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HPLC法测定盘龙参中的盘龙参黄酮Ⅰ



全 文 :中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月·921·
根,很少深入到土壤B层,整个根茎均在腐殖质层
和枯枝落叶层中,形成了品质最好的蚕羌,粗壮而且
环纹密集。另外,羌活生长有较厚的苔藓层的针叶林
下也多形成蚕羌,因为苔藓层的碳氮比也较低,而且
矿化较快,有利于羌活的吸收利用。
在没有苔藓层的纯针叶林(冷杉和云杉)中,尤
其是针叶林林窗下,由于针叶树种的凋落物碳氮比
较高,对羌活的正常生长可能形成养分胁迫,羌活根
茎在枯枝落叶层与土壤表层之间的深度上多横向串
生,有时可以扩展到1m以上,这样可以大大扩展
吸收水分和养分的范围,同时提高整个株系抗环境
波动和胁迫的能力。横生根茎的很多节上会萌发新
枝长成新的植株并萌发直根和侧根,形成一个很大
的无性系。这种条件下主要的产品是竹节羌和节上
植株形成的头羌,尽管有时这些植株也可能形成蚕
羌,但是多数比较短小。
宽叶羌活主要药材商品是头羌和条羌。一般而
言,宽叶羌活生长的环境条件特点是水分条件有保
障,热量条件较好,光照较为充足,有机质含量较低,
全氮和碱解氮含量较高。头羌是宽叶羌活的根茎部
分,条羌是宽叶羌活的主根和侧根。如果宽叶羌活分
布在有机质较好的生境中,如阔叶林下和混交林下
有凋落物层时,其产品主要是蚕羌,这是一些产地将
羌活和宽叶羌活通称为蚕羌的主要原因。这也与宽
叶羌活对生境环境条件的适应相关。有机质较高时,
尤其是阔叶林枯枝落叶形成的有机质较高时,土壤
中养分和水分条件大大改善,宽叶羌活的根系并不
发达,在地被层中的根茎形成了蚕羌而不是头羌,而
条羌的比例很小。
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HPLC法测定盘龙参中的盘龙参黄酮I
董关伶,谢媛媛,陈剑,陈发奎
(沈阳药科大学中药分析教研室,辽宁沈阳 110016)
盘龙参为兰科植物绶草Spiranthesaustralis
(R.Brown)Lindl.的根或全草。最早见于《滇南本
草》,具有滋阴益气、凉血解毒、润肺止咳的功效。目
前已经在盘龙参中分离得到了dihydrophenan—
thTened rivatives、甾醇类成分、阿魏酸酯成分、烷
类成分及其他成分。本研究通过硅胶柱色谱,首次分
离得到一含异戊烯基黄酮类新化合物(图1)[1],且
含量较大,故以此化合物作为指标性成分并进行含
量测定,对盘龙参进行质量控制。
1仪器与试药
收稿日期:2004—07—14
图1盘龙参黄酮I的化学结构
Fig.1Chemicalstructureofspiranthetin—1
日本岛津高效液相色谱仪,SPD—M10AVP二
极管阵列检测器,LC一10ATVP泵;Diamonsil—C18
柱(250×4.6mm,5肛m,迪马公司)。甲醇为色谱
纯,水为重蒸水;盘龙参黄酮I为本校中成药分析教
鞯母HrC—O
万方数据
·922· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月
研室提取分离,经UV、1H—NMR及”C—NMR鉴定
结构,HPLC归一法确定其质量分数为99.5%。盘
龙参全草经本校郭允珍教授鉴定来源于兰科植物绶
草S.australis(R.Brown)Lindl.的全草。
2方法与结果
2.1 色谱条件的选择:固定相:DikmaDiamonsilTM
(钻石)C18(250nm×4.6mm,5um);流动相:甲
醇一水(90:10);检测波长:347nm;柱温:室温;体
积流量:1.0mL/min;理论塔板数按盘龙参黄酮I
计算不低于3000。在此条件下,盘龙参黄酮I与其
他组分均能达到良好分离(分离度均不低于2.o)。
根据盘龙参黄酮I的UV吸收图谱,确定其检测波
长为347nm,进样量均为lo弘L。色谱图见图2。
B
o 10 20 0 5 10 15
t rain
a一盘龙参黄酮I
a—spiranthetinI
图2对照品(A)与样品(B)HPLC色谱图
Fig.2HPLCchromatogramsfreference
substances(A)andsample(B)
2.2供试品溶液的制备:分别取盘龙参全草、根及
地上部分粗末3.5g(均过40目筛),精密称定,加
甲醇100mL,以索氏提取器提取2h,提取液浓缩
至于,用甲醇定容至10mL,分别作为盘龙参全草、
根、地上部分供试品溶液。
2.3对照品溶液的制备:精密称取盘龙参黄酮I对
照品14.1mg,置于100mL量瓶中,用甲醇溶解,
定容,摇匀,再取一定量置10mL量瓶中,定容,配
成0.1763mg/10mL的溶液,即得。
2.4线性关系考察:精密吸取对照品溶液,分别配
制成1.41、0.705、0.3525、0.1763、0.08815、
O.044075、0.0224mg/10mL一系列盘龙参黄酮
I的对照品溶液,分别进样10肛L。以质量浓度为横
坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程
y一32654007.9X一1199.5,7—0.9999,线性范
围为0.02204~1.41pg。
2.5 精密度试验:精密吸取对照品溶液10pL,重
复连续进样5次,按盘龙参黄酮I峰面积进行计
算,其RSD为1.3%。
2.6稳定性试验:精密吸取供试品10肛L,分别于
0、2、4、8、12h时进样,按盘龙参黄酮I峰面积进行
计算,结果其RSD为0.5%,表明样品测定在12h
内稳定。
2.7重现性试验:取盘龙参样品5份,制备供试品
溶液,精密吸取供试品溶液10pL,按样品测定项下
测定,计算,结果盘龙参黄酮I峰面积RSD为
0.6%(以一6)。
2.8加样回收率试验:精密吸取盘龙参黄酮I对照
品0.08815mg,加入1.75g精密称定的盘龙参全
草粗粉中,制备样品溶液,分别进样10肛L,计算,结
果平均回收率为100.6%,RSD为0.05%(卵一3)。
2.9样品测定:分别吸取盘龙参全草、根、地上部分
供试品溶液,进样10肛L,按上述HPLC色谱条件测
定峰面积值,按标准曲线法计算样品中盘龙参黄酮
I质量分数,结果见表1。
表1 盘龙参不同部位的测定(弹一3)
Table1 Determinationofsp ranthetin—Iind fferent
partsofS.australis(片一3)
3讨论
3.1流动相考察,对不同流动相甲醇一水(90:10;
80:20;95:5)进行试验,结果表明以甲醇一水
(90:10)为流动相达到最大分离且保留时间适宜,
故选其。
3.2 提取条件的选择,考察了氯仿、甲醇、95%乙
醇、85%乙醇、70%乙醇5种提取溶媒,以甲醇为
溶媒时,盘龙参黄酮I的提取率最大,故以甲醇为提
取溶媒是可行的。考察了加热回流、超声波和索氏提
取器3种提取方法,以2h索氏提取器提取完全,且
处理简单,不需要滤过,减少了操作误差。
3.3 由于本化合物具热敏性,浓缩时温度不能过
高,否则会造成热破坏,影响分析,故应以低于
80℃为宜。本法简单实用,为盘龙参质量控制提供
了有效手段。
Reference:
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万方数据
HPLC法测定盘龙参中的盘龙参黄酮Ⅰ
作者: 董美伶, 谢媛媛, 陈剑, 陈发奎
作者单位: 沈阳药科大学,中药分析教研室,辽宁,沈阳,110016
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2005,36(6)
被引用次数: 5次

参考文献(1条)
1.Mei L D;Fa K C;Li J W A new flavonoid from the whole plant of Spiranthes australis (R. Brown)
Lindl[外文期刊] 2005(01)

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引证文献(5条)
1.刘紫英 濒危药用植物盘龙参根际真菌与内生真菌的多样性研究[期刊论文]-宜春学院学报 2010(12)
2.刘紫英 濒危药用植物绶草内生真菌的分离与鉴定[期刊论文]-江苏农业科学 2010(6)
3.周秀玲.刘紫英 改良CTAB法提取濒危药用植物绶草基因组DNA[期刊论文]-江苏农业科学 2009(3)
4.周秀玲.刘紫英 濒危药用植物盘龙参根的显微结构及其内生真菌分布研究[期刊论文]-广西植物 2011(2)
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