全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11,El·1655·
裹1轨迹定量法测定供试样品蚓激酶及其水解产物(j±，)
TableDeterminationoflumbrukinaseandithydro-
lysatesinfourprocessedearthworms
bytrace—trackingnalysis(z士$)
供试样品，器篡，篇，。芝：釜，虎黧兰，
3讨论
应用斑点免疫印迹法对4种地龙炮制品蚓激酶
及其水解产物的量的测定结果表明，山东地方品种
秉氏环毛蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物的量与现
行临床应用地龙药材参环毛蚓无显著性差异，理论
上，可作为现行地龙药材的替代品。
以现行临床应用的中药材(如水蛭、土鳖虫、全
蝎等)为对照，斑点免疫印迹法可对多种中药资源药
效品质作平行比较，是一种发现新的现行中药材替
代品、扩大中药资源范围的有效手段；对于生药的药
裹2 4品种地龙炮制品中蚓激酶及其水解产物质■分数的
LSD检验
Table2 LSDTestoflumbrukinasea dIthydrolysates
infourspeciesofprocessedearthworms
组平均致镶譬：秉鬈挈朋本杜81．0拉蚓5撅雩芸≯
效成分已明确、而在炮制中不稳定的这类中药炮制
品，可以应用斑点免疫印迹法进行质量检测与控制，
并指导临床用药，具有重大实践意义。
参考文献：
E13王宗伟，集秀文。范兴亚．蚯蚓生物工程技术研究进展EJ3．
中草药，2000，31(5)：386—387．
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SpringHarborLaboratoryPress，1989．
大孔吸附树脂对丁香叶中丁香苦苷的富集工艺研究
刘 欣1，高月娟2，王建明”，许贵军2，薛红梅2
(1．浙江大学药学院，浙江杭州 310058}2．黑龙江中医药大学中医药研究院，黑龙江哈尔滨150040)
摘要：目的研究大孔吸附树脂富集丁香苦苷类成分的工艺条件及参数。方法 以丁香苦苷为考察指标，建立
HPLC分析方法，通过考察6种大孔吸附树脂对丁香苦苷的吸附分离性能，筛选出AB一8树脂作为分离纯化丁香苦
苷类成分的介质，并对AB一8树脂的吸附性能进行研究。考察富集丁香苦苷类成分的最佳工艺条件。结果丁香叶
经水提醇沉浓缩后，以AB一8型大孔树脂为吸附剂，4BV的水洗脱出去杂质后，收集5BV50％乙醇洗脱液为最佳工
艺条件。结论大孔吸附树脂分离工艺可作为富集丁香苦苷类成分的有效方法，并为丁香叶药材的质量控制和新
型给药系统的研究奠定基础。
关键词：富集I丁香叶，丁香苦苷；大孔吸附树脂
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)11—1655—05
EnrichmentprocessofsyringopicrosideinF l umSyringaeOblataewithmacroporousresin
LIUXinl，GAOYue—juan2，WANGJian—ruin92，XUGui—jun2，XUEHong—mei2
(1．CollegeofPharmacy，ZhejiangUniversity，Hangzhou310058，China；2．AcademyofTraditionalChineseMedicine，
HeilongjiangUniversityofTraditionalChineseMedicine，Harbin150040，China)
Abstract：ObjectiveTostudytheoptimalconditionsandparametersforthenrichmentprocessof
syringopicrosideinFoliumSyringaeOblataewithmacroporousresin．MethodsWiththe nrichment
degreeofsyringopicrosideasanin x，theanalyticalmethodofHPLCwasdeveloped，AB一8resinwas
收稿日期：2007—05—23
。
基金项目：教育部博士点专项基金资助项目(20060228005)
作者简介：刘欣(1974～)，男，黑龙江省哈尔滨市人，讲师，中药学博士生．浙江大学药学院博士后，主要从事中药新型给药系统、药物
作用机制研究。Tel：(0571)88208457E—mail：Liuxinyyll@yahoo．corn．cn
·通讯作者王建明Tel／Faxl(0451)8219626—2E-mail：wangjianming@hljucm．net
万方数据
·1656· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
selectedasthemediumforpurificationofsyringopicrosideonthebasisofcomparings xkindsof
macroporousresin’Sadsorptionandseparationperformances，andtheoptimalconditionsofthenrichment
processwereinvestigated．ResultsTheoptimalconditionswerethatthe xtractofFoliumSyringae
Oblataewasextractedbywaterandcondensedbyalcoholprecipitationtaki gAB-8resincolumnas
adsorbent，theresinwaswashedby4BVofdistilledwaterto emoveimpurityand5BVof50％ethan01to
elutesyringae．ConclusionTheprocessisaneffectivemethodt enrichsyringopicrosideandprovidea
waytoresearchnewmedicinedeliverysystem．
Keywords：FoliumSyringaeOblatae；enrichment；syringopicroside；macroporousresin
丁香叶为木犀科植物紫丁香Syringaoblata
Lindl．、洋丁香S．vulgarisL．和朝鲜丁香S．dilatata
Nakai的干燥叶，具有广谱抗菌和抗病毒作用，收载
于《黑龙江省药品标准》，在东北地区分布广泛，资源
丰富。丁香叶制剂炎立消胶囊、片剂收载于《中华人
民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂，用于治疗
急性肠炎、菌痢、上呼吸道感染及急慢性扁桃体炎等
感染性疾病，疗效显著。丁香叶的药效物质基础主要
为丁香苦苷、3，4二羟基苯甲酸、3，4二羟基苯乙醇、
酪醇、反式对羟基肉桂酸，对金色葡萄球菌、痢疾杆
菌、大肠杆菌及绿脓杆菌均有不同程度的抑制作
用[1]。其中以丁香苦苷的量较高，为主要活性成分。
由于大孔吸附树脂对中药提取物中苷类、黄酮、生物
碱的分离纯化效果较好，并且具有吸附性强、解吸容
易、可反复使用等优点[2]，因此本实验采用大孔吸附
富树脂柱色谱结合HPLC在线检测，对丁香苦苷类
成分的富集工艺进行研究。
l实验材料
Waters600E一2487型高效液相色谱仪；
Millennium32色谱工作站数据处理系统；AGl35
型电子天平(瑞士Mettler—Toledo公司)。
丁香叶采自黑龙江中医药大学药圃，经黑龙江
中医药大学生药学教研室鉴定为木犀科植物紫丁香
S．oblataLindl．的干燥叶。丁香苦苷对照品(自制，
UV、IR、MS、HNMR分析确定，经高效液相色谱归
一化法计算，质量分数为98．8％)。所用水为超纯水，
甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
AB一8、D一101、X一5、NKA—I型大孔吸附树脂
(南开大学化工厂)，HPD400、HPD500型大孔吸附
树脂(河北沧州宝恩化工有限公司)，所用大孔吸附
树脂的理化性质见表1。
裹1树脂的物理结构参数
Table1 Characteristicparameterofresins
树脂型号极性比表$i穆q／(m2·g-：)孔径／nm孔容／(mL·g‘1)
2方法与结果
2．1丁香苦苷的HPLC法测定
2．1．1对照品溶液的制备：精密称取丁香苦苷对照
品适量，置量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇
匀，即得69．5ttg／mL的溶液，备用。
2．1．2 检测波长的选择：精密吸取69．5gg／mL丁
香苦苷对照品溶液1mL于10mL量瓶中，用流动相
定容，并以流动相作为参比溶液，在190～600nm进
行全波长扫描，结果显示丁香苦苷在221nm处有一
最大吸收峰，故选定221nm为检测波长。
2．1．3 色谱条件及系统适应性：Diamonsil(TM)
C18色谱柱(200mm×4．6mm，5pm)；流动相：甲醇一
水(40：60)；体积流量：1．0mL／min；检测波长：221
nm；柱温：25℃。在上述色谱条件下，进样量10ttL，
丁香苦苷对照品的保留时间为22．358min，理论塔
板数以丁香苦苷计算应不低于2500，色谱图见图1。
O 4 8 12 16 20 24 280 4 8 12 16 20 24 28
t／rain
-一丁香苦苷
-一syringopicroside
图1丁香苦苷对照品(A)、药材(B)和树脂洗脱液(C)的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsfsyringopicrosidereferencesubstance(A)·crudedrugs(B)，andresieluant(C)
万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月· 657·
2．1．4 线性关系考察：精密取69．5／tg／mL丁香苦
苷对照品溶液2．5、5、10、15、20弘L进样，测定峰面
积。以进样质量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，
作图，得一直线，其回归方程为Y=2．79×106X一
8．23×104，，．=0．9999。结果表明丁香苦苷在
0．17375～1．39pg与峰面积呈良好的线性关系。
2．1．5 精密度试验：精密吸取69．5／-g／mL丁香苦
苷对照品溶液10弘L，注入高效液相色谱仪，连续测
定5次，丁香苦苷峰面积积分值的RSD为1．63％。
2．1．6重现性试验：精密吸取同一批大孔吸附树脂
洗脱液5份，每份1mL，在上述色谱条件下进样10
pL，测定丁香苦苷峰面积积分值，计算丁香苦苷质
量浓度，结果其RSD为2．02％。
2．1．7 稳定性试验：取同一批大孔吸附树脂洗脱
液，分别于0、2、4、8、12、24h各精密吸取10pL，在上
述色谱条件下测定。结果表明，24h内丁香苦苷峰
面积无明显变化，RSD为1．42％。
2．1．8加样回收率试验：分别精密吸取含丁香苦苷
47．63％的70％乙醇洗脱液干浸膏5份，适量，加入
丁香苦苷对照品适量，制备供试品溶液，进样测定，
计算丁香苦苷的回收率，结果其RSD为2．66％。
2．2 丁香叶提取液中丁香苦苷的测定：丁香叶适当
粉碎，分别加16倍量的水煎煮2h，加12倍量的水煎
煮1h，滤过，合并滤液，浓缩至含2g生药／mL，加乙
醇至含醇量为70％，醇沉24h，滤液减压回收至无醇
味，加蒸馏水调至含0．5g生药／mL，作为供试品溶
液。精密吸取供试品溶液5mL，加蒸馏水定容于
50raL量瓶中，用0．45弘m微孔滤膜滤过，进样10
pL，测定，结果提取液中丁香苦苷的质量浓度为
16．4mg／mL。
2．3 大孔吸附树脂预处理与再生：新树脂用95％
乙醇浸泡24h，充分溶胀，用95％乙醇洗脱，不时检
测流出的乙醇液，至流出的乙醇液与蒸馏水按照
1：3混合时不呈白色浑浊，并且流出乙醇液在
200～400nm妣以95％乙醇为空白对照，不产生紫
外吸收峰。再用蒸馏水洗至无醇，备用。
再生时树脂先用4BV的95％乙醇以2BV／h的
流速洗脱，并用蒸馏水以同样流速洗去乙醇；用4
BV的5％HCI溶液浸泡2～4h，并以2BV／h的流速
通过树脂床，而后用蒸馏水以同样流速洗至pH值
中性；再用4BV的2％NaOH溶液浸泡2,-．4h，并以
2BV／h的流速通过树脂床，而后用蒸馏水以同样流
速洗至pH值中性。
2．4静态一吸附解吸试验筛选树脂型号：选取经预
处理的AB一8、D一101、X一5、NKA—I、HPD400、
HPD500型大孔吸附树脂，抽滤至不滴水为度。准确
称取5g，置具塞锥形瓶中，加入30mL丁香叶提取
液，恒温振荡器100r／min，室温条件下振荡24h，滤
过，用适量蒸馏水清洗树脂表面残留液，合并滤液，
醋酸乙酯萃取4次(50、50、40、40mL)，水浴蒸干，残
渣用甲醇溶解并定溶于50mL量瓶中，测定吸附前
后供试液中丁香苦苷的质量浓度，计算吸附率。将吸
附平衡后的树脂加入30mL95％乙醇，恒温振荡器
100r／min，室温条件下振荡24h，滤过，蒸干，甲醇
溶解并定溶于50mL量瓶中，测定丁香苦苷质量浓
度，计算解吸率。结果见表2
吸附率一(CoVo—Clyl)／(C。V。)×100％
解吸率=C2V2／(CoV。--ClVl)×100％
式中C。为供试品溶液中目标成分的质量浓度，y。为供
试品溶液体积；c。为流出液中目标成分的质量浓度，y。为流
出液体积；C。为解吸液中目标成分的质量浓度，矿：为解吸液
体积。
表2不同类型树脂的吸附和解吸
Table2 Adsorptionandesorption
ofdifferenttypesofresins
可见AB一8型大孔吸附树脂的吸附率和解吸率
相对较高，结合树脂成本综合考虑，选择AB一8型大
孔吸附树脂进行富集工艺研究。
2．5树脂的吸附性能研究
2．5．1吸附等温线的制备：准确称取经预处理并抽
滤至干的AB一8型大孔吸附树脂5g置于具塞锥形
瓶中，加入40mL不同质量浓度的丁香叶供试品溶
液，100r／min，分别于25、40、50℃条件下恒温振荡
24h，测定吸附前后供试液中丁香苦苷的质量浓度，
计算吸附量，绘制吸附等温线，见图3。
q=(Co—C)矿／H7
式中g为吸附量，Co、C分别为吸附前和吸附平衡后溶液
中丁香苦苷的质量浓度；V为吸附液的体积，缈为树脂的
质量。
随着供试液中丁香苦苷质量浓度的增加，树脂
的吸附量逐渐增大，最后趋于饱和吸附值，吸附曲线
符合Langmiur吸附等温方程，表明浸提物中丁香苦
万方数据
·1658· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
，
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暑
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20
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60
40
20
0
0．04o．080．5l1．672．893．754．035．396．57
吸附平衡质量浓度／(rag·mL0)
圈3丁香苦苷的吸附曲线
Fig．3Adsorptioncurveofsyringopicroside
苷在AB一8型树脂上基本呈单分子吸附，有利于在柱
色谱过程中扩大吸附量。
随着温度的升高，同一质量浓度下树脂的吸附
量降低，表明丁香苦苷在AB一8型树脂上的吸附过程
是放热过程，低温有利于吸附。
2．5．2盐离子浓度对吸附的影响：由于盐离子的存
在，使溶液中的自由水减少，产生盐析作用，丁香苦
苷的溶解度降低。溶解度越小，溶质与溶剂之间的相
互作用力相对减弱，则被吸附的倾向越大，也就越容
易吸附。因此，实验以NaCl为介质，考察盐离子浓度
对丁香苦苷吸附量的影响。准确称取经预处理并抽
滤至干的AB一8型大孔吸附树脂5g，置于具塞锥形
瓶中，加入50mL含丁香苦苷1．64mg／mL的供试
液，加入NaCI调节NaCI浓度分别为0．5、1．0、1．5、
2．0、2．5moL／L，恒温振荡24h，平衡后测定树脂吸
附量。盐离子浓度与吸附量的关系见图4。
玉15．5
要145
蛔
蓍13．5
12．5
盐离子浓厦／(tool·mL。)
田4盐离子对吸附的影响
Fig．4Effectofsaltionstrengthonadsorption
可见适量盐离子的存在，使大孔吸附树脂对丁
香苦苷的吸附量有所增加，主要是由于盐析作用使
供试液中物质的溶解度下降，吸附平衡向吸附方向
偏移。下一步需要对盐离子的种类进行考察。
2．5．3动态吸附曲线(泄漏曲线)的制备：准确称取
预处理并抽滤至干AB一8型树脂15g，湿法装柱(30
cm×1．3cm)，将含丁香苦苷4．1mg／mL的供试液
300mL以2BV／h通过树脂柱，每5mL收集一次，
测定流出液中丁香苦苷的质量浓度，绘制动态吸附
曲线。将动态饱和吸附的树脂用95％乙醇洗脱，测
定，计算树脂的动态饱和吸附容量，见图5。可以看
出，对应于流出液中丁香苦苷质量浓度是上样液质
量浓度的50A时，15gAB一8型树脂可处理5倍柱体
积的上样液，共吸附471．5mg丁香苦苷，动态饱和
吸附量为31．43rag／g(相当于3．84g生药／g树脂)。
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斌 30 80 130 l∞ 230 280
流出液体积／mL
图5提取物在AB-8树腰上的泄露曲线
Fig．5Leakagecurveof xtractonAB一8resin
2．6洗脱剂体积分数的考察：准确称取预处理并抽
滤至干AB一8型大孔树脂4份，每份15g，湿法装柱
(30cm×1．3cm)，将含丁香苦苷4．1mg／mL的供
试液以2BV／h上样20mL，饱和吸附30min，先用4
BV蒸馏水洗至洗脱液还原糖反应(Molish反应)为
阴性，分别用5BV30％乙醇，5BV50％乙醇，5BV
70％乙醇，5BV90％乙醇洗脱，体积流量1mL／min，
分别收集洗脱液，定容于250mL量瓶中，摇匀。用
0．45弘m微孔滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，测
定丁香苦苷质量浓度，计算解吸率。结果见表3，70％
乙醇解吸效果较好，达到了95％以上，解吸液中丁香
苦苷质量浓度较高，所以选择70％乙醇作为洗脱剂。
裹3 乙醇体积分数对解吸效果的影响
Table3 Effectofeluateondesorptlonwithdifferent
concentrationofe ha ol
2．7 洗脱剂用量的考察：称取AB一8型大孔吸附树
脂15g，根据动态吸附曲线确定的上样量，吸附丁
香叶提取液，然后用蒸馏水洗去杂质，再用70％乙醇
以2BV／h的体积流量洗脱，25mL收集一次流出
液。以洗脱液的体积与洗脱液的质量浓度作图，见图
6。可知，洗脱剂用量对解吸过程影响较大，70％乙醇
125mL(相当于5BV)能够将被吸附的丁香苦苷类
成分洗脱完全。
2．8工艺验证：称取AB一8型大孔树脂3份，每份
15g，根据动态吸附曲线确定的上样量上样，先用4
BV蒸馏水洗去杂质，再用5BV70％乙醇洗脱，收
万方数据
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，
龟
k
喜
牡
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懈
k
甓
和葡萄糖苷链组成，这种分子结构使其总体具有一
定的极性和亲水性，有利于弱极性和极性树脂吸附。
体积比表面积是影响树脂吸附量的主要因素，
丁香苦苷相对分子质量为494，有利于被孔径较大的
树脂吸附，在孔径适合时，树脂的吸附量随比表面积
增大。但在某些情况下，吸附作用力过强不利于解
吸，女IHPD400、HPD500、X一5型树脂的吸附量较大，
但解吸率并不突出，不适用于分离。另外，树脂的孑L
径越大，吸附大分子杂质越多，从而造成树脂的吸附
选择性下降，如AB一8和D一101、HPD400、HPD500型
树脂的比表面积相近，但由于D一101型树脂的孔径
远大于AB一8，因此吸附量有所下降。HPD400、
HPD500型树脂由于孔径大，吸附选择性低，而以
AB-8解吸液中丁香苦苷量最高。
综上所述，树脂的吸附能力是由极性、比表面
积、孔径以及被分离物质的理化性质等综合因素决
定。弱极性AB一8型树脂的极性、比表面积和孔径均
适合，吸附量大，易于解吸，解吸液中丁香苦苷量最
高，采用适宜的工艺条件，可获得最佳生产效果。
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乳块消片HPLC指纹图谱的研究
孙宁，秦培勇’，谭天伟
(北京化工大学生命科学与技术学院生物加工过程重点实验室，北京 100029)
摘要：目的研究乳块消片的高效液相指纹图谱，为科学评价及有效控制乳块消片的质量提供了有效可靠的方
法。方法利用高效液相色谱法测定了10批乳块消片样品，色谱条件为：KromasilC。。色谱柱(250mm×4．6mill，
5肛m)，流动相：0．1％醋酸水溶液(A)一甲醇(B)，梯度洗脱l体积流量：1mL／min；检测波长：280am；柱温：25℃I
进样量：20pL。结果精密度、重现性和稳定性试验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积RSD均小于3％，所得
的色谱图各色谱峰分离较好，基线平整，符合指纹图谱有关规定。结论乳块消片的指纹图特征性及专属性强，可
作为全面控制乳块消片质量的依据。
关键词：乳块消片#丹酚酸B#指纹图谱
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)11—1659—04
乳块消片是由橘叶、丹参、皂角刺、川楝子、地龙
和王不留行组成，具有疏肝理气、活血化瘀、消散乳
块的作用，临床治疗乳腺增生疗效显著。由于乳块消
片药味较多，成分复杂，仅仅测定其中的一个或几个
收稿日期：2008—01—23
基金项目：813项目(2005AA022245)I973项目(2007CB714304)l国家自然科学基金资助项目(20636010，20806006)，北京市科技计划
项目(D0205004040211)；北京化工大学青年教师基金(QN0616)
作者简介：孙 宁(1982一)，男，吉林省吉林市人，北京化工大学硕士研究生。研究方向为中药制剂．
·通讯作者 秦培勇Tel：(010)64448962E—mail：qinq)r@mail．butt．edu．cn
万方数据
大孔吸附树脂对丁香叶中丁香苦苷的富集工艺研究
作者： 刘欣， 高月娟， 王建明， 许贵军， 薛红梅， LIU Xin， GAO Yue-juan， WANG Jian-
ming， XU Gui-jun， XUE Hong-mei
作者单位： 刘欣,LIU Xin(浙江大学药学院,浙江,杭州,310058)， 高月娟,王建明,许贵军,薛红梅,GAO
Yue-juan,WANG Jian-ming,XU Gui-jun,XUE Hong-mei(黑龙江中医药大学中医药研究院,黑
龙江,哈尔滨,150040)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(11)
被引用次数： 5次

参考文献(2条)
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8. 张莲秀 丁香叶的研究进展[期刊论文]-海峡药学2009,21(6)
9. 李永吉.吕邵娃.王艳宏.安丰堂.刘玠.王艳芝 丁香叶药用研究进展[期刊论文]-中医药信息2003,20(1)
10. 苏筱渲.徐琳.吴娜 丁香挥发油的体外抗氧化作用研究[期刊论文]-河南科技2011(3)

引证文献(5条)
1.于鹤丹.刘欣.王建明 丁香提取物结肠靶向片体外释放及释放机理的研究[期刊论文]-中医药学报 2010(2)
2.王建明.刘欣 丁香提取物结肠定位包衣片在家兔体内药物动力学研究[期刊论文]-中医药信息 2009(5)
3.张蓓.班维固.潘慧莹.许贵军.XU Gui-jun 正交试验法优选丁香叶中原儿茶酸的提取工艺[期刊论文]-中医药学报
2011(1)
4.王梓.李伟.李月茹.刘文丛.郑毅男.张晶 大孔吸附树脂纯化桔梗皂苷的研究[期刊论文]-中草药 2011(9)
5.史丽颖.周旭东.石海峰.王永奇 葫芦茶根中总多酚提取富集工艺研究[期刊论文]-时珍国医国药 2010(7)


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