全 文 ：·862· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月
A
4 8
12。
16 20 24
B
4 12 16
t／mln
*一麝香酮
图1麝香酮对照品(A)和凉开胶囊(B)的GC圈
Fig．1GCchromatogramsfmusconereference
substance(A)andLiangkaiC psule(B)
提取至无色，提取液挥干，残渣以无水乙醇适量溶
解，定量转移至10mL量瓶中，加无水乙醇稀释至
刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2．3对照品溶液的制备：精密称取麝香酮对照品适
量，加无水乙醇制成2．8mg／mL的溶液。以无水乙
醇稀释100倍，摇匀，作为对照品溶液。
2．4线性关系考察：精密吸取麝香酮对照品溶液
(1．41mg／mL)适量，分别稀释100、50、25、12．5、10
倍，吸取1ttL，分别注入气相色谱仪，测定。以进样
量为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲
线，其回归方程为Y=63601+9848307x，r一
0．9967，结果表明麝香酮在0．014～0．141弘g与
峰面积呈良好的线性关系。
2．5精密度试验：精密吸取同一供试品溶液，重复
进样5次，每次1肛L，测定麝香酮峰面积，结果其
RSD为0．93％。
2．6稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，每隔
2h测定1次，共测定10h，RSD为1．28％，表明供
试品溶液在10h内稳定。
2．7重现性试验：精密称取同一批样品5份，制备
供试品溶液，进样1弘L，测定峰面积，计算质量分
数。结果麝香酮的质量分数为0．565mg／g，RSD为
2．24％。
2．8加样回收率试验：取本品2粒内容物(含麝香
酮0．5625mg／g)约0．8g5份，精密称定，分别精
密加入麝香酮对照品溶液(0．311mg／mL)2mL，
按供试品溶液制备方法操作，制备供试品溶液，按上
述色谱条件进行测定。结果平均回收率为96．08％，
RSD为0．38％。
2．9样品测定：分别精密吸取对照品溶液及供试品
溶液各1弘L，进样，测定，采用外标法计算，结果见
表1。
表1凉开胶囊中麝香酮的测定结果(厅一2)
Table1 MusconeinLiangkaiCapsule(一一2)
批号 麝香酮／(mg·粒一1)
0．225
O．155
0．165
3讨论
以麝香酮质谱质核比m／z238、223、209为检测
指标，以麝香酮特征离子峰m／z238的丰度为定量
指标测定，专属性强，结果准确。而以氢火焰为检测
器测定样品，检出峰较多，相同色谱条件，麝香酮峰
有干扰。
超声波提取龙胆多糖的研究
江蔚新，朱正兰
(哈尔滨商业大学药学院，黑龙江哈尔滨 150076)
龙胆为龙胆科植物条叶龙胆Gentiana
manshuricaKitag．、龙胆G．$cabraBunge、三花龙
胆G．trifloraPall．或坚龙胆G．rigescensFranch．
收稿日期：2004．-10—15
的干燥根及根茎，具有清热燥湿、泻肝胆火的功效，
主治湿热黄疸、阴肿阴痒、带下、强中、湿疹搔痒、目
赤等症‘¨。龙胆除含有裂环环烯醚萜类和环烯萜类
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月·863·
化合物外，还含有生物碱、挥发油、多糖等成分瞳]。目
前多糖提取主要采用传统水浸提取法，该方法存在
费时长、耗能多的缺点。有文献报道将超声波应用于
对中药苷类成分的提取中可以提高苷类的提出率并
缩短提取时间嘲。初步药理实验表明，龙胆多糖有一
定的免疫增强作用。本研究考察超声波在龙胆多糖
的提取中应用的可行性，对实验条件进行优化，并和
传统水提法进行比较。
1仪器与试药
UV--2102C型紫外可见分光光度计，尤尼柯
(上海)仪器有限公司；AS一3120超声波清洗器，天
津奥特塞恩斯仪器有限公司。试剂均为AR级。龙胆
药材购自哈尔滨三棵树药材市场，经我院中药鉴定
室沈志滨副教授鉴定为条叶龙胆。
2方法与结果
2．1 超声波提取龙胆多糖：称取一定质量龙胆粉
末，加入蒸馏水适量，分别用一定频率的超声波超声
处理，提取液滤过、浓缩、去蛋白、乙醇沉淀，得粗品
多糖，真空干燥，即得。
2．2龙胆多糖的测定
2．2．1葡萄糖对照品溶液的制备：精密称取105℃
干燥至恒重的葡萄糖100mg，置于100mL量瓶中，
加入蒸馏水至刻度，摇匀，备用。
2．2．2龙胆多糖供试品液的制备：精密称取干燥至
恒重的龙胆多糖23．80mg，置于100mL量瓶中，加
水溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
2．2．3苯酚溶液的制备：取苯酚100g，加铝片0．1
g与碳酸氢钠0．05g，蒸馏收集18℃馏分，称取此
馏分10g，加水150g，置于棕色瓶中备用。
2．2．4标准曲线的绘制：精密吸取葡萄糖对照品溶
液0．5、1．0、1．5、2．0、2．5mL置于50mL量瓶中，
加入蒸馏水至刻度，摇匀。精密吸取各溶液2mL于
10mL具塞刻度试管中，分别加入5％苯酚溶液1
mL，摇匀。迅速加入5mL浓硫酸，振摇5min，定
容，置沸水浴中加热15min，然后置冷水浴中冷却
30min，定容，随行空白，在490rim处测定吸光
度[4]。数据经回归处理后，得回归方程：A一12．886
C+0．0015，r一0．9997。
2．2．5换算因子的测定：精密量取多糖供试品溶液
0．5mL，按照“标准曲线的绘制”项下的方法测定吸
光度值，计算葡萄糖的质量浓度，得换算因子厂一
5．4185。
2．2．6多糖的测定：精密称取各样品溶液1mL，分
别置于10mL具塞刻度试管中，按照“标准曲线的
绘制”项下方法测定吸光度值，按下式计算样品中多
糖的质量分数。多糖一掣×100％
式中c为样品溶液的葡萄糖的质量，D为样品溶液的稀释
倍数，，为换算因子，Ⅳ为样品的质量
2．3超声波法提取多糖的单因素考察
2．3．1超声时间对多糖提取的影响：称取相同质量
龙胆粉末5份，加入蒸馏水适量后分别用一定频率
的超声波超声处理15、30、45、60、75、90、120min，
后处理同2．1。结果见图1。可知，超声提取75min
时提出量最高，多糖提出率可达14．4％。而后随着
超声时间的延长，龙胆多糖的提取率无多大变化，并
有缓慢下降之趋势。
15
量10
鳝
蚺5
O
O 50 lOO 150
图1提取时间对多糖得率的影响
Fig．1Effectofextractingtimeonpolyssacharideyield
2．3．2pH值对多糖提取的影响：称取相同质量龙
胆粉5份，分别加入蒸馏水适量，然后分别调节pH
为5．0、6．0、7．0、8．0、9．0，超声处理75min，后处理
同2．1。结果见图2。可知，超声提取pH值为7时提
取率最高，粗多糖提出率可达14．2％。
辞
器
蚺
图2 pH值对多糖得翠的影响
Fig．2EffectofpHvalueonpoIyssacharideyield
2．3．3加入蒸馏水量对多糖提取的影响：称取相同
质量龙胆粉5份，分别按药材量与蒸馏水质量体积
比为1：20、1：40、1：60、1：80、1：100加入蒸馏
水，超声处理75min，后处理同2．1。结果见图3。可
知，超声提取加入蒸馏水量为龙胆粉：蒸馏水(1：
60)时提取率最高，粗多糖提出率可达14．1％。
2．4提取条件的优化：在单因素考察的基础上，称
取相同质量的龙胆粉9份，分置于9个烧杯中，选用
L。(34)正交表进行优化，结果见表1。正交实验结果
表明在龙胆粉末中加入60体积的水，在pH7．0的
条件下用超声波提取75min得到的龙胆多糖的量
最大。根据极差分析结果，影响龙胆多糖提出率的3
万方数据
·864· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月
16
誊14
罴12
10
10 30 50 70 90 110
矿／mL
图3水体积对多糖收率的影响
Fig．3Effectofwatervolumeonpolyssacharideyield
表1 L，(34)正交优选设计及结果
Table1 L，(34)orthogonaldesigna dresults
试验号∞m≯ln时B-H值c嚣繁。曼，篙阿／ 水萤／惜 L至日， ／w0
1(60)
1
1
2(75)
2
3(90)
3
0．477O
0．4433
O．4306
0．1590
0．1478
O．1435
0．0155
1(6．O)
2(7．O)
3(8．O)
2
3
1
2
3
0．4504
0．4647
0．4358
0．1501
O．1549
0．1453
0．0096
1(40)
2(60)
3(80)
2
3
1
3
1
0．4273
0．4682
0．4554
0．1424
O．1561
0．1518
0．0137
个因素中(pH、提取时间、加水量)以提取时间影响
最大，其次是加水量，影响最小的是pH。
2．5传统方法提取与精制龙胆多糖：将干燥粉碎后
的龙胆生药样品称取100g，用500mL石油醚回流
脱脂2次，每次1h。回收石油醚，药渣挥干溶剂后用
80％乙醇500mL浸渍过夜，回流提取2次，每次
2h。滤过，将药渣用2500mL蒸馏水90℃温浸提
取60min，再用500mL蒸馏水90℃重复温浸提取
60min，滤过，合并滤液。将此溶液减压浓缩至200
mL用氯仿萃取多次以除去蛋白质，再加1％活性炭
脱色2次，滤过，滤液加入95％乙醇使乙醇的体积
分数达到80％，静置过夜，残渣依次用95％乙醇、无
水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，真空干燥，得精制龙胆
多糖。与超声提取的结果比较，见表2。
3讨论
3．1 超声波法提取龙胆多糖时，超声时间不宜过
表2两种提取方法结果比较(玎一5)
Table2 Comparisonoftwoextractingmethods(一一5)
与水提相比较：。P>O．05一P
时间的延长，提取率反而下降。原因可能是由于超声
波具有较强的剪切作用，长时间的作用会使大分子
的多糖断裂，从而在后处理的过程中的损失增大而
影响多糖的提出率。
3．2龙胆多糖的组成十分复杂，由多种单糖组成。
目前最常用的测定方法是蒽酮一硫酸比色法和苯酚一
硫酸比色法。但在实际工作中，特别是在测定天然产
物中的糖测定时，测得的结果与实际情况不符。原因
是这两种方法都是以葡萄糖作为对照，这对含有多
种单糖的天然多糖来说必将使测量值与实际值不
符。本实验中有将近70％的产物未被检出，这是在
多糖测定方法的研究中经常遇到的问题[5]。如果在
制作标准曲线时能够根据多糖的组成，用多种单糖
适当混合后作为对照，就可以在一定程度上改善这
种情况。
3．3 植物多糖作为免疫增强剂已引起人们的广泛
关注嘲，临床用于肿瘤病人的治疗已取得较好疗效。
龙胆多糖可否作为免疫增强药物应进一步深入
研究。
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7
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2
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万方数据
超声波提取龙胆多糖的研究
作者： 江蔚新， 朱正兰
作者单位： 哈尔滨商业大学药学院,黑龙江,哈尔滨,150076
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(6)
被引用次数： 12次
参考文献(5条)
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12.海力茜·陶尔大洪.孙莲.马合木提·买买提明.何燕 天山岩黄芪根中多糖的提取及含量测定[期刊论文]-时珍国
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