全 文 ：·1038· 中草喃ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第7期2006年7月
药理与临床
五加皮Age蛋白在正常小鼠与荷瘤小鼠体内的组织分布
赵学涛，单保恩+，张静
(河北医科大学第四医院科研中心暨河北省肿瘤基因诊断、预防和治疗重点实验室，河北石家庄050011)
摘要：目的探讨五加皮抗肿瘤成分Age蛋白在正常小鼠与荷瘤小鼠体内的组织分布。方法用氯胺T法对
Age蛋白进行”5I标记(形成”5I-Age)，由尾iv小鼠后，于不同时间取组织和血液标本，测定放射cpm比值。以放
射参与量(即脏器与血液中cpm比值)作为”5I-Age在组织中分布的依据。结果在一次性快速iv”5I-Age2h
后，正常小鼠和荷瘤小鼠体内均以肾脏中”5I-Age的分布量最高，肝脏和肺部放射参与量也较高，与心脏、脾脏等
其他脏器相比差异有显著性(P
关键词：五加皮；”5I标记；Age蛋白；组织分布
中图分类号：R285．61 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)07—1038—04
InvivotissuedistributionofAgeproteinfromCortexAcanthopanacis
innormalandtumor-bearingmice
ZHAOXue—tao，SHANBao—en，ZHANGJing
(ResearchCenterandKeyLaboratoryofTumorGeneDiagnosis，ProphylaxisandTre tmentinHebeiProvince，
TheFourthHospitalofHebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050011，China)
Abstract：ObjectiveTodeterminetheinvivotissuedistributionofAgeprotein，anantitumorcorn—
ponentisolatedfromCortexAcanthopanacisinnormalandtumor-bearingmice．MethodsAgeproteiniso—
latedfromCortexAcanthopanaciswaslabelledwith125I(12sI—Age)bychloramine—Tmethod．Thedistribu—
tionof125I—Ageinvariousrganswasjudgedbythecpmratiooftheirrelativemixtureof adioactivitycorn—
paredtOthatofblood．ResultsTwohoursafterrapidvinjectionof125I—Ageinmicetailonce．thehighest
concentrationof125I-Agewasinkidney，followedsuccessivelyinliverandlungwhichwerehigherthan
thatinheart，liver，andothero gansaswell，showingsignificantdifferencestatistically(P<0．01)．The
concentrationof125I—Ageintheurinewasratherhigh．Intumor—bearingmicebyivthesamedose，thecon—
centrationof125I—Ageinkidney，liver，andlungw shigherthanthatinnormalmice(P
higherinthetissuewithabundantbloodstream．TheAgeproteinisexcretedmainlybyurinarysystem，
andhardtopermeatethroughblood—cerebralbarrier．
Keywords：ComexAcanthopanacis；125Ilabelled；Ageprotein；tissued tribution
本课题组在对500种中药筛选抗肿瘤成分过
程中，发现五加皮提取物具有较强的抗肿瘤活性[1]，
并从五加皮提取物中分离得到相对分子质量约
6．4×104的单一抗肿瘤成分——Age蛋白。研究证
实，Age蛋白对多种组织来源的肿瘤细胞增殖有较
强的抑制作用，可促进单核细胞的吞噬功能，刺激单
核细胞因子的分泌，如肿瘤坏死因子一a(TNF—a)
等。经Age蛋白作用后，肿瘤细胞周期停止在G。／
G，期，Age蛋白可诱导瘤细胞Rb、Cak。和Cak。表达
降低，使细胞停止增殖，即Age蛋白通过调节控制
细胞周期的酶类、刺激单核细胞因子的分泌及吞噬
功能的增强而发挥抗肿瘤作用。细胞因子还可通过
调节细胞免疫功能达到治疗肿瘤作用[2]。荷瘤小鼠
igAge蛋白后，实验组小鼠一般情况较对照组小鼠
收稿日期：2005—11-02
基金项目：国家自然科学基金(3037153)；河北省自然科学基金(c2004000610)
作者简介：赵学涛(1977一)，男，河北省阜城县人，硕士研究生，研究方向为肿瘤免疫及抗肿瘤药物开发。
Tel：(0311)86033941—290E—mail：ZXT7701@yahoo．corn．ca
*通讯作者单保恩Tel：(0311)86033941—283Fax：(0311)86992004E—mail：baoenshan@yahoo．corn．ca
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第7期2006年7月·1039·
好，肿瘤生长较慢，生存期明显延长[3]。然而，Age蛋
白在体内的代谢过程、对不同组织器官的亲和力及其
排泄途径尚不清楚。本实验用125I标记Age蛋白，对
其在正常小鼠和荷瘤小鼠体内的组织分布进行了研
究，为Age蛋白的进一步开发及临床应用提供资料。
1材料与方法
1．1 药物与试剂：Age蛋白由本实验室分离纯化，
质量分数>98％；Na125I购自北京原子高科核技术
应用股份有限公司；SephadexG50为华美生物技术
公司产品；胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料公
司，RPMI一1640培养基和胰蛋白酶购自美国Gibco
公司，氯胺T和偏重硫酸钠等为国产分析纯试剂。
1．2实验动物细胞株：健康昆明种小鼠，体重(20±
2)g，雄性，由河北医科大学实验动物中心提供。S。。。
小鼠腹水癌细胞株由本室存留。用RPMI一1640培养
基(含10％小牛血清、青霉素和链霉素各100U／mL)，
置于37℃、饱和湿度、5％CO。条件下培养。
1．3实验方法
1．3．1Age蛋白的125I标记和纯化：根据氯胺T
法[4’5]，向400弘LAge蛋白(1．0g／mL)中加入40
弘LNa125I(7．4×107Bq)和40弘L氯胺T(0．5
／zg／／zL)，混匀10～5S；力Ⅱ入40肚L偏重硫酸钠(20
弘g／弘L)，终止反应。然后加入0．5mLPBS(o．05
mol／L，pH7．4，含BAS1mg)。SephadexG50粉末
用0．05mol／LPBS(pH7．4)浸泡过夜，待颗粒膨
胀后制备色谱柱(2cm×10cm)，用BSA饱和过
夜。将混合物125I-Age加于柱上，用PBS洗脱。调整
体积流量0．5mL／min，用收集器(上海市卢西厂生
产，BS一100A型)收集，每管收集0．5mL洗脱液，
用7一计数仪(北京核仪器厂，FT646A3型)测定每
管cpm值，合并峰值组分，4℃保存。
1．3．2纸色谱法测量放化纯度：色谱固定相用新华
1号滤纸，展开剂为无水甲醇与KI(1％)以4：1
比例混合。在色谱纸距底边2cm处用铅笔轻轻划
一条与底边平行的起跑线。待测样品用微量加样器
点在起跑线上，样品间距离2cm，样品半径小于
0．5em。为便于鉴定，在待测样品旁点参考样。展开
液浸到起跑线以下1cm。当展开液在纸上展开到一
定程度(15cm左右)时取出，标上前沿记号，晾干
待测。计算Rf值。将纸由下到上逐段剪开(每段
1．0cm)，用7一计数仪分别测定每管cpm比值。
1．3．3Age蛋白在正常小鼠体内的组织分布：将动
物分为实验组和对照组，实验组尾iv”5I—Age(148
MBq／ZOg)。分别于注射后2、4h采用颈椎脱臼法
处死小鼠，断头取血后，分别取脑、肺、肝、脾、肾、小
肠、肌肉和脂肪组织各100mg置于试管中，用7一计
数仪测量不同标本放射线量，计算出标本的cpm值。
用脏器与血液的cpm值之比(放射参与量)来表示
125I—Age各脏器的分布情况[6’7]。如果比值大于1，说
明药物对该脏器呈高结合性。对照组在相同条件下由
尾iv同等数量125I和未标记的Age蛋白混合液，其
余处理方法同实验组。根据实验组放射参与量(A)
与对照组放射参与量(B)的比值，作为判定Age蛋
白在小鼠体内分布的依据。另取小鼠分为实验组和对
照组，两组的给药方法同上，于注射后2、4h分别收
集尿液和粪便后，断颈处死小鼠留取胆汁。方法同上
计算出尿液、粪便及胆汁中的放射参与量。
1．3．4Age蛋白在荷瘤小鼠体内的组织分布：荷
瘤小鼠模型的建立，取对数生长期S，。。细胞配制成
1×107／血L悬液，于小鼠右腋SC细胞悬液，每只
0．2mL。于接种后第6日，可见小鼠皮下有实体瘤
出现。取荷瘤小鼠，分为实验组和对照组。其他操作
同1．3．3项方法。
1．4统计学处理：数据用z±S表示，两组数据间用
t检验，应用SPSS11．0统计软件计算。
2结果
2．1
125I-Age标记物的纯化：将125I—Age用
SephadexG50凝胶色谱柱分离，分离成分cpm的
洗脱曲线如图1所示，125I—Age相对分子质量较大，
先被洗脱下来形成第一峰；125I相对分子质量较小，
洗脱速度较慢被洗脱为第2峰，两峰分离良好。
吕
一
×
一
g
旨
1 4 7 101316192225283134374043464952
色谱成分编弓
图1 ”5I-Age的SephadexG50凝胶色谱洗脱成分曲线图
Fig．1Elutioncurveof125I-AgebySephadexGS0
gelcolumnchromatography
2．2 125I-Age放化纯的测定：纸色谱法测得Rf=
0．75。放化纯=纸色谱中标记蛋白峰总cpm值／纸
色谱中各段cpm值之和；纸色谱后各段(每1em
一段)计数结果显示，cpm比值峰的位置在4．0cm
处，放化纯为96．23％。
万方数据
·1040· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第7期2006年7月
2．3地5I-Age在正常小鼠体内的组织分布：正常小
鼠一次性iv125I—Age后，2和4h放射参与量大于1
的器官有肺、肝脏和肾脏，其中肾脏为最高，与其他
脏器相比，如脑、心、脾、脂肪、肠、睾丸等(组织放射
参与量小于1)，差异显著(P<0．01)。见表1。
Age在荷瘤小鼠体内的分布情况与正常小鼠基本
相似，2和4h放射参与量大于1的器官有肺、肝脏
和肾脏，以肾脏为最高，与其他脏器相比，如脑、心、
脾、脂肪、肠、睾丸等(组织放射参于量小于1)，差异
显著(P
表1 1251-Age在正常小鼠体内组织分布(；土s，一=10)
Table1 Invivotissuedistributionof1251-Ageinnormalmice(；士s，甩=10)
与A／B<1的器官比较：。P
Table2 Invivotissuedistributionof1”l-Ageintumor—bearingmice(j士s。万一lO)
与除肺、肝脏和肾脏外的器官比较：一尸
肾脏的2、4h放射参与量比值均比正常小鼠高
(P<0．05)。
2．6”5I—Age在正常小鼠体内的代谢：表3结果显
示，小鼠尿液中的125I-Age放射参与量最高，而胆汁
和粪便中量甚微，提示该药物可能通过肾脏排泄，很
少从肝脏和肠道排泄。
3讨论
五加皮不仅在体外对多种肿瘤细胞增殖有抑制
作用，在体内也有较好的抗肿瘤效果。其抗肿瘤活性
成分是一种Age蛋白质成分。本实验将Age标记
125I后注射给正常小鼠和荷瘤小鼠，经过测定组织
翕
鬈
未
蓑
i
暴
蕊 『萤．1．r虽1．r量．1．r量．暄．r鲁暄，
脑 肺心脏肝脏脾肾脏肠脂肪肌肉睾丸
图2正常小鼠与荷瘤小鼠iv”5I-Age2h组织分布比较
Fig．2Comparisonoftissuedistributioninnormaland
tumor-bearingmiceafter2hbyiv1251-Age
5
O
5
O
5
0
2
2
l
l
0
万方数据
中草瞒ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第7期2006年7月·1041·
脑 肺心脏肝脏脾肾脏肠脂肪肌肉睾丸
图3正常小鼠与荷癯小鼠iv”5I-Age4h组织分布比较
Fig．3Comparisonoftissuedistributioninnormaland
tumor—bearingmiceafter4hbyiv125I-Age
中放射参与量，分析了其在各种脏器的分布情况，同
时以游离Na125I作对照，可以排除血中未分布的药
物以及游离125l的干扰。实验结果表明，正常小鼠肝
脏、肾脏和肺中Age蛋白分布较多，可能该蛋白与
这些脏器具有特异结合性，其中肾脏为最强。注射
125I—Age后，小鼠的脑、脂肪和肌肉组织中放射性很
小，可能与该蛋白相对分子质量较大，不易透过血脑
屏障有关。肾脏和尿液中放射参与量较高，提示该药
物可能从肾脏排泄，4h排泄量比2h高，提示Age
排泄高峰在注射后4h。注射1251-Age后，虽然小鼠
肝脏中放射参与量较高，但粪便和胆汁中的放射参
与量较少，提示该蛋白可能不通过消化道排泄。荷瘤
小鼠体内肝脏、肾脏和肺中的放射参与量比正常小
鼠相应脏器高，可能与组织血供充足有关，其具体原
因需做进一步的研究。
表3 125I-Age在正常小鼠体内排泄G+s，n一10)
Table3 Invivoexcretionof125I-Ageinnormalmice(；士s，甩一10)
与粪便或胆汁比较：一P<0．01
。。P
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补阳还五汤及其有效部位对大鼠脑缺血再灌注后caspase表达的影响
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(湖南中医药大学中西医结合学院，湖南长沙410007)
摘要：目的研究补阳还五汤及其有效部位生物碱、苷对大鼠脑缺血再灌注后脑组织caspase一1、3、8表达的影
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收稿日期：2005—12—05
基金项目：国家自然科学基金项目(30171132)；教育部高等学校学术与技术带头人资助计划项目；湖南省优秀博士论文作者科研项目
作者简介；张淑萍(1980一)，女，山东烟台人，医学硕士，从事中西医结合心脑血管病防治机制与方剂配伍的物质基础和原理研究。
E—mail：zspl980sd@126．eom
*通讯作者邓常青E—mail：dchangq@sohu．tom
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万方数据
五加皮Age蛋白在正常小鼠与荷瘤小鼠体内的组织分布
作者： 赵学涛， 单保恩， 张静， ZHAO Xue-tao， SHAN Bao-en， ZHANG Jing
作者单位： 河北医科大学第四医院,科研中心暨河北省肿瘤基因诊断、预防和治疗重点实验室,河北,石
家庄,050011
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(7)
被引用次数： 1次
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200607034.aspx