全 文 ：中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第“期2006年11月·1675‘
表3方差分析
Table3 Varaiancealysis
Fo．05(2，9)一4．26FooI(2，9)一8．02
可知各因素指标对实验结果的重要性次序为
D>A>C>B。方差分析表明，乙醇体积分数对结果
有显著性的影响，除提取回流次数外，其余因素均有
显著性，从操作简便和降低物耗的角度考虑，取提取
回流1次。故复方益精胶囊的最佳工艺条件为
A。B。C。D：．即加6倍量80％乙醇溶液，提取回流1
次，回流时间为2h。
2．4验证试验：采用优化筛选后的工艺路线重复试
验3次，测定浸膏中熊果酸的得率，结果所得浸膏中
熊果酸平均得率为0．0217％。
3讨论
本方由具有补肾益精、补肾壮阳、清热祛湿作用
的3组药材组成，用于治疗不育症，以补肾益精之山
茱萸为君药，山茱萸也是贵重药材，熊果酸是山茱萸
的主要有效成分，故选取山茱萸中熊果酸的量为优
选指标。山茱萸及处方中其余中药材均含有丰富的
营养成分和珍贵的保健成分，大部分是水溶性的有
机酸、糖、氨基酸、矿物质、维生素、苷类、可溶性蛋白
等，也有一部分脂溶性维生素、苷元及熊果酸等脂溶
性成分，选择合适的提取溶剂乙醇及其体积分数是
该工艺的关键。由实验结果可知，提取采用80％乙
醇既能获得较高的水溶性成分，又能获得较高的脂
溶性成分。并不破坏熊果酸的量。
该工艺具有稳定性好，操作简单，生产成本较低
的优点，适用于产业化，为进一步开发打下了良好的
基础。
百合不同炮制品中多糖的测定
张慧芳，蔡宝昌+，张志杰，李伟东，李 林，杨 晨
(南京中医药大学，江苏南京 210029)
百合始载于《神农本草经》，尔后历代本草均有
记载。《中国药典>>2005年版一部规定，百合为百合
科百合属植物卷丹LiliumlancifoliumThunb．、百
合L．browniiF．E．BrownvaT．viridulumBaker
或细叶百合L．pumilumDC．的干燥肉质鳞叶。百
合性味甘、寒，具有养阴润肺、清心安神之功，用于治
疗阴虚久咳、痰中带血、虚烦惊悸、失眠多梦、精神恍
惚。百合含有多种活性多糖，具有明显的补益作用与
增强免疫作用‘⋯，并具降血糖功能‘引。百合以蜜制为
主要的炮制方法，包括蜜炙法与蜜炒法，传统认为蜜
制可增强百合润肺及补益的功效。本实验分别测定
了生百合、蜜炙百合与蜜炒百合中的多糖，以考察百
合的炮制与多糖的关系。
1实验材料
百合药材购于江苏宜兴，经南京中医药大学陈
建伟教授鉴定，为卷丹L．1ancifoliumThunb．的干
燥肉质鳞叶。试剂均为分析纯。
AG285电子天平；BuchiV800旋转蒸发仪；
YXJ一2离心机；DZF一6050真空干燥箱；TU一
1800S紫外可见分光光度计。
2方法与结果
2．1试剂的配制
2．1．1对照品溶液的配制：精密称取105C干燥至
恒重的葡萄糖50．0mg，加适量蒸馏水溶解，转移至
100mI。量瓶中，加蒸馏水至刻度，混匀。精密移取该
葡萄糖溶液2．0、4．0、6．0、8．0、10．0mI，置50mI。
量瓶中，加水至刻度，配成质量浓度为0．02、0．04、
0．06、0。08、0．10mg／mI。葡萄糖对照品溶液备用。
2．1．2 供试品溶液的配制：精密称取百合多糖
10．0、20．0mg置100mI。量瓶中，加水溶解，稀释
至刻度，摇匀即得质量浓度为0．1、0．2mg／mI。多糖
供试品溶液。
收稿日期：2006—02—23
基金项目：国家科技部“十五”攻关科技专项(2001BAT01A55—36)
作者简介：张慧芳(1979一)，女，浙江金华人，南京中医药大学2004级硕士，从事中药质量控制。
Tel：(025)86798281E-mail：meixiaoll5@hotmail．120111
*通讯作者蔡宝昌Tel：(025)85811112E—mail：bccai@hotmail．COgll
万方数据
·1676· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11,El
2．1．3苯酚试剂的配制：取苯酚100g，加铝片0．1
g和NaHC030． 5g，蒸馏。收集180～182℃馏份，
称取5．0g置100mL量瓶中，加蒸馏水至刻度，溶
解，置棕色瓶中放冰箱内备用。
2．2百合不同炮制品的制备：蜜炒百合：取净百合，
置炒制容器内，用文火加热，炒至颜色加深时，加入
适量开水稀释过的炼蜜，迅速翻炒均匀，并继续用文
火炒至微黄色、不粘手时，取出晾凉。
蜜炙百合：先将炼蜜加适量开始稀释后，加入净
百合中拌匀，闷透，置锅内，用文火炒至微黄色，不粘
手时，取出晾凉。
2．3百合不同炮制品中多糖的提取和精制：精密称取
百合生品、蜜炒品、蜜炙品粉末(60目)各5．0g，加入
80％乙醇50mI．超声30min，抽滤，弃去滤液，残渣
挥干乙醇，以水超声提取2次，每次加水50mI。，超声
30rain，3000r／min离心15min，分离上清液，合并
两次上清液，减压浓缩至含生药0．5g／mI。，加无水乙
醇至含醇量为80％，静置24h，抽滤，残渣用乙醚、无
水乙醇反复洗涤，真空干燥，即得百合多糖。
2．4测定条件的考察
2．4．1 检测波长的选择：分别精确量取0．06mg／mI．
葡萄糖对照品溶液2．0mI。，样品溶液2．0mI。置干
燥试管中，再分别加入4％苯酚溶液1．0ml。摇匀，
然后加入浓H：SO。5．0mI。摇匀，另以2．0mI。水同
上操作，作为空白液，于沸水浴中恒温3．0min，取
出，冷却15min后，在200～800nm波长扫描，结果
供试品与对照品溶液在488rim波长处均有最大吸
收，而空白溶液在此波长无干扰，故选用488am为
检测波长。
2．4．2 苯酚质量浓度的选择：精确吸取0．02、
0．04、0．06、0．08、0．10mg／ml。葡萄糖对照品溶液
各2．0mI。置干燥刻度试管中，分别加4％、5％苯酚
溶液各1．0mI。，再分别加水2．0mL、浓硫酸5．0
mI。，混匀，沸水浴30min，然后冰水浴15min，测其
488nm处吸光度值，结果见表1。因此本实验选择
5％苯酚。
表1 苯酚质量浓度对选择结果的影响
Table1 Effectsofphenolconcentrationonselecting
葡萄糖／(mg·ml。_1)
4％苯酚 5％苯酚
0．316
0．645
0．950
1．282
1．664
2．4．3显色加热时间的选择：精确量取0．02、
0．04、0．06、0．08、0．10mg／mL葡萄糖对照品溶液
各2．0mI。置干燥刻度试管中，分别加5％苯酚溶液
1．0mL，再分别加水2．0mL、浓硫酸5．0mL，混
匀，分别在15、30rain沸水浴，然后冰水浴15rain，
测其488nm处吸光度，结果见表2。因此本实验选
择30rain的加热显色时间。
表2显色加热时间对选择结果的影响
Table2 Effectsofcalefactiontimeo selecting
A
葡萄糖八“g’“1J“’——五鬲F1—5—ra—in————j爵F3—0—ra_in加热 加热
2．4．4硫酸用量的选择：精密量取0．1、0．2mg／mI。
多糖样品溶液、水各2．0ml。(各平行3份)置刻度试
管中，分别加入5％苯酚溶液1．0mI．，再分别加入
浓硫酸5．0、7．0、9．0mI。，混匀，沸水浴30rain，冰水
浴15rain，测其488nm处吸光度。结果0．1mg／mI．
多糖样品的吸光度分别为0．553、0．591、0．433。0．2
mg／mI。多糖样品吸光度分别为1．314、1．203、
0．084。按多糖换算因素换算其相当于葡萄糖质量浓
度，分别为0．03278、0．05746、0．06653mg／mI。，
0．07424、0．11642、0．1401 mg／mI。。多糖质量浓
度随硫酸量的增加而增加，说明硫酸用量越多，多糖
水解越完全。因此选择最佳显色条件为：5％苯酚
1mI。，浓硫酸9ml。，沸水浴30rain，冰水浴15rain。
2．5标准曲线的绘制：精确量取0．02、0．04、0．06、
0．08、0．10mg／mI。葡萄糖对照品溶液各2．0ml。置
干燥刻度试管中，分别加入5％苯酚溶液1．0mI。，
摇匀，然后加入浓H：SO。9．0mI。摇匀，另以1．0mI。
水同上操作，作为空白液，于沸水浴中恒温30rain，
取出，冰水冷却15rain后，在488am波长处测其吸
光度值，绘制标准曲线，计算得回归方程A=6．13
C+0．0252(，．一0．9998)。
2．6多糖换算因素的测定：精密称取真空干燥的百
合多糖10．0mg，用蒸馏水溶解后定容到100mL量
瓶中，混匀，作为多糖储备液。精确量取多糖储备液
2．0mI。，按测定标准曲线同样的方法测其吸光度
值。按下式计算换算因素厂，测得厂=0．6653。
f=W／CD
式中：Ⅳ为粗多糖质量(mg)，c为多糖液中葡萄糖的质量浓
度(mg／mL)，D为多糖的稀释因素
2．7精密度试验：精密取0．02mg／mL葡萄糖对照
品溶液置于燥试管中，在488nm处测定吸光度，结
万方数据
中草蔼 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月·1677·
果吸光度的RSD为0．3406％(托=5)。
2．8 重现性试验：精密称取同一多糖样品10mg
各5份，配制供试品溶液在488rim处测定其吸光
度，结果多糖的平均质量分数为1．68％，RSD为
0．54％(以一5)。
2．9稳定性试验：精密量取0．01mg／mI。多糖样品
2．0mI。，显色后0、10、20、30、60、90、120、180min，
在488nm波长处测定吸光度，结果吸光度的RSD
为0．195％。试验结果表明，测定的样品溶液在3h
内稳定。
2．10回收率试验：精密称取多糖样品5份，每份
5．0mg(含多糖约3．8mg)，分别精密加入葡萄糖
对照品溶液(o．10mg／mI。)36ml，，加水定容至100
ml。，精密量取2mI。，置于10mI，具塞试管中，另取
2．0mI，蒸馏水置于10mI。具塞试管中作为空白，
在488nm处测定其吸光度，结果葡萄糖的平均回
收率为98．47％，RSD为2．52％(硝一5)。
2．11样品测定：精密吸取百合生品、炮制品样品溶
液(0．1mg／mI。)各2．0mI。，测定吸光度，计算样品
中多糖的质量分数，结果见表3。
表3样品中多糖测定结果(腮一3)
Table3 DeterminationofpoIysaccharideinsamples(开：3)
3讨论
对多糖的测定多采用苯酚一浓硫酸法嘲。该法的
原理是多糖在强酸作用下水解生成单糖，并迅速脱
水生成糠醛，与酚性物质缩合成有色化合物，这样用
分光光度法在适当波长处测定，再通过计算，可以得
到多糖的量。由于苯酚易氧化，产生醌类杂质，随放
置时间增加溶液颜色不断加深，吸光值不稳定，故而
限制了其应用。本实验在操作时对比了苯酚纯化前
后对吸光度的影响，发现使用未纯化苯酚时，测得的
吸光度不稳定，尤其在高浓度时吸光值跳跃较大。而
将苯酚纯化后，吸光度稳定，重现性较好。实验结果
证明在使用苯酚一浓硫酸比色法时，苯酚纯化与否对
吸光值测定起重要作用，且苯酚溶液宜现配现用。试
验结果可以看出本法简便、快速、易行，可广泛应用
于多糖的测定。
本实验比较了百合生品及蜜制品中多糖，在样品
前处理过程中首先用80％乙醇提取除去所含单糖、
低聚糖及苷类等干扰性成分后，再用水提醇沉法制得
百合粗制多糖。本实验在百合多糖的测定中，采用了
改良后的苯酚一硫酸比色法，且多糖的干燥采用了真
空干燥，避免了加热干燥而出现多糖变黏稠且不易溶
解的情况。实验表明，本实验方法提取较完全。实验结
果显示百合蜜制后多糖的量增加，其中的机制尚需进
一步研究。蜜炙法中多糖的量高于蜜炒法，证明《中国
药典》规定百合炮制采用蜜炙法的合理性。
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万方数据
百合不同炮制品中多糖的测定
作者： 张慧芳， 蔡宝昌， 张志杰， 李伟东， 李林， 杨晨
作者单位： 南京中医药大学,江苏,南京,210029
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(11)
被引用次数： 5次

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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200611031.aspx