全 文 ：·676· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月
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知母微粉的溶出及活性研究
张陆军1，王 伟1，邢东明1，盖国胜2，苏慧1，何希辉3，杜力军1
(1．清华大学生物科学与技术系，北京100084；2．清华大学材料系，北京100084；
3．中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所，北京100094)
摘要：目的 观察知母微粉体外成分溶出以及体内活性，对微细化工艺在中药中的应用进行评价。方法采用
HPLC法定量芒果苷，比较知母微粉和知母粉中芒果苷溶出速度及不同时间点溶出百分率；采用小鼠悬尾和强迫
游泳试验，测定最大耐受量，观察知母微粉与知母提取物体内活性和安全性。结果 体外溶出时，知母微粉中芒果
苷的溶出速度较知母粉明显加快，在不同时间点芒果苷的溶出百分率亦有所提高；以相同治疗剂量给药时，知母微
粉与知母提取物表现出相当的作用，知母微粉最大给药剂量为20g／kg。结论知母制成微粉后能在一定程度上改
善体外成分的溶出和体内活性。
关键词：知母；微细化工艺；溶出度
中图分类号：R286．02；R286．1文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)05—0676—04
DissolutionandeffectofAnemarrhenaasphodeloidesmicropowderprepared
bysuperfinecrushingtechnique
ZHANGLu—junl，WANGWeil，XINGDong—min91，GAIGuo～shen92，
SUHuil，HEXi—hui3，DULi—junl
(1．DepartmentofBiologicalSciencesandBiotechnology，TsinghuaUniversity，Beijing100084，China；2．Department
ofMaterials，TsinghuaUn versity，Beijing100084，China；3．InstituteofMed cinalPl nt，Chinese
AcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCo lege，Beijing100094，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatetheingredientsdissolutionandbioactivitiesofAnemarrhena
asphodeloidesmicropowderpreparedbysuperfinecrushingtechnique．MethodsThedissolutionofthe
markeringredient--mangiferinofthemic opowderwascomparedwiththatofthenormallyprocessed
powderbyHPLCformangiferin；thea ti—depressionffectofthemicropowderanA．asphodeloides
extractwasinvestigatedintailsuspensiontesta dforced-swimmingtest．Meanwhile，toxicitieswere
evaluatedbythedeterminationofthemaximumtolerateddose(MTD)．ResultsThedissolutionvel city
ofmangiferininthemicropowderwasmo eobviouslyimprovedthanthatinthecommonp wderandthe
dissolutionpercentagesatdifferentintervalshadbeenincreasedslightly．Themicropowdershowedas
muchanti—depressioneffectas hatoftheA．asphodeloidesextractwhenadministeredatthesamedosage，
whiletheybothresultedinrelativelyobvioustoxicityreactions(MTDis20kg／g)．ConclusionSuper
finecrushingtechniquecanhelptoimproveth ingredientsdissolutionratea dbioactivitiesofA．
asphodeloidesmicropowderwithoutbringingaboutadditionaltoxicity．
Keywords：AnemarrhenaasphodeloidesBunge；superfincrushingtechnique；dissolution
收稿日期：2004—08—05
基金项目：清华大学基础研究资金资助项目(JC2001050)
作者简介：张陆军(1977一)，男，安徽肥西人，博士研究生，主要从事药动学、心脑血管药理学研究以及中药新产品的研发。
Tel：(OLO)62796270Fax：(010)62773630E—mail：zhanglujuns@163。tom
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月·677·
近年来，随着微细化工艺在新材料、精细化工、
生物等多方面的广泛应用，有人提出了“微米中药”
的概念[1]，为微细化工艺在中药中的应用揭开序幕。
中药(包括中药材、中药提取物、中药制剂)经超微粉
碎后有利于有效成分的溶出，进而提高其生物利用
度。知母为百合科植物知母Anemarrhena
asphodeloidesBunge的根茎，具有清热泻火、生律润
燥等功效E23。知母还具有抗肿瘤、抗衰老等作用嘲。
本实验通过比较微细化工艺制备的知母药材微粉与
普通制备的知母粉成分的体外溶出以及微粉与提取
物的体内活性，观察知母的微米化对成分的溶出、活
性和安全性的影响。
1仪器与试药
Waters高效液相色谱仪，包括600泵，7725进
样器，2487双波长吸收检测器，Chromstation2000
色谱工作站；ZRS--8C型智能药物溶出仪(天津大
学无线电厂)；透析袋(相对分子质量8000～
12000)。
知母药材购自北京同仁堂，批号：020928；知母
微粉，粒径小于33扯m(过1250目筛)，批号：
020331，由清华大学材料系提供；知母粉，粒径小于
355pm(过50目筛)，本室自制；知母提取物由知母
普通粉提取而成，含生药5g／g，深圳市中医院提
供，批号：20000120；芒果苷对照品，法国GENAY
公司产品，质量分数99％，批号：02092401；盐酸阿
米替林片(每片25mg)，湖南洞庭药业股份有限公
司，批号：020214；甲醇、冰醋酸(分析纯)。
雄性昆明种小鼠，体重(20-_4-_2)g，购自中国预
防科学院微生物学流行病学研究所，合格证号：第
038号。
2方法与结果
2．1 知母微粉颗粒直径的分布：采用显微标尺随机
测定300个粉粒的粒径(粒径为最长径和最短径的
均值)，统计粒径在各个粒径范围内出现的频率和累
积百分量，结果见表1。
表1颗粒粒径的分布
Table1 Distributionofm eropowderdiameter
区间
A
B
C
D
E
F
粒径范围／pm 个数 频率／％ 累积／％
2．2 HPLC法测定芒果苷
2．2．1 色谱条件Ⅲ：色谱柱：KromasilC18柱(150
mm×4．6mm)；流动相：甲醇一5Yo冰醋酸(20：80)；
体积流量：1．0mL／min；检测波长：320nm；柱温：室
温。在此条件下，芒果苷的保留时19约为8min，与
其他组分分离良好。见图1。
厂、
A ／＼
八
————一————／、————————，j＼、、——
U 2 4 6 8 lU
r／r曲
*一芒果苷
*一mangiferin
图1芒果苷对照品(A)和知母微粉(B)的HPLC图
Fig．1HPLCchromatogramofmangiferin
referencesubstance(A)andmicro—
powderofA．asphodeloides(B)
2．2．2标准曲线的制备：精密称取芒果苷对照品适
量，用甲醇溶解，得到375t监g／mL溶液，作为贮存
液。取贮存液适量，分别加水稀释成7．5、15、30、45、
60、75、150弘g／mL的溶液，进样5肛L进行测定。以
峰面积对质量浓度进行回归，并计算得标准曲线
y一7．6418×106X一2376．1，r一0．9998。表明芒
果苷在7．5～150／-g／mL与峰面积线性关系良好。
以信噪比约3：1计，最低检测质量浓度为0．03
,ug／mL。
2．3 知母粉中芒果苷的测定：精密称取知母粉
0．4564g，置250mL量瓶中，加水适量，50℃超声
提取2h，加水至刻度。取续滤液5弘L进样，测定，计
算得芒果苷的质量分数为2．217％。
2．4体外溶出试验：分别采用桨法和转篮法，观察
知母微粉、知母粉中芒果苷直接溶出和加透析袋屏
障时的溶出情况。测定芒果苷的质量浓度，并计算溶
出百分率和溶出速度。实验数据用Excel软件处理，
两样本均数比较采用t检验。
2．4．1直接溶出：分别精密称取微粉和粗粉约1g，
直接投入溶出仪中，按《中华人民共和国药典)>2000
年版(附录)溶出度测定方法(桨法)，以500mL水
为溶剂，转速50r／min，温度37℃，分别于5、10、
15、30、45、60min进样2mL，用孔径为0．45肛滤膜
滤过，取续滤液进样5tLL，测定芒果苷的质量浓度，
计算各个时间点的芒果苷溶出百分率和溶出速度，
万方数据
·678· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月
结果见图2。
100
赛90
鑫
委∞
70
O 10 20 30 40 50 60
f／r珈n
1一微粉2一晋通粉
1-micropowderZ-commonpowder
图2知母微粉和知母粉直接溶出曲线
Fig．2Curvesofdirectdissolutionofmicropowder
andcommonp wderofA．asphodeloides
2．4．2加透析袋屏障溶出：分别精密称取微粉和粗
粉约1g，置于透析袋中，每袋中滴加2mL水润湿
药粉，扎紧袋口，投入转篮中，按《中华人民共和国药
典)}2000年版(附录)溶出度测定方法(转篮法)，以
500mL水为溶剂，转速100r／min，温度37℃，分别
于2、4、6、8、10、12、14、16h取样2mL，滤过，取续
滤液进样5肚L，测定芒果苷的质量浓度，计算各个时
间点的芒果苷溶出百分率和溶出速度。结果见图3。
2．5芒果苷溶出速度的比较：将各样品溶出百分率
对时间进行回归，比较回归方程：Y=aX+b中斜率
a值(反映溶出速度)。直接溶出时，微粉和粗粉的a
值分别为0．5082-I-_0．1053和0．4086±0．1053、
R2值分别为0．8939士0．0673和0．8286±
0．0837，两者相比，差异显著(P<0．05，行=6)。加
透析袋屏障溶出时，知母微粉的溶出斜率a值为
3．7192±0．554，明显高于知母粉3．142±
0．7728，R2值分别为0．9803± ．0158和
0．9672±0．0126(P<0．05，咒一6)。
60
《40
瓣
衄
珥加
建
表2微粉对小鼠悬尾和强迫游泳的影响(z士S，n—10)
Table2 Effectofmicropowderntailsuspensionandforced～swimmingin ice(；士s，n—10)
与蒸馏水组比较：+P
半，随机分成2组。禁食4h后，以最大的药物浓度， 药物的结构是产生生物活性的基础，药物的存
按0．4mL／lOg连续ig给药2次，每次间隔1h，给 在方式在很大程度上也决定了其在体内的过程，进
药后连续观察7d内小鼠的进食、外观、行为活动及 而影响其活性[6]。药物所表现的生物活性是药物的
大小便变化。结果显示小鼠按最大给药剂量20 自身结构(内因)和其在体内的状态(外因)相互作用
g／kgig知母提取物或微粉后，均无异常毒性反应， 的结果。微细化工艺正是通过改变药物的体内状态
观察期内无死亡发生，两者体重亦无明显差异。 这一外因来影响药物活性的。
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第5期2005年5月·679·
实验中观察了微细化工艺制备的知母微粉与普
通知母粉中芒果苷直接溶出和加透析袋屏障时的溶
出情况。直接溶出时，微粉中芒果苷在各个时间点的
溶出百分率均有很大提高，30、45、60min时趋势更
加明显；加透析袋屏障溶出时其溶出百分率亦有提
高，但无统计学意义，可能因为数据的标准差较大所
致。尽管如此，无论是直接溶出还是加透析袋屏障溶
出，知母微粉的溶出速度明显高于知母粉，差异具有
显著性(P
知母能够调整动物脑内M受体的数量并对神
经递质有一定的影响bj。在预试验的基础上选择了
悬尾和强迫游泳试验来评价知母的活性。知母微粉
与知母提取物分别以2．0、1．0g／kg给药时均能显
著地缩短小鼠不动时间，表现了明显的抗抑郁作用。
虽然知母提取物中活性成分富集的程度明显高于微
粉，但以相同的剂量给药时，知母微粉和知母提取物
表现出相当的活性，表明知母制成微粉后成分的溶
出速度和溶出量得到了明显的提高，从而提高了生
物利用度。提示以知母微粉给药时可以减少用药量。
知母微粉的最大给药剂量为20g／kg，与同剂量知
母粉相比均无明显毒性，提示微细化工艺没有增加
知母的毒性。
实验中采用直接溶出(桨法)和加透析袋屏障溶
出(转篮法)模拟了药物成分的溶出情况，衡量知母
微粉和知母粉中成分的溶出，为微细化技术在药物
中的应用与评价提供一种新的指标和方法。微米级
的粉碎会破坏药材绝大部分的细胞壁和细胞膜，可
使细胞内的成分不经过细胞壁(膜)而直接溶出，从
而使成分溶解的更快更完全。直接溶出试验考察的
是药粉颗粒大小对成分溶出的影响，加屏障溶出试
验主要是考察细胞壁对成分溶出的影响。实验中使
用加透析袋屏障进行溶出时，知母粉中芒果苷的溶
出时间明显延长，这也证实了细胞壁(膜)的破坏对
胞内成分溶出的意义。当然，这只是初步尝试，使用
透析袋屏障溶出作为体外溶出的一种评价方法，尚
需更多数据积累和进一步研究。
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星点设计一效应面法优化水飞蓟素滴丸的制备工艺
陈 伟1，夏
(1．上海市药品和医疗器械审评中心，上海
红2，吴 伟垆
200021；2．复旦大学药学院，上海200032)
摘要：目的采用固体分散技术将水飞蓟素制成滴丸，以增加其溶出速度，提高生物利用度。以星点设计一效应面
优化法对制备工艺进行优化，筛选最佳处方。方法 以Poloxamer188的用量及药物的质量分数为考察因素，崩散
时间以及一定时间的溶出度为指标，采用多元线性回归及二次和三次多项式拟合建立指标与考察因素之间的数学
关系，根据最佳数学模型描绘效应面，再根据效应面优选最佳条件。结果 三次多项式是描述指标与因素之间的最
佳模型，r一0．998。最佳处方滴丸的崩散时间及溶出度的理论预测值与实测值偏差较小，模型具有良好的预测性。
60min溶出度为普通片剂的19倍。结论水飞蓟素制成滴丸后溶出速度显著提高，星点设计一效应面优化法可以
很好地应用于处方筛选。
关键词：水飞蓟素；滴丸；固体分散体；星点设计；效应面优化法
中图分类号：R283．6；R286．02文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)05—0679—05
收稿日期：2004—08—16
作者简介：陈伟(1972一)，男，江苏启东人，主管药师，在读硕士研究生，研究方向为中药质量控制和标准化。
*通讯作者Tel：(021)54237833Fax：(021)64170921E—mail：wuwei@shmu．edu．cn
万方数据
知母微粉的溶出及活性研究
作者： 张陆军， 王伟， 邢东明， 盖国胜， 苏慧， 何希辉， 杜力军， ZHANG Lu-jun， WANG
Wei， XING Dong-ming， GAI Guo-Sheng， SU Hui， HE Xi-hui， DU Li-jun
作者单位： 张陆军,王伟,邢东明,苏慧,杜力军,ZHANG Lu-jun,WANG Wei,XING Dong-ming,SU Hui,DU
Li-jun(清华大学,生物科学与技术系,北京,100084)， 盖国胜,GAI Guo-Sheng(清华大学,材
料系,北京,100084)， 何希辉,HE Xi-hui(中国医学科学院,中国协和医科大学药用植物研究
所,北京,100094)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(5)
被引用次数： 4次
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200505018.aspx