全 文 ：中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月·933·
2．4．2精密度试验：精密吸取混合对照品溶液20
肛L，连续进样6次，结果齐墩果酸峰面积RSD为
1．o A，熊果酸峰面积RSD为1．2％。
2．4．3重现性试验：取同一批样品，平行处理5份，
分别进样20弘L，结果齐墩果酸质量分数为
0．0920％，RSD为2．1％，熊果酸质量分数为
0．1943％，RSD为1．90A。
2．4．4稳定性试验：取供试品溶液分别在0、2、4、6
h进样20肛L，结果齐墩果酸峰面积的RSD为
2．5％，熊果酸峰面积RSD为1．7％。
2．4．5 回收率试验：采用加样回收法。取已测定量
的样品适量，分别添加齐墩果酸对照品1．15mg，熊
果酸对照品2．44mg，制备供试品溶液，进样测定，
计算回收率，结果齐墩果酸平均回收率99．3％，
RSD为2．8％，熊果酸平均回收率97．2％，RSD为
1．2％(咒一5)。
2．4．6样品测定：分别取不同采收期的薄荷样品，精
密称定，制备供试品溶液，进样测定，结果见表1、2。
以上结果表明，一刀薄荷三萜酸类成分量以7
月下旬较高，二刀薄荷三萜酸类成分量以10月上中
旬较高。因此，江苏东台地区一刀薄荷药材适宜采收
期为7月下旬，江苏东台地区二刀薄荷药材适宜采
收期为10月上中旬。
3讨论
表1头刀薄荷中三萜酸测定(弹一3)
Table1 Determinationoftr terpeneacidinfirst
harvestofM．haplocalyx(万一3)
表2二刀薄荷中三萜酸测定(席一3)
Table2 Determinationoftr terpeneacidinsecond
harvestofM．haplocalyx(一一3)
对江苏东台地区薄荷不同生长期内三萜酸类成
分(齐墩果酸、熊果酸)动态变化研究表明，一刀薄荷
三萜酸类成分的量以7月下旬较高，二刀薄荷三萜
酸类成分的量以10月上中旬较高，因此，薄荷药材
适宜采收期分别为7月下旬、10月上中旬，与以薄
荷油量为评价指标确定的适宜采收期基本一致。
测定齐墩果酸和熊果酸的量测定方法主要有薄
层扫描法[3]、高效液相色谱法[4]和衍生化气相色谱
法[53等。齐墩果酸和熊果酸属于五环三萜类成分，分
子中仅存在1个双键，在紫外204nm有末端吸收，
采用HPLC—UV法进行检测时，受流动相影响较
大，基线不够理想，检测的灵敏度较低。本实验采用
HPLC—ELSD法对齐墩果酸和熊果酸进行测定方法
稳定、可行，结果可靠。
References：
EliChP(中国药典)Es]．VolI 2005．
[2]JiYB．ThePharmacologyandApplianceofActiveCompo-
nentinChineseTraditionalHerbs(中草药有效成分药理与应
用)EM]．Haerbin：HeilongjiangScienceandTechnology
PublishingCompany，1995．
[3]DuSH，RaoJH，GengWS．Determinationofoleanolicacid
inFructuschaenomelisbyTLCS[J]．ChinTrad tHerb
Drugs(中草药)，2003，34(1)：35—37．
E4]XieY，HangTJ，Chengz．Determinationofoleanolieac d
andursolicacidinMenthahaplocalyxBriq．byHPLC[J]．
ChinaJChinMaterMed(中国中药杂志)，2001，26(9)：
615—616．
[5]YanHL，ZhaoLH，ZhuDN．Determinationofoleanolic
acidandursolicacidinst)icaPrunellaebyGCafterderiving
[J]．ChinaJChinMaterMed(中国中药杂志)，1999，24
(]2)：744—745．
大叶秦艽不同采收期中龙胆苦苷的分析
李勇慧，曹晓燕，李向民+，王嚣之
(陕西师范大学生命科学学院教育部药用植物资源与天然药物化学重点实验室，陕西西安710062)
秦艽是我国重要的传统中药，主治寒热邪气、寒 湿风痹、肢节痛、下水、利小便。能疗风、无问久新、通
收稿日期：2006—08—15
基金项目：盾叶薯蓣良种基地建设(2005EA850039)
作者简介：李勇慧，女，在读硕士。 E—mail：yonghuili@stu．snnu．edu．ca
*通讯作者李向民E—mail：lixiangmin2002@sohu．com
万方数据
·934· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月
身挛急[1’2]，在祖国医学中是治疗风湿痹痛、关节病
必不可少的药物。《中国药典>>2005年版[3]收载有龙
胆科秦艽(大叶秦艽，又称大叶龙胆)Gentiana
macrophyllaPa ．、麻花秦艽G．stramineaMax—
im．、粗茎秦艽(又称粗茎龙胆)G．crassicaulis
DuthieexBurk．或小叶秦艽G．dahuricaFisch．4
种。处于黄土高原腹地的陕西和甘肃两省是其地道
产区[4]。陕、甘两省的主流秦艽商品为大叶秦艽G．
macrophyllaPa ．的根。以前的研究表明主要成分
是裂环环烯醚萜苷类，主要存在于水溶性部位[5]。其
中龙胆苦苷量最高，其次是獐牙菜苦苷，前者具有保
肝、利胆、抗炎的生物活性，后者具有助消化、镇痛作
用，二者都已开发为中药新药。
陕西省是秦艽的主产地之一，近年来，由于用药
需求量猛增，过度采挖，致使野生秦艽资源临近濒危
状态，被列为国家三级重点保护的野生药材[s]。因此
为保证和扩大药源，大量繁殖和引种栽培已成为急
需解决的问题。本研究以秦艽的主要成分龙胆苦苷
为指标，采用RP—HPLC法[7’8]考察了不同生长年
限、不同采收期等因素对栽培秦艽中龙胆苦苷量的
影响，以期为评价栽培秦艽的质量、开发利用秦艽资
源和确保人工种植的品质提供科学的依据，为该地
区秦艽药材合理采收时期的确定提供理论参考。
1仪器、试剂与材料
仪器：ShimadzuLC一2010高效液相色谱仪，包
括自动进样器、紫外检测器、串联双柱塞式泵、LC
solution色谱工作站；MILLT--Q超纯水仪；全自动
电子天平。龙胆苦苷对照品(批号110770—200409)，
中国药品生物制品检定所；甲醇为分析纯和色谱纯；
水为超纯水。
秦艽为陕西凤县东河桥采集不同时期的栽培秦
艽G．macrophyllaPall．，经陕西师范大学生命科学
学院植物分类教研室任毅教授鉴定。
2方法
2．1色谱条件：色谱柱：ShimadzuC18(150mm×
4．6mm)；流动相：甲醇一水(1：4)；检测波长：245
nm；体积流量：1．0mL／min；柱温：25℃。对照品及
供试品色谱图见图1。
2．2 供试品的处理：从2005年8月至2006年1
月，按研究内容定期梅花采样，以考察根部生长状
况。用于测定的样品，在37℃烘箱中烘干，去除残
茎，抖净泥土杂质，撞掉老皮，再用毛刷刷掉根表面
的微尘，粉碎机粉碎，过40目筛后置干燥器中备用。
2．3 对照品溶液制备：精密称取龙胆苦苷对照品适
0 5 10 15 200 5 10 15 20
t／rain
l一龙胆苦苷
1一gentiopicrin
图1对照品(A)及秦艽样品(B)HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsfreferenceubstance
(A)andRa ixGentianaeMacrophyllaesamples(B)
量，加甲醇配制成0．5mg／mL的溶液，摇匀并使其充
分溶解，0．22btm微孔滤膜滤过后即为对照品溶液。
2。4供试品溶液制备：精密称定37℃干燥至恒重的
样品粉末0．50g，加甲醇20mL，加热回流30min，
滤过，滤液减压蒸馏至干，残渣用20mL甲醇溶解，
滤过，滤液移至50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，
混匀后精密吸取1mL于5mL量瓶中，加甲醇至刻
度，漩涡混匀摇匀，过0．22ym微孔滤膜，即得。
2．5线性关系考察：精密吸取龙胆苦苷对照品溶液
1、3、5、7、9、11肚L，进样测定，以质量浓度为横坐标，
峰面积为纵坐标，得回归直线方程为y一1×106+
11223，r=0．9999，结果表明龙胆苦苷在0．50～
5．50P-g线性关系良好。
2．6精密度试验：取龙胆苦苷对照品溶液连续进样
5次，每次10弘L，计算峰面积积分值的RSD为
0．78％。
2．7重现性试验：取同一批样品5份，制备供试品
溶液，处理成5份，进样，每次10肛L，计算得龙胆苦
苷峰面积积分值的RSD为0．19％。
2．8稳定性试验：取供试品溶液分别在0、4、8、16、
24、48h进样10止，记录峰面积，计算龙胆苦苷峰
面积的RSD为1．81％，表明供试品溶液在48h内
稳定。
2．9加样回收试验：精密称取已知龙胆苦苷量的样
品0．30g，准确加入龙胆苦苷对照品10．00mg，制
备供试品溶液，处理成5份，进样分析，测定龙胆苦
苷的峰面积，计算平均回收率为99．54％，RSD为
2．80％(，l=5)。
3结果
3．1不同生长年限栽培秦艽龙胆苦苷测定：分别取
二年生、三年生的秦艽样品，制备供试品溶液，进样
测定，测得药材中龙胆苦苷的量，见表1。
3．2三年生栽培秦艽不同采收期龙胆苦苷测定：取
陕西凤县不同采收时期(2005年8月至2006年1
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月·935·
月)三年生栽培秦艽，制备供试品溶液，进行测定，每
个样品做3次平行实验-取3次测定结果的平均值，
见表2。
3．3 凤县三年生栽培秦艽和野生秦艽龙胆苦苷比
较：取凤县三年生栽培秦艽(2005年9月、2005年
10月、2005年12月)和凤县野生秦艽，制备供试品
溶液，进样测定，每个样品做3次平行实验，取3次
测定结果的平均值，见表3。
表1不同生长年限龙胆苦苷(聆一3，
Table1 Contentsofgentiopicrinofvariousages(n一3)
表2不同采收期龙胆苦苷(忍=3)
Table2 Contentsofgentiopicrinatvarious
collectingperiods(辟一3)
表3野生和栽培秦艽中龙胆苦苷(矗一3)
Table3 Contentsofgentiopicrininwildandplanting
RadixGentianaeMacroph3’Ilae(n一3)
样品产地品种雩7采集时间荔啪，％
4讨论
4．1龙胆苦苷是秦艽所含的主要成分，量的高低直
接影响药材质量。《中国药典》2005年版一部以龙胆
苦苷量作为药材质量评价的依据，规定原药材中龙
胆苦苷量不少于2．o％。本实验中所采集药材均达
到《中国药典》规定标准。
4．2 表1中比较了不同采收年限秦艽中龙胆苦苷
的量，三年生秦艽中龙胆苦苷的量明显高于二年生
秦艽中龙胆苦苷的量。笔者只对二年生和三年生的
进行了比较，认为应在第三年采收为宜。李向阳等[9]
曾对青海省所栽培的不同年限秦艽中龙胆苦苷的量
进行比较，认为二年生栽培秦艽中龙胆苦苷量最高。
这是因为所用的秦艽为麻花秦艽，与本实验所用的
大叶秦艽不是同一个种，另外陕西省和青海省环境、
气候条件的不同也是造成结果不一致的可能原因。
4．3前人研究[1叨发现秦艽的最佳采收季节应在秋
季。本实验结果显示，三年生秦艽中龙胆苦苷的量在
12月份达到最大值，10月份和11月份量差不多，考
虑到天气原因，12月份天气变冷，由于地面上冻导
致采收困难，因此建议秦艽的最佳采收期应在10月
份和11月份。
4．4 由表3结果可看出，陕西凤县地区3年生栽培
秦艽中龙胆苦苷的量略低于当地野生秦艽中龙胆苦
苷的量，但差别不大，说明该地区人工栽培秦艽质量
较优。
4．5 在前人研究工作的基础上[11’12]，针对秦艽样品
中苷类物质的提取溶剂、方法进行了探讨。首先，选用
甲醇和70％乙醇做为溶剂进行比较；其次，在提取方
法上选用水浴和超声方法进行比较。结果甲醇作为溶
剂较乙醇提出率高，超声和水浴提取结果差不多，考
虑到超声会有所破坏，选用甲醇作溶剂，用水浴的方
法进行提取，且比较了不同的提取时间，发现30rain
可得到分离良好、出峰适宜的色谱峰。因此采用甲醇
作溶剂，用水浴提取30rain的提取方法。
本研究从龙胆苦苷成分量的因素综合考虑，建
议陕西凤县地区栽培秦艽的最佳采收时期应为栽培
后第三年的10月和11月。
References：
[1]EditorialBoardofChinaHerbal，StateAdministrationof
TraditionalChineseMedicine．ChinaHerb l(中华草本)
EM3．Shanghai：ShanghaiScientificandTechnicalPublish—
ers．1999．
[2]ZhengHz，DongzH，SheJ．ModernResearchndApplica—
tionsofChineseMateHaMedica(中药现代研究与应用)
[M]．Beijing：XueyuanPress，2001．
[3]ChP(中国药典)[S]．VolI．2005．
E4]QuanYS．HerbalstudyonQinjiao[J]．NorthwestPharmd
(西北药学杂志)，1997，12(3)：113．
[5]XiaoPG．ModernChineseMateriaMedica(tg编中药志)
[M]．Beijing：ChemicalIndustryPress，2002．
[6]ZhangED，ZhengHC．ConservationofEnda geredM dici—
nalWildlifeResourcesinChina(中国濒危野生药用动植物资
源的保护)[M]．Shanghai：SecondM litaryMedicalUniver—
sityPress，2000．
[7]JiLJ，MaYH，ChenGC，eta1．Determinationa devalua—
tionoftwoiridoidsnGentianastramineaherbsyHPLC
口]．ActaBotBoreal—OccidentS n(西北植物学报)，2004，
24(2)：292．
[83MaX，ChenXG，HuZD．Comparisonofthegentiopi—
crosidecontentsofeightspeciesofgenusGentianafromGan—
SH[J]．JChinMedMater(中药材)，2003，26(2)：85—86．
r9]LiXY，LiFA，LiJM，eta1．Comparisonofthegentiopi—
万方数据
·936· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月
crosidecontentsbetweenwildandplantingGentianainQing—
haiprovince[J]．WestChinaJPharmSci(华西药学杂志)，
2005，20(2)：137．
[10]LiXY，LiFA，LiJM，eta1．Researchtheinfluencefa tors
onthegentiOpicrosideinplantingGentianafromQinghai
Province[J]．ChinTraditHerbDrugs(中草药)，2005，36
(8)：1237．
[11]Ha0BH，SunWJ，ZhiZH，eta1．Supersonicextra tionof
gentiopicrininGent妇namacrophyllaPallandetermination
ofitscontentbyHPLC[J]．JNorthwestUniv：NatSci(西
北大学学报：自然科学版)，2004，36(1)：81．
[123BaiS，NiJ，KongH，eta1．Studiesonextractionprocessof
Gentiana[J]．ChinTraditPatMed(中成药)，2005，9(27)：
1 074．
连翘中连翘苷HPLC测定方法的改进
陆红柳1‘2，谭喜莹1’2，张飞1’2，赵陆华1’2。
(1．药物质量安全与预警教育部重点实验室，江苏南京210009；2．中国药科大学分析测试中心，江苏南京210009)
连翘Forsythiasuspensa(Thunb．)Vahl是木
犀科植物连翘属落叶灌木，以果实入药，连翘药材商
品分为“青翘”、“老翘”[1]。连翘是中药中最常见的药
材之一，具有清热解毒、散结消肿之功效。其主要成
分为连翘苷、连翘酯苷、连翘酚等。对连翘及连翘相
关制剂的质量评价中，多以连翘苷作为一项主要指
标。对于样品的预处理，《中国药典》[21是采用过氧化
铝柱方法，文献[3~61中有采用石油醚脱脂后超声法，
冷浸过夜法，sPE法等。但经研究表明这些方法比
较繁琐，特别是对于因产地差异或药材储存期限所
致连翘苷量较低的样品测定，回收率低，重现性差。
对于测定波长的选择，《中国药典》及文献多采用
277nm，由于连翘苷在该波长处吸收小，低量的样
品测定误差较大。因此，本实验对《中国药典》方法及
文献方法进行改进，采用直接超声方法提取连翘药
材，并选择低波长进行测定，结果可靠，方法简便，回
收率及灵敏度高，重现性好。
1仪器与试药
岛津LC一10ADVP高效液相色谱仪，岛津
SPD一10AVP检测器，浙江大学N2000型色谱工
作站。乙腈为HPLC级，水为乐百氏纯净水。连翘苷
对照品和连翘对照药材由中国药品生物制品检定所
提供。连翘药材收集于河南、南京，经中国药科大学
宋学华教授鉴定为正品。
2方法与结果
2．1色谱条件：色谱柱：大连依利特HypersilC，。
(250mm×4．6mm，5肛m)；流动相：乙腈一水(24：
76)；体积流量1·0mL／min；检测波长205nm；柱
温：室温；迸样量t20FL。
2．2 对照品溶液制备：精密称取连翘苷对照品
4．94mg，置于10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，
制成质量浓度为494}tg／mL储备液。精密吸取连翘
苷储备液适量，配制成为19．8lug／mL连翘苷溶液。
2．3供试品溶液的制备：精密称取连翘药材粉末1
g，加80％甲醇100mL浸泡30min，超声30min，静
置10min，再超声30min，滤过，浓缩，定容至50mL
量瓶中，微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2．4测定方法：精密吸取供试品和对照品溶液各
20弘L，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱峰面积，
以外标法计算样品的量。见图1。
t／rain
1一连翘苷
1-forsythin
图1 连翘苷对照品(A)和样品(B)色谱图
Fig．1Chromatogramsfforsythinreference
substance(A)andsample(B)
由图1表明，本法测定基线平稳；杂质峰对连翘
苷的测定无干扰；虽然2～4min极性大的成分峰较
多，但容易洗脱，不影响测定。
2．5 线性关系：分别精密吸取连翘苷储备液适量，
配制成98．8、49．4、19．8、9．88、4．94、1．98、0．988
pg／mL连翘苷对照品溶液，分别进样20弘L。以连翘
苷的质量浓度对色谱峰面积进行回归统计，回归方
收稿日期：2006一08—10
*通讯作者赵陆华Tel：(025)83271185E—mail：zhaoluhua@hotmail．com
万方数据
大叶秦艽不同采收期中龙胆苦苷的分析
作者： 李勇慧， 曹晓燕， 李向民， 王喆之
作者单位： 陕西师范大学生命科学学院,教育部药用植物资源与天然药物化学重点实验室,陕西,西安
,710062
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(6)
被引用次数： 3次

参考文献(12条)
1.Editorial Board of China Herbal State Administration of Traditional Chinese Medicine China 中华草
本 1999
2.Zheng H Z;Dong Z H;She J 中药现代研究与应用 2001
3.中华人民共和国药典(一部) 2005
4.Quan Y S Herbal study on Qinjiao[期刊论文]-西北药学杂志 1997(03)
5.Xiao P G 新编中药志 2002
6.Zhang E D;Zheng H C 中国濒危野生药用动植物资源的保护 2000
7.Ji L J;Ma Y H;Chen G C Determination and evaluation of two iridoids ir Gentiana straminea herbs by
HPLC[期刊论文]-西北植物学报 2004(02)
8.Ma X;Chen X G;Hu Z D Comparison of the gentiopicroside contents of eight species of genus Gentiana
from Gansu[期刊论文]-中药材 2003(02)
9.Li X Y;Li F A;Li J M Comparison of the gentiopicroside contents between wild and planting Gentiana
in Qinghai province[期刊论文]-华西药学杂志 2005(02)
10.Li X Y;Li F A;Li J M Research the influence factors on the gentiopicroside in planting Gentiana
from Qinghai Province 2005(08)
11.Hao B H;Sun W J;Zhi Z H Supersonic extraction of gentiopicrin in Gentiana macrophylla Pall and
determination of its content by HPLC[期刊论文]-西北大学学报(自然科学版) 2004(01)
12.Bai S;Ni J;Kong H Studies on extraction process of Gentiana 2005(09)

本文读者也读过(10条)
1. 唐建宁.康建宏.许强.王俊.宋立军.TANG Jian-ning.KANG Jian-hong.XU Qiang.WANG Jun.SONG Li-jun 秦艽与
小秦艽光合日变化的研究[期刊论文]-西北植物学报2006,26(4)
2. 李向阳.李福安.李建民.魏全嘉 青海产秦艽中龙胆苦苷分布状态[期刊论文]-中药材2005,28(3)
3. 王建忠 秦艽亟需保护与发展[期刊论文]-中国现代中药2007,9(7)
4. 木拉提·克扎衣别克.熊元君.贾晓光 新疆四种秦艽中总生物碱含量的测定[期刊论文]-中药材2001,24(10)
5. 刘丽莎.王岚.孙少伯 小秦艽和秦艽核型的比较研究[会议论文]-2005
6. 张雪荣 秦艽及其伪品的比较鉴别[期刊论文]-中草药2000,31(8)
7. 孙菁.王延花.徐文华.陈桂琛.SUN Jing.WANG Yan-hua.XU Wen-hua.CHEN Gui-chen 小秦艽根部脂肪酸成分的主
成分分析及其与生态因子的相关性[期刊论文]-植物资源与环境学报2009,18(2)
8. 梁永欣.卢永昌.潘国庆.阿德花 麻花秦艽多糖含量的分析[期刊论文]-青海科技2004,11(3)
9. 蒲国年 秦艽栽培技术[期刊论文]-青海农技推广2004(3)
10. 李小娟 麻花艽和管花秦艽(龙胆科)之间自然杂交的RAPD分析[期刊论文]-吉林农业C版2010(9)
引证文献(3条)
1.陈千良.石张燕.孙文基.杨慧 不同栽培年限秦艽药材质量变异研究及适宜采收年限的确定[期刊论文]-西北大学
学报（自然科学版） 2010(2)
2.齐香君.陈如意.王薇 秦艽细胞悬浮培养研究(Ⅱ)[期刊论文]-中草药 2010(4)
3.杨慧玲.司庆文.侯勤正.刘建全.周党卫 HPLC法测定不同海拔长柄秦艽中龙胆苦苷、马钱酸、樟牙菜苦苷和獐牙
菜苷[期刊论文]-中草药 2010(10)


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200706054.aspx