以溴甲酚兰显色剂，对照品、对
照药材在相同Rf值处显黄色斑点。
2．2色谱条件：色谱柱为AlhimaC，。反相色谱柱
(250mm×4．6ITlm，5肛m)；流动相：5g／L
(NH。)。HPO。缓冲液；体积流量：1mL／min；柱温：
收稿日期：2004—0901
25℃；检测波长：214nm。色谱图见图1。
1．Peakl．8656
A B
88 100 63 75 88
f／mln
图1 对照品(A)和样品(B)的HPLC色谱图
Fig．1HPLCchromatogramsfreference
substance(A)andsample(B)
2．3对照品溶液的制备：分别精密称取5一羟基4一
氧代戊酸对照品2．1、4．2、6．3、8．4、10．5mg，分别
置于10mL量瓶内，加流动相溶解，至刻度，得相应
质量浓度的对照品溶液。
2．4供试品溶液的制备：精密称取九节菖蒲药材粉
末(过20目筛)1．003g，加蒸馏水lomL水浴温
浸40min，滤过，滤液用醋酸乙酯萃取3次(每次各
10mL)回收醋酸乙酯液，残余物用流动相溶解，移
至10mL量瓶内并加至刻度。
2．5标准曲线的制备：按上述色谱条件，分别对5
种不同质量浓度的对照品溶液进样20肚L，测定。以
峰面积积分值(y)对质量浓度(x)进行回归分
析，得回归方程：Y一5．8960X+0．0003，r一
0．999，结果表明：5一羟基4一氧代戊酸在0．21～
1．05mg／mL与峰面积线性良好。
2．6精密度试验：取同一供试品溶液，在选定的色
谱条件下，依法测定，重复进样5次。计算5一羟基4一
氧代戊酸峰面积的RSD为1．19％。
2．7稳定性试验：取同一供试品溶液，分别在放置
万方数据
RP-HPLC法测定龙胆中的当药苦苷和当药苷
作者： 魏岚， 陈晓辉， 毕开顺
作者单位： 沈阳药科大学药学院,辽宁,沈阳,110016
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(6)
被引用次数： 3次

参考文献(1条)
1.中国药典(一部) 2000

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1. 郭海凤.朴惠顺 龙胆苦苷的提取工艺及药理作用研究进展[期刊论文]-延边大学医学学报2010,33(1)
2. 李艳 秦艽中苦味苷的提取工艺研究[期刊论文]-西北药学杂志2003,18(2)
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7. 杨维霞.周乐.耿会玲.秦宝福 龙胆科药用植物化学成分的研究现状[期刊论文]-西北植物学报2003,23(12)
8. 聂颖杰 微波提取HPLC测定麻花艽地上部位龙胆苦苷、獐牙菜苷及总环烯醚萜苷的含量[会议论文]-2008
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2.曹悦.左代英.刘敬武.孙启时 GAP生产基地龙胆的质量控制及评价[期刊论文]-中草药 2010(5)
3.吴立宏 中药龙胆的应用传承[期刊论文]-世界科学技术-中医药现代化 2011(2)


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