全 文 ：·1808· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第12期2006年12月
HPLC法测定龙胆泻肝丸中龙胆苦苷、黄芩苷和栀子苷
郝 福1，蒋 晔¨，李艳荣1，丁翔字1，胡丽英2
(1．河北医科大学药学院，河北石家庄050017；2．河北大安制药有限公司，河北石家庄050081)
龙胆泻肝丸由龙胆泻肝汤进行剂型改进而来，
主要由龙胆草、黄芩、栀子等药味组成，具有泻肝胆
实火，清下焦湿热的功效。《中国药典92005年版只
对龙胆泻肝丸君药龙胆草的主要成分龙胆苦苷进行
了定量测定，臣药黄芩、栀子主要成分的测定方法已
有文献报道[1“]。复方中药多指标的同时测定不但
可以节约分析成本，减少分析误差，而且更重要的是
它可以直接反映药品的质量。本实验建立了RP—
HPLC法同时测定龙胆泻肝丸中龙胆苦苷、黄芩苷、
栀子苷3种指标成分，该方法专属性好、灵敏度高、
结果准确，可更好地表征该丸内在质量。
1仪器与试药
液相色谱仪系统包括：HitachiL一6200A泵
(日本)，AppliedB osystems785A检测器(美国)，
HW色谱工作站(南京千谱软件有限公司)。
龙胆苦苷对照品(中国药品生物制品检定所，批
号110770—200308)；黄芩苷对照品(中国药品生物
制品检定所，批号110715—200212)；栀子苷对照品
(中国药品生物制品检定所，批号110749—200309)；
龙胆泻肝丸(石家庄市海天药业有限公司)；乙腈为
色谱纯；冰醋酸为分析纯；水为双蒸水。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱HypersilCl8(250mm×4．6
mm，5肚m)；流动相：乙腈(A)一1％冰醋酸水溶液(B)，
梯度洗脱：o～7min，16％A；7～16min，16％～45％
A；16～19min，45％A；体积流量：1．0mL／min；检测
波长：254nm；柱温：室温；进样量：20弘L。
2．2线性关系考察：精密称取栀子苷对照品、龙胆
苦苷对照品和黄芩苷对照品适量，以甲醇为溶剂，配
制混合对照品溶液，其中含栀子苷147肛g／mL、龙胆
苦苷290弘g／mL、黄芩苷268>g／mL。用倍比稀释法
配制成系列质量浓度的溶液。进样20肛L，测定各组
分峰面积。以各组分质量浓度(C)为横坐标，相应峰
面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程。栀
子苷：A一1．22×104C+1．13×103，r一0．9999，线
性范围：4．60～147弘g／mL；龙胆苦苷：A=1．08×
104C+4．45×103，r一0．9999，线性范围：9．05～
290弘g／mL；黄芩苷：A一1．65×104C+1．29×103，
r一0．999，线性范围：8．40～268肛g／mL。
2．3供试品溶液的制备：取本品，研细，取细粉约
0．5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25
mL，密塞，称定质量，超声处理40min，放冷，再称
定质量，用甲醇补足减失质量，摇匀，然后用0．45
肛m微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2．4阴性对照溶液的制备：取粉碎过筛且混合均匀
的各药材粉末适量，按照龙胆泻肝丸的配伍比例，分
别制备缺栀子、龙胆草、黄芩的龙胆泻肝丸阴性对
照，按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
2．5系统适用性试验：分别取混合对照品溶液、供
试品溶液、阴性对照溶液注入色谱仪，色谱图见图
1。在该色谱条件下，栀子苷峰和龙胆苦苷峰分离度
大于1．8，黄芩苷峰与相邻组分峰分离度均大于
2．0。理论板数以龙胆苦苷峰计不低于4600，阴性样
品在与对照品色谱峰相应的位置上无吸收峰，表明
处方中的其他成分对测定结果无影响。
2．6 精密度试验：精密吸取同一供试品溶液20
弘L，按上述色谱条件进样，测定栀子苷、龙胆苦苷和
黄芩苷的峰面积，连续进样6次，其RSD分别为
0．78％、0．56％、0．62％。
2．7重现性试验：取同一批样品0．5g，共6份，精
密称定，分别制备供试品溶液，各进样20pL，测定
栀子苷、龙胆苦苷和黄芩苷的质量分数，其RSD分
别为1．1％、0．80％、0．76％。
2．8稳定性试验：取同一供试品溶液，分别在0、2、
4、6、8、12h进样20肛L，记录色谱峰面积，计算栀子
苷、龙胆苦苷和黄芩苷色谱峰面积的RSD分别为
0．80％、0．75％、0．90％。
2．9加样回收率试验：取已测定栀子苷、龙胆苦苷
和黄芩苷的龙胆泻肝丸(批号20050701)样品6份，
每份0．25g，精密称定，每份分别精密加入501
收稿日期：200602—12
作者简介：郝福(1979一)，男，山西大同人，硕士研究生，研究方向为中药质量研究及控制。
*通讯作者蒋晔Tel：(0311)86266069E—mail：jiangye@hebmu．edu．cn
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第12期2006年12月·1809·
0 5 10 15
t／min
1一栀子苷2一龙胆苦苷3一黄芩苷
1-genpioside2-gentiopicrin3-ba calin
图1 混合对照品(A)、龙胆泻肝丸(B)和阴性对照(c：
a为缺栀子，b为缺龙胆草，c为缺黄芩)的HPLC
图谱
Fig．1HPLCChromatogramsfmixedreference
substances(A)，LongdanXiegaPills(B)，
andnegativesamples(C：a，b，eweren —
gativesamplewithoutFructusGardeniae，
RadixGentianae，andRadixScutellariae)
fLg／mL栀子苷对照品溶液1．0rnL、745bcg／mL龙胆
苦苷对照品溶液2．0rnL和767t—g／mL黄芩苷对照
品溶液1．omL，制备供试品溶液，进样测定，计算加
样回收率。结果见表1。
表1各组份回收率测定结果(靠一6)
Table1 Determinationofrec veryyieldtests
ofeverycomponents(撑一6)
2．10样品测定：取不同批号龙胆泻肝丸，按供试品
溶液的制备方法处理，进行HPLC分析，以外标一
点法计算栀子苷、龙胆苦苷和黄芩苷的质量分数。结
果见表2。
3讨论
3．1 检测波长的选择：HPLC法单独测定龙胆泻肝
丸中龙胆苦苷、黄芩苷、栀子苷，检测波长分别为
270nm、274～279nrll和240nnl[1“]。本实验选择
在254liE同时测定3个组分，结果在选定的色谱条
表2龙胆泻肝丸中有效成分的测定结果(n=3)
Table2 Determinationof ctivecomponents
inLongdanXieganPills(n=3)
件下3组分均有较高的紫外吸收值，其最低检测限
以信噪比3计分别为9、15、13ng，各组分分离度良
好，故选择检测波长254nrn。
3．2流动相的选择：龙胆苦苷和栀子苷的极性相对
黄芩苷较强，本实验考察了三者在乙腈一1％冰醋酸
(15：85)等度洗脱的情况下的保留情况，结果龙胆
苦苷和栀子苷保留时间为6．7、7．5rnin，而黄芩苷
则保留到色谱柱上，故为了保证3组分的同时分离，
采用梯度洗脱程序，结果表明，该洗脱程序可以满足
分析要求。
3．3 多指标成分的分离测定对于复方中药的质量
控制具有重要意义。在同一方剂中，药味的不同配伍
比例对指标成分体内药动学特征及复方药效具有显
著影响口“]。复方中药配伍以后，各指标成分的量及
其比例不仅可以反映制剂工艺水平，而且可以表征
和保证复方中药(及其制剂)的药效，本实验建立了
HPLC法同时测定龙胆泻肝丸的3个指标成分的方
法，并计算了组分的比例，相对于单指标的测定，该
法可以直接表征龙胆泻肝丸的内在质量；为了能够
更好地标示原处方配伍比例，提议应当制备该处方
的标准制剂(或标准汤剂)以作对照，计算指标成分
的量及其比例范围。
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万方数据
HPLC法测定龙胆泻肝丸中龙胆苦苷、黄芩苷和栀子苷
作者： 郝福， 蒋晔， 李艳荣， 丁翔宇， 胡丽英
作者单位： 郝福,蒋晔,李艳荣,丁翔宇(河北医科大学药学院,河北,石家庄,050017)， 胡丽英(河北大安
制药有限公司,河北,石家庄,050081)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(12)
被引用次数： 7次

参考文献(6条)
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引证文献(7条)
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7.王进.崔宇姣.王艳玲 HPLC法测定当归龙荟片中阿魏酸的含量[期刊论文]-实用药物与临床 2009(1)


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