全 文 ：中草蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月
道_1数据基本一致，”c—NMR数据见表1，故鉴定为
槲皮素一3一。一pD一葡萄糖。
4结果与讨论
通过研究发现，马桑叶中黄酮醇及其苷类的量
比较大，种类比较多，主要集中在水相中，其基本骨
架为山柰酚和槲皮素。
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黄花夹竹桃内生真菌产细胞松弛素的研究
彭小伟“2，杨丽源1，李绍兰1，周斌1，李治滢1，陈有为¨
(1．云南大学云南省微生物研究所，云南昆明650091‘2．中国科学院过程工程研究所
生化工程国家重点实验室。北京100080)
植物内生真菌是指生活在植物体内或生活史的
一定阶段处于植物体内的真菌，其涵盖面相当广，包
括菌根真菌和植物病原菌o∞。也有人认为内生真菌
是指存在于健康植物的茎叶中，不形成明显病症的
真菌“’2]。在内生菌一植物宿主一食草动物生态系统
中，植物内生菌扮演重要生态学作用，发挥这些作用
的物质基础是内生菌产生的丰富多样的次生代谢产
物，它们具有多种生物活性，在农业和(或)医药业中
具有重要的应用潜力[3]。黄花夹竹桃Thevetiaperu—
viana(Pers．)K．Schum．是夹竹桃科植物，剧毒，
它是一种药用植物，全株各部位都含有药用成分黄
夹苷，果仁中质量分数最高，有强心、利尿、祛痰、发
汗、催吐等作用。YM38338菌株分离自黄花夹竹桃
植物茎韧皮部，在筛选过程中，其发酵提取物经薄层
色谱分离，发现它能产生一种次生代谢产物，对该菌
株进行扩大发酵，用乙醇萃取发酵物，经硅胶柱色谱
分离纯化，首次分离到两个化合物。通过波谱方法鉴
定化合物结构：细胞松弛素H(I)和细胞松弛素O
(Ⅱ)。
1材料
1．1菌种：菌株YM38338分离自黄花夹竹桃植物
茎韧皮部，菌种保藏在云南省微生物研究所真菌资
源与菌种保藏室。
1．2培养基：PDA液体培养基：马铃薯200g，葡萄
糖20g，蒸馏水】000mL，pH值自然。
1．3试剂与仪器
醋酸乙酯、氯仿、甲醇、丙酮、石油醚，均为分析
纯；硅胶GF：。。薄层色谱板(青岛海洋硅胶厂)；柱色
谱用200～300目硅胶(SilicaG)(青岛海洋硅胶
厂)；核磁共振谱用BurkerAM500核磁共振仪测
定；质谱用AutospecVG一3000质谱仪测定。
2方法
2．1发酵和提取：配10L液体PDA培养基，分装
于100个三角瓶(规格500mI。)，取活化72～96h
的YM38338菌种，接种于装有液体PDA培养基的
三角瓶中，置于25～28℃，300r／min摇床发酵5d。
发酵结束后，用纱布滤过．使菌体与发酵液分
开，菌体用氯仿浸泡，浸泡24h后用滤纸滤过，滤液
减压浓缩，再用新鲜氯仿浸泡菌体，重复3次，发酵
液用醋酸乙酯萃取3次，减压浓缩萃取液，分别得浓
箨薯品霁：雾j：嚣；蚤5)．男．江西人，博士生，主要从事微生物资源与应用研究。Em州：。i。。wpp@h。。m。il⋯
*通讯作者陈有为Tel：(0871)5033539Email：ywchen@．ynu．edu．Cn
万方数据
·344· 中革鸯ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月
缩物3．8g和2．1g。
2．2分离纯化：合并菌体和发酵液的提取物共5．9
g，上硅胶柱，用氯仿一甲醇(95：5)和氯仿甲醇
(95：10)梯度洗脱，40～60mL收集组分，对各组分
进行薄层色谱分离，合并主产物相同的组分，组分
lo～13合并后依次以石油醚一丙酮(6：4)和氯仿一丙
酮(7：3)为洗脱剂进行硅胶柱色谱分离后，得化合
物I(1480rag)；组分14～16依次以石油醚一丙酮
(6：4)，氯仿一甲醇(95：5)，醋酸乙酯甲醇(100：
1)为洗脱剂进行硅胶柱色谱分离后，得化合物Ⅱ(15
mg)。
3结构鉴定
化台物1：白色晶体(氯仿)，FAB—MS：494
(M+1)；”CNMR谱和DEPT谱数据见表l；
1HNMR谱部分数据：7．30～7．10(5H，m，H一27，3‘，
4’，57，67)，5．82(1H，dd，J一14．3，3．2Hz，H一20)，
5．48(1H，dd，J一14．3，2．8Hz，H一19)，5．69(1H，
dd，J=15．2，8．8Hz，H一13)，5．37(1H，dd，J一
15．2。9．7Hz，H14)，5．36(IH，s，H一12)，5．07(1H，
s，H一12)，3．79(1H，d，．，一10．5Hz，H一7)，3．22(1H，
br．s，H3)，2．90(1H，t，H一8)，2．81(1H，dd，J一
13．2．4．7Hz，H—10a)，2．64(1H，dd，J—l3．2，9．4
Hz，H—10b)，1．3l(3H．s，H一23)，1．0l(3H，d，J一
4．9Hz，H一22)，0．94(3H，d，J一6．2Hz，H一11)。结
合”C—NMR谱、DEPT谱和1H—NMR谱推导其分子
式为C3nH3☆O；N。
该化合物各种渡潜数据与文献报道n’53化合物
细胞松弛素H的相一致。基于上述分析，鉴定该化
台物为细胞松弛素H，其结构式见图l。
衰1化台物1和Ⅱ的碳谱数据(500MHz，CDCI，)
Table1”C—NMRSpectraldataforcompounds
I andⅡ(500MHz，CDCl3)
碳位 1 2 碳位 l 2
l 174．2s i75．9s 1 7 536t 53．7t
3 53．7d 53．8d 18 742 s 74．5s
4 50．3d 50．1d 】9 l380d 137．5d
5 32．7d 32．9d Z0 1258d lZ7．0d
6 147．8s 148．4d 2l 774 d 773d
7 69．7d 69．9d 22 264 q 36．5【I
8 470d 45．8d 23 31-0q 310q
9 51．7s 52．9s
10 455t 45．5t 25 20．8q
11 】4．0q 14．0q 1’ 137．38 137．0s
12 】14．1t 113．8t 2‘ 129．0d 129．1d
13 1270d 1277d 掣 128．8d l291d
14 1386d 137．8d 4’ 138．0d 137．8d
15 427t 427t 5’ 128．8d 1 291d
16 28．3d 284 d B’ 1 29．0d 129．1d
化合物Ⅱ：白色晶体(氯仿)，化合物Ⅱ的
”CNMR谱和DEPT谱数据(表1)与化合物I的相
比较，少2个c，分别为d174．2(s)和d20．8(q)其
余数据几乎相同，可推断化合物Ⅱ比化合物I少一
个乙酰基，比较它们1H—NMR数据也可得到印证，化
合物Ⅱ1H—NMR谱中不存在d2，2(s)峰。其波谱数
据与文献报道n3化合物细胞松弛素。相一致，由此
鉴定化合物Ⅱ为细胞松弛素0，其结构见图1。
图1化合物i和Ⅱ的结构
Fig．1StructuresofcompoundsI andⅡ
4讨论
细胞松弛素类化合物是一类广泛分布于真菌的
真菌毒素 已从拟茎点霉属(Phomopsis(Sate．)
Bub．]、毛壳菌属(ChaetomiumKunzeex
Schmidt．)、炭团菌属(HypoxylonBull．exFr．)、鹿
角菌属(XylariaHillexGrev．)、轮层炭壳属(Dal—
diniaCes．etdeNot．)等真菌中分离得到，它们具
有一些重要的生物学活性，包括抑制哺乳动物细胞
在组织培养时的分裂，抑制HIV一1蛋白酶的活性，
抗菌和抗肿瘤活性等”]。细胞松弛素H和细胞松弛
索。最初在禾本科植物雀稗属Paspalumscrobicu—
latum，P．commersmffi种子中寄生的真菌发酵物
中分离得到。当时发现某些小米稷的种子能毒害人
和牲畜，当地人有时用它来毒老虎，人误食后中毒的
主要症状是：失去神智、精神狂乱、肌肉颤抖、呕吐和
吞咽困难，后来发现它的毒性与它所感染的真菌有
关，并且从被其感染的真菌雀稗拟茎点霉属(Phc-
mopsisSacc．)的发酵物中分离到细胞松弛素H和
细胞松驰素O，用狗做细胞松弛素H的毒性试验
时，其症状与小米稷种子中毒的症状一样o]，证明了
小米稷种子的毒性是由寄生于其中的真菌雀稗拟茎
点霉属(PhomopsisSacc．)产生的细胞松弛素H所
致，
细胞松弛素H和细胞松弛素。以前是从拟茎
点霉属(PhotoopsisSacc．)发酵物中分离到的，而菌
株YM38338经形态学方法鉴定为丝核菌属(Rhi—
万方数据
中革菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第3期2006年3月
zoctoniaDC．)，即本研究首次从丝核菌属(Rhizocto-
nia)菌株发酵物中分到细胞松弛素H和细胞松弛
素O；而且菌株YM38338产细胞松弛素H的量很
大(148mg／L)，因此它具有潜在的生产价值。
植物黄花夹竹桃的毒性，目前认为是由黄花夹
竹桃苷所致，然而，经对黄花夹竹桃内生真菌种群多
样性研究发现，丝核菌属(RhizoctoniaDC．)是植物
黄花夹竹桃细胞内生真菌的优势种群”]，丝核菌属
(RizoctoniaDC．)菌株YM38338产细胞松弛素H
的量如此大，因此，植物黄花夹竹桃的毒性可能还与
其内生真菌代谢产物细胞松弛素H有关。
致谢：中国科学院昆明植物研究所赵友兴博士在
化合物结构解析上的帮助。
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黑龙骨化学成分的研究
张援虎，杨亚婷，陈东林，王锋鹏’
(四川大学华西药学院，四川成都610041)
黑龙骨PeriplocaforrestiiSchlecht．又名滇杠
柳、黑骨头，是萝蘼科杠柳属植物。该植物全株药用，
可舒筋活络、祛风除湿；治风湿性关节炎、跌打损伤、
胃痛、消化不良、闭经、痢疾等“]。目前关于其化学成
分有强心苷、c。。甾体苷、胡萝h苷和熊果酸的报
道口“]。药理研究表明[4]，黑龙骨新鲜茎皮中的总皂
苷有强心作用，其强心作用特点类似毒毛旋花子苷
G。近年研究表明，强心苷和c。。甾体苷具有多种生
理活性，如抗癫痫，抗肿瘤，抗生育等，且黑龙骨民间
用于镇痛，效果良好，因此笔者对黑龙骨的化学成分
进行了系统研究，并从中分离鉴定了11个已知化合
物，分别为：periplocymarin(I)、杠柳苷元(I)、杠
柳苷(Ⅲ)、(+)一1羟基松脂酚(Ⅳ)、(±)一丁香树脂
醇(V)、熊果酸(Ⅵ)、23一羟基齐墩果酸(Ⅶ)、p谷甾
醇(Ⅷ)、胡萝h苷(IX)、丙二酸(x)和2，4一二羟基
苯甲酸甲酯(Ⅺ)。其中，化合物I、Ⅳ、V、Ⅶ、Ⅷ、x、
X／为首次从黑龙骨中分离得到，且化台物Iv、V是首
次从杠柳属植物中分离鉴定。另外，杠柳苷、periplo—
cymarin具有强心活性，这与滇杠柳所具有的强心
活性相吻合。
l仪器和材料
熔点用X4型显微熔点仅测定；红外光谱用
NicoletFT—IR200SXV仪测定，KBr压片；ESI—MS
用FinniganLCQ”““仪测定，EIMS用VGAuto
Spec3000仪测定，电离能量70ev；核磁共振谱用
BrukerAC—E200和VarianUnityINOVA400／
54仪测定，TMS为内标；中压柱色谱仪为BuchiB
681型；高效液相为Water7s510泵，检测器为Wa—
ter’S2410折光检测器，分析柱为PR一18ODS柱
f200mm×4．6mm，10pm)，半制备柱为PR18柱
f200mm×10mm，10pm)；薄层及柱色谱用硅胶均
为青岛海洋化工厂产品，反相Rp18薄层色谱板及
柱色谱用硅胶(45pm)为德国Merck公司生产。
黑龙骨购于云南大理，经中国科学院植物研究
所分类室李振宇研究员鉴定，为黑龙骨P．forrestii
Schlecht．的全株。
2提取与分离
20kg黑龙骨粉末用醋酸乙酯加热回流3次，
每次4h，减压回收溶剂后得浸膏467g。467g浸膏
经硅胶柱色谱分离，氯仿一甲醇梯度洗脱，分为A
器莩品羿：絮饕盖乞饶7)，男，四川大学华西药学院博士后，主要从事天然产物分离与鉴定工作。 E—m酬：zh。。gy⋯hu@263．。。。
*通讯作者王锋鹏Tel／Fax：(028)85501368Ermail：wfp@wcums．edu．en
万方数据
黄花夹竹桃内生真菌产细胞松弛素的研究
作者： 彭小伟， 杨丽源， 李绍兰， 周斌， 李治滢， 陈有为
作者单位： 彭小伟(云南大学云南省微生物研究所,云南,昆明,650091;中国科学院过程工程研究所生化
工程国家重点实验室,北京,100080)， 杨丽源,李绍兰,周斌,李治滢,陈有为(云南大学云南
省微生物研究所,云南,昆明,650091)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(3)
被引用次数： 5次

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