全 文 ： 由大生产提取工艺与标准汤剂的比较结果可知:
¹ 确定的提取方法提取的提取液中, 各成分的量显著
比标准汤剂中的高。比较两种提取方法的提取条件,
除了提取时间有较大的差异外,其他基本相同,说明这
种差异是由煎煮时间不同造成的。另外,传统煎煮法
中需将大部分溶剂挥发除去至剩下较小体积后滤过,
药渣吸附浓度较高的药液造成的损失。º比较两种提
取方法提取液中相同成分的提取量可知,确定提取条
修回日期: 2009 - 08 - 12
基金项目:陕西省科学技术研究发展计划项目 [ 2006K16 -G 3( 1 ) ]
作者简介:王薇 ( 1972 - ) ,女, 陕西三原人,讲师,博士研究生,研究方
向:中药质量与资源研究。
件提取液各成分与标准汤剂中相应成分的比值分别
为: 5 -O -甲基维斯阿米醇苷: 11120,芍药苷: 11 345,
多糖: 11 194, 浸膏率: 11129。比值相近, 平均为
11 326, RSD为 81 69%。说明确定的提取方法提取液
中各成分之间比例与标准汤剂中各成分之间比例非常
接近,因此可以推论两者的作用性质应无差异。也说
明按确定的提取方法提取是合理的。
参考文献
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大孔吸附树脂富集纯化珠子参总皂苷的工艺研究
王 薇 1, 2, 宋小妹2,康亚国 2,李 峰 1
( 11山东中医药大学, 山东 济南 250355; 21陕西中医学院,陕西 咸阳 712046)
摘 要: 目的:建立大孔吸附树脂富集、纯化珠子参总皂苷的最佳工艺条件。方法: 以人参皂苷 Re为对照, 以总皂苷
含量为指标, 研究了 HPD型大孔树脂吸附和纯化珠子参总皂苷的工艺条件。结果:优化的工艺条件为: 样品溶液的浓度
为 01 13g /m L(生药量 /体积 ); 树脂用量为生药量的 2倍 (质量比 ) ; 纯化先用水洗至 A -萘酚反应呈阴性, 改用 6BV的
60%乙醇洗脱,洗脱速度为 2BV /m in。结论: H PD - 100型非极性大孔树脂对珠子参总皂苷有良好的吸附及纯化性能;本
工艺对珠子参总皂苷的纯化收率高且稳定,纯化后总皂苷含量可达 60%以上。
关键词: HPD型非极性大孔树脂; 珠子参总皂苷; 富集纯化
中图分类号: R28411 文献标识码: A 文章编号: 1000 -1719( 2010) 04 - 0713 - 03
Enr ichment and Purification Process of Total Saponins
from Rhizoma Panac isM ajoris byM acroreticu lar Resin
WANG Wei1, 2, SONG X iao-m ei2, KANG Ya-guo2, LI Feng1
(11Shandong Un ivers ity of TCM, J inan 250355, Shandong, Ch ina; 21Shaanxi University o f TCM , X ianyang 712046, Shanx i, Ch ina )
Abstrac t: Ob jective: To e stablish a proce ssing m e thod for enriching and pu rify ing the to ta l saponins from Rh izom a Panacis
M a jo ris by M acro re ticular Re sin.Methods: W ith g inseng saponin Re as the standard samp le and the to tal sapon ins conten ts as in-
dex, to de term ine the techno log ica l C onditions fo r enrich ing and purify ing the to ta l saponins from Rh izom a Panacis M a jo ris by
HPD M acro re ticu la r Resin. R esults: The op tim um techn ica l operations w ere a s fo llow s: concentration of the samp le w as 0113g /mL
( we ight o f the raw m a te rial /vo lume ); vo lum e of the of the re sin w as 2 tim esw eight of the raw m ate ria ;l pu rified w ith distilled wa-
ter until the A -Naph tho l r. show ed nega tive, and then, w ith 60% e thano l( 6 tim e s the vo lum e o f the re sin), and e lu tion speed a t
2BV /m in. Conclusion: The results show ed tha tHPD - 100 non-po larity m acropo rous resin w as su itab le for absorb ing and pu rify ing
the tota l flavono id o f Rh izom a Panacis M ajoris. And pu rified by HPD - 100 m acropo rous resin, the pu rity can reach as high as
60% .
K ey words: HPD - 100 non-pola rity m acroporous resin; Panac isM a jo ris Sapon ins; The enrichment and purification
珠子参为五加科人参属植物珠子参 (Panax ja-
ponicus C. A. M ey. var. ma jo r( Bu rk. ) C. Y. W u e tK. M.
Feng或羽叶三七 Panax japonicus C. A. M ey. var. bipin-
natifidus( Seem ) C. Y. Wu etK. M. Feng的干燥根茎 [ 1],
另外五加科植物秀丽假人参 ( Panax p seudo - ginseng
W al.l var. elegan tior ( Burk ill)Hoo et Tseng )的根茎在有
些地方也作珠子参使用。珠子参始载于 5本草从
新6 [2 ],名珠儿参。赵学敏5本草纲目拾遗6 [3]谓: /按
珠参本非参类,前未闻有此, 近年始行, 然南中用之绝
少,或云来自粤西, 是三七子, 又云草根0。近代研究
表明,珠子参中化学成分主要含皂苷类成分 [4 - 7], 主要
有竹节参苷Õ、Ô 、Ô a, 人参苷 - Rd,三七苷 - R2、珠
子参苷 R1和 R2等。药理研究表明, 珠子参总皂苷具
有扩血管、降血压、中枢抑制、抗炎、增强免疫、抗脑缺
#713# 辽宁中医杂志 2010年第 37卷第 4期
DOI：10.13192/j.ljtcm.2010.04.142.wangw.067
血、促进骨髓造血、保肝、抗肿瘤等作用 [8 - 11]。
大孔吸附树脂是一类新型非离子型具有大孔结构
的高分子化合物,具有吸附和分子筛的双重作用。它
用于皂苷的纯化,能除去水溶性色素、多糖和无机盐等
水溶性杂质 [12 ]。本实验旨在通过 HPD型大孔树脂富
集、纯化珠子参总皂苷工艺条件与参数的研究,建立富
集、纯化珠子参总皂苷的最佳工艺条件。
1 仪器与试药
11 1 仪器
UV - 1102型紫外 -可见分光光度计 (上海天美
科学仪器有限公司 ), 萨多利斯 GB204 -电子天平 (瑞
典 ) , RE - 52旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器厂 ) , SB
- 3200D超声波清洗机 (上海新芝生物技术研究所 )。
11 2 试药
珠子参药材 (购于陕西眉县, 经陕西中医学院生
药教研室王继涛副教授鉴定为珠子参 Panax japonicus
C. A. M ey. var. ma jo r( Burk. ) C. Y. W u e tK. M. Feng的
根茎 ); 人参皂苷 Re购于中国药品生物制品检定所
(批号: 754 - 200115) ;大孔吸附树脂 (HPD型, 河北沧
州宝恩化工有限公司 ) ;试剂均为分析纯。
2 方法与结果
21 1 含量测定方法的建立 [13 ]
21 11 1 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷 Re
对照品 61 5mg于 25mL量瓶。以甲醇溶解定容, 配制
成 01 26mg /mL的人参皂苷 Re甲醇溶液,作为对照品
溶液。
21 11 2 供试液的制备 取珠子参药材粉末约 1g, 精
密称量,用乙醚 60mL置索氏提取器中回流 2h,取出滤
纸筒, 晾干, 再置索氏提取器中, 加甲醇 60mL,连续回
流至提取液无色, 浓缩至干, 残渣加水 30mL使溶解,
用水饱和的正丁醇振摇提取 5次 ( 20、20、10、10、
10mL) ,合并正丁醇液, 用正丁醇饱和的水洗涤 2次,
每次 20mL,弃去水液, 正丁醇液减压回收,蒸干, 用甲
醇溶解,过滤并定容至 100mL,作为供试品溶液。
21 11 3 标准曲线的制备 精密吸取人参皂苷 Re对
照品溶液 01 2、01 4、016、01 8、11 0、112mL分别于 10 mL
具塞磨口试管中,挥干,精密加入 5%香草醛 -冰醋酸
溶液 012mL和高氯酸 018mL, 摇匀, 60e 水浴加热
15m in,流水冷却 3m in,加入冰醋酸 5mL,摇匀,随行试
剂做空白,于 550nm处比色测定吸收值 ( Abs) , 以人参
皂苷 Re量为横坐标 ( X ) , 吸收值 ( Abs) , 为纵坐标
( Y)绘制标准曲线,结果人参皂苷 Re在 52~ 312Lg范
围内呈良好线性关系, 得回归方程 Y = 010272 +
01 0037X, r= 01 9994。结果见图 1。
21 11 4 稳定性实验 精密移取对照品溶液 01 6mL, 按
21 11 3方法隔一定时间测定一次吸收值, 结果见表 1。
表 1 稳定性实验结果
时间 ( h) 0 0. 5 1
吸收值 0. 622 0. 635 0. 502
RSD (% ) 1. 2
结果表明,本方法在 1h内稳定性良好。
21 2 珠子参总皂苷的含量测定方法
移取一定量珠子参总皂苷样品溶液于具塞试管
中,挥干,精密加入 5%香草醛 -冰醋酸溶液 01 2mL和
高氯酸 01 8mL,摇匀, 60e 水浴加热 15m in,冷却 3m in,
加入冰醋酸 5mL, 摇匀, 随行试剂做空白, 用 UV1102
紫外光度计于波长 544nm处测定吸收值 ( Abs)。将所
得吸收度值代入回归方程计算样品中总皂苷含量。
21 3 样品溶液的制备 [13 ]
称取珠子参粗粉 60g, 以 6倍量 50%乙醇提取 2
次,每次 2h。提取液过滤、减压回收乙醇, 浓缩至无醇
味,以水稀释至 450mL作为供试液,备用。
21 4 珠子参总皂苷纯化工艺的优选
21 41 1 树脂预处理 将层析柱清洗干净, 加入 95%
乙醇,将浸泡好的树脂投入柱中,用 95%乙醇以 2BV /
h的流速通过树脂层,直至流出液 1mL加 4mL蒸馏水
不呈白色混浊为止, 然后用蒸馏水以同样流速洗至无
醇味。备用。
21 41 2 不同吸附树脂对珠子参总皂苷的静态吸附量
实验 精密吸取样品溶液 20mL( 5份 ) ,分别置 100mL
锥形瓶中, 称取已处理好的树脂 ( HPD - 100、HPD -
100A、HPD - 300、HPD - 400、HPD - 400A )各 2g,将树
脂投入其中,摇匀,静置 24h, 使其充分吸附, 精密吸取
上清液 1mL,置 10mL量瓶中, 水定容至刻度, 准确移
取 01 1mL,按 21 2项下方法测定吸收值, 并计算总皂
苷,平行 3次,结果见表 2。
表 2 不同吸附树脂对珠子参总皂苷的静态吸附量实验结果 ( n= 3)
树脂类型 HPD -100 HPD -100A HPD -300 HPD -400 HPD -400A
吸附前总皂苷量 ( mg, €x) 455. 84 455. 84 455. 84 455. 84 455. 84
吸附后总皂苷量 ( mg, €x) 279. 69 347. 15 325. 21 340. 73 350. 89
皂苷饱和吸附量 ( mg /g) 88. 08 54. 35 65. 32 57. 56 52. 48
注:饱和吸附量 = (原液总皂苷量 -吸附后总皂苷量 ) /树脂重量 ( mg /g)
21 41 3 不同型号树脂对珠子参总皂苷静态洗脱性能
考察实验 将 21 41 2项已吸附饱和的树脂滤出, 于滤
纸上吸干样液, 置锥形瓶中, 精密加入 60% 乙醇
30mL,每 10m in振摇 30s, 持续 2h, 静置后, 精密吸取
1mL, 置 10mL 量瓶中, 水定容至刻度, 精密吸取
01 5mL,按 21 2项下方法测定吸收值并计算总皂苷, 平
行 3次,结果见表 3。
表 3 不同吸附树脂对珠子参总皂苷的静态洗脱量实验结果 ( n= 3)
树脂类型 HPD -100 HPD -100 HPD -300 HPD -400 HPD - 400 A
吸附皂苷量 ( mg) 176. 15 108. 69 130. 63 115. 11 104. 95
洗脱皂苷量 ( mg, €x) 160. 06 77. 17 106. 276 91. 68 76. 27
洗脱率 (% ) 90. 9 71 81. 3 79. 7 72. 7
注:洗脱率 =洗脱皂苷量 /吸附皂苷量 @ 100%
以总皂苷含量为指标, 最后确定选择大孔吸附树
脂的型号为 HPD - 100。
21 41 4 泄漏曲线的绘制 称取处理过的 HPD - 100
大孔树脂 10g, 湿法装柱, 用水冲洗至无醇味, 取供试
液上柱,以 20mL为 1份, 薄层检测流出液, 直至有大
量泄漏为止,每份流出液定容至 400mL,从中精密移取
01 3mL,按 211项下方法测定吸收值, 并计算总皂苷,
结果见表 4。以皂苷泄露量对上样量的份数作图, 绘
#714# 辽宁中医杂志 2010年第 37卷第 4期
制泄露曲线,见图 2。
表 4 不同上样量中总皂苷泄漏量
上样量的份数 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
皂苷泄漏量 (m g) - - 10 31 43 55 79 111 247 414 448 450
从图 2中可以看出,从第 8份开始,珠子参皂苷有
大量泄漏。此时上样量折合原药材约 211 33g, 因此药
材B树脂以 2B1较为合适。
21 41 5 洗脱剂的选择 称取处理过的 HPD - 100大
孔树脂 20g, 湿法装柱, 用水冲洗至无醇味, 精密吸取
供试液 160mL上柱,控制流速为 11 5mL /m in。然后分
别以水、10% 乙醇、20%乙醇、40% 乙醇、60% 乙醇、
70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇各 50mL洗脱, 检测洗
脱液,结果见表 5,图 3。
表 5 不同浓度乙醇洗脱结果
洗脱液 水 10% 20% 40% 60% 70% 80% 90%
洗脱皂苷量 ( mg ) 16 54. 1 282. 58 498. 67 781. 24 43. 2 41. 3 15
皂苷洗脱率 (% ) 1 3. 1 17 30 47 2. 5 2. 5 0. 9
图 1 珠子参总皂苷标准曲线图 图 2 珠子参总皂苷的泄漏曲线图 图 3 不同浓度乙醇洗脱结果
结果表明,不同比例醇水对皂苷的洗脱能力不同,
60%乙醇对珠子参皂苷的洗脱能力最强,确定最佳洗
脱剂为 60%乙醇。
21 41 6 洗脱剂用量的选择 称取处理过的 HPD -
100大孔树脂 20g,湿法装柱,用水冲洗至无醇味,精密
量取供试液 160mL上柱, 控制流速为 11 5mL /m in。用
水洗至流出液近无色, 用 60%乙醇洗脱, 每份 50mL,
浓缩定容至 50mL,移取 01 01mL, 按 21 2项下方法测定
吸收度,计算总皂苷量。结果见表 6。
表 6 洗脱剂用量选择结果
流份 1 2 3 4 5 6
总皂苷量 (m g) 699. 79 470. 41 317. 48 139. 63 34. 91 -
结果表明, 250mL 60%乙醇的即可将皂苷洗脱完
全,因此,确定洗脱乙醇的用量 250mL。
3 讨 论
实验确定了珠子参总皂苷的最佳工艺为: 生药量
为树脂用量的 2倍 (质量比 ) ; 纯化先用水洗至近无
色,改用 6BV的 60%乙醇洗脱,洗脱速度为 2BV /m in。
珠子参所含化学成分复杂, 除皂苷外, 还含有多
糖、氨基酸、糖蛋白和多种微量元素等, 而其主要成分
皂苷含量约为 12%, 多糖的含量约为 10%, 所以珠子
参总皂苷的富集、纯化存在一定的难度。本实验尝试
了采用大孔树脂吸附法,纯化前珠子参总皂苷含量约
为 20%,用 HPD - 100型大孔树脂纯化后, 珠子参总
皂苷含量可达 60%以上,且洗脱率达 90%以上。从结
果分析, HPD - 100型大孔树脂可用于珠子参总皂苷
的分离、富集与纯化。
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5中医杂志 6英文版收入美科学引文索引 ( SC I -E )
由中华中医药学会和中国中医科学院共同主办的
5 Journa l of Ch inese T raditiona lM edic ine6 ( 5中医杂志 6英
文版 )已通过美国汤姆森科技信息集团科学信息研究所
( Thom son ISI)的严格评估, 今年起被列为美国 5科学引文
索引 (扩展库 ) 6 ( SC I - E )来源期刊, 成为继 5Ch inese
Journa l o f Integ ra tiveM edicine6 ( 5中国结合医学杂志6 )之
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5中医杂志6英文版创刊于 1981年, 为当时我国唯一
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#715# 辽宁中医杂志 2010年第 37卷第 4期