全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月·1849·
热点问题。
本研究采用单次ipST2建立实验性糖尿病大
鼠模型，造模后大鼠UAL排泄率明显增高，肾小球
体积明显增大，肾脏病理改变明显，肾小球肥大，肾
小殊基底膜增厚，系膜区增宽，系膜基质增生，肾小
管上皮细胞肥大，空泡变性，管腔变窄，具有典型的
DN表现[6]。给予玉竹乙醇提取物和三氯甲烷分离
部位治疗后UAL排泄率降低，病理改变程度明显
减轻，肾小球肥大、基底膜增厚，系膜区增宽，系膜基
质增生等一系列病变均有不同程度改善，表明其对
糖尿病大鼠肾脏具有保护作用。
已有大量证据表明，持续高血糖引起机体多种
蛋白质非酶糖基化和由此形成的AGEs在DN的
发病机制中起着重要作用。DN时生成的大量
AGEs使得胶原合成增加、降解减慢，最终导致肾小
球基底膜增厚和系膜基质增加，破坏肾脏正常滤过
屏障和细胞外基质的结构。AGEs可与肾脏的血管
内皮细胞、系膜细胞、肾小管上皮细胞上AGEs受
体结合，产生和分泌大量的细胞因子、生长因子，氧
化反应增强产生大量的自由基，加速DN的发生和
发展。GHb是血红蛋白A组分某些特殊分子部位，
是与葡萄糖结合后经过缓慢而不可逆的非酶糖基化
反应形成的。玉竹乙醇提取物和三氯甲烷分离部位
降低糖尿病大鼠血中GHb水平，抑制肾皮质AGEs
形成，提示对糖尿病大鼠肾脏保护作用机制可能与
抑制AGEs形成有关，三氯甲烷分离部位为保护作
用的有效部位，此推测有待进一步证实，同时三氯甲
烷分离部位的有效成分有待进一步研究。
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火棘果实提取物对拘束应激负荷引起小鼠肝损伤的保护作用
续洁琨1’3，姚新生1’，郑洁静2，戴毅1，栗原博扣
(1．沈阳药科大学中药学院，辽宁沈阳110016；2．暨南大学药学院，广东广州510632；
3．北京中医药大学基础医学院，北京100029)
摘要：目的研究火棘果实提取物对拘束应激负荷下活性氧引起小鼠肝损伤的保护作用。方法采用拘束负荷
方法造成小鼠应激性肝损伤模型。赖氏法测定小鼠血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性，TBARS法测定血浆及
肝组织匀浆中的丙二醛(MDA)水平，ORAC法测定血浆抗氧化能力指数，HPLC法测定血浆及肝组织匀浆中维
生素C(VC)水平，以及ORAC方法测定火棘果实提取物和芦丁、金丝桃苷的体外抗氧化活性。结果与拘束模型
组相比。火棘果实提取物可以有效降低应激负荷小鼠血浆ALT活力和血浆、肝组织匀浆中MDA水平，并显著提
高血浆和肝组织匀浆的抗氧化能力指数和VC水平。火棘果实提取物及其活性成分芦丁和金丝褴苷俸外显示出较
强的抗氧化能力。结论火棘果实提取物对拘束应激负荷下活性氧引起的小鼠肝损伤具有一定的保护作用，其作
用机制可能来自于清除自由基和抑制脂质过氧化过程。
关键词：火棘；拘束应激；活性氧自由基；肝损伤
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)12～1849一05
收稿日期：2007—03—04
作者简介：续洁琨(1979一)．女，河北人，博士，主要从事天然产物化学成分及药理活性的研究，现工作于北京中医药大学基础医学院。
Tel：(010)64286990E—mail：jiekun一625@yahoo．com．cn
*通讯作者姚新生栗原博Tel：(020)33033306Fax：(020)85567849E—mail：HiroshiKurihara@】63．tom
万方数据
·1850· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月
ProtectionofPyracanthafortuneanafruitextractOiliverinjury
inmiceloadedwithrestraintstress
XUJie—kunl“，YAOXin—shen91”，ZHENGJie—jin92，DAIYil，HiroshiKurihara2
(1．SchoolofChineseMateriaMedica，ShenyangPharmaceuticalUniversity，Shenyang110016，China；
2．CollegeofPharmacy，JinanUn versity，Guangzhou510632，China；3．SchoolofBasicMedical
Sciences，BeijingUn versityofTraditionalChineseMedicine，Beijing100029，China)
Keywords：Pyracanthafortuneana(Maxim．)L．；restraintstress；freeradical；1iverinjury
在应激负荷引起肝损伤的过程中，活性氧自由
基的作用被认为是主要的发病机制之一[1]。肝脏在
应激负荷状态下因氧自由基大量产生和蓄积而发生
脂质过氧化，进而影响细胞膜功能，引起肝脏器质性
及功能性病变。同时，活性氧自由基和过氧化损伤也
是癌症和许多其他生活习惯病的主要诱发因素。因
此，一些具有清除自由基和抗氧化作用的物质能够
通过预防和减少过氧化损害减缓机体应激反应，保
护内脏器官机能，防止应激性肝损伤发生和发展。
蔷薇科苹果亚科火棘属植物火棘Pyracantha
fortuneana(Maxim．)L。广泛分布于我国东南、西
南和西北各省，资源丰富。火棘中富含黄酮类等天然
抗氧化成分，研究表明火棘具有一定的抗氧化、清除
自由基作用[2]。本研究从抗应激角度出发，以束缚制
动作为应激原，复制拘束应激负荷小鼠模型；考察火
棘果实提取物对拘束应激负荷小鼠血浆丙氨酸氨基
转移酶(ALT)的改善作用，以及对血浆抗氧化能
力指数，血浆和肝脏中维生素C(VC)、丙二醛
(MDA)水平的影响，并结合火棘果实提取物及其
中主要黄酮类成分芦丁和金丝桃苷的体外抗氧化活
性，评价火棘果实预防和改善活性氧引起的应激性
肝损伤的作用。
1材料与方法
1．1 火棘果实提取物及其所含主要黄酮类化合物
芦丁和金丝桃苷的制备：火棘果实采自陕西秦岭地
区，称取火棘果实干燥粗粉50g，以60％乙醇500
mL浸泡过夜后加热回流提取2h，滤过。滤液经浓
缩冷冻干燥后回收得到火棘果实提取物10．8g，收
率为21．6％。芦丁及金丝桃苷为本实验室通过提
取、萃取、硅胶柱色谱等手段分离纯化得到，HPLC
测定质量分数均大于98％。以芦丁作为对照品，紫
外分光光度法测定火棘果实提取物中含有黄酮类成
分10。9％，HPLC定量分析其中芦丁、金丝桃苷和
异槲皮素在火棘果实提取物中的质量分数分别为
0．76％、0．30％、0．45％。
1．2试剂及仪器：荧光剂Disodiumfluorescein、自
由基产生剂AAPH(2，2-azobis一2一amidinopro—
pane—dihydrochloride)、抗氧化标准物质Trolox(6一
hydro一2，5，7，8-tetramethylehroman一2一earboxylic
acid，一种a一生育酚的水溶性类似物)为日本和光纯
药株式会社产品；VC为Sigma公司产品；ALT、
MDA测定试剂盒和蛋白定量试剂盒购自南京建成
生物工程研究所。乙醚、．偏磷酸、磷酸钾缓冲盐均为
国产分析纯。甲醇为Fischer色谱纯。芬兰雷博
MK3型酶标仪，奥地利Tecan公司Genios型多功
能荧光分析仪，HPl050高效液相色谱仪。
1．3实验动物分组给药及模型制备：清洁级昆明种
小鼠，7周龄，18～22g，雄性，购自广东省医学实验
动物中心[合格证号SCXK(粤)2003～2002]。饲养
一周后进行实验。实验动物随机分为对照组、模型
组、火棘果实提取物500、250、125mg／kg组，每组7
只小鼠。给药方法为应激前连续3dig给药，每天1
次，第4天给药30min后进行拘束应激实验。
小鼠拘束装置参考文献方法[3]，使用改造为通
风良好的50mL尖底聚丙烯塑料离心管。给予一次
性拘束应激12h。拘束期间小鼠不能进食饮水，与
实验组同时间设置不拘束的禁食禁水对照组。实验
小鼠拘束12h后，乙醚麻醉，心脏采血，立即置于肝
素处理过的离心管中，5000r／min离心5rain分离
血浆。取血浆100肚L加入100p．L1 ％偏磷酸混
匀，12000r／min离心15rain后，经0．45pm微孔
滤膜滤过用于测定血浆中VC的量。取肝组织样品，
以生理盐水制成5％匀浆，5000r／min离心5min
后，取上清液用于测定肝脏中MDA的量；以5％
偏磷酸制成10％肝组织匀浆，12000r／rain离心
15min后，经0．45／xm微孔滤膜滤过用于测定肝脏
组织中VC水平。
1．4 ALT活性测定：应激小‘鼠血浆ALT活性通
过赖氏法检测试剂盒测定。
1．5 VC定量测定：HPLC法测定，使用
COSMOSILRP—C18色谱柱(4．6mm×150mm)，流
动相为0．01mol／L磷酸二氢钾缓冲液(pH3．o)一
甲醇(99：1)，体积流量1．0mL／min，紫外检测波
长245r m。
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月·1851·
1．6 MDA定量测定：血浆及组织中MDA的量使
用MDA检测试剂盒测定口]。组织中的蛋白量用考
马斯亮蓝法蛋白定量试剂盒进行检测。
1．7抗氧化能力指数测定：本实验采用的测定方法
参照Prior等[43方法并加以改进。实验96孔板每个
微孔中加入不同浓度的待测样品溶液20pL，再加
入75mmol／L磷酸钾缓冲液(pH7．4)20弘L和
AAPH140弘L(终浓度12．8mmol／L)，最后加入
disodiumfl orescein20肛L(终浓度63nmol／L)启
动反应，迅速将酶标板置于荧光酶标仪(预置温度
37℃)中开始测定。采用动力学方式，每2分钟测定
一个点，至荧光强度衰减为零为止。
体外抗氧化能力指数测定是将火棘提取物以
50％甲醇一水溶解，芦丁和金丝桃苷以甲醇溶解，均
以75mmol／L磷酸盐缓冲液(pH7．4)稀释至适当
浓度后进行测定。测定用disodiumfl orescein和
AAPH均以相同磷酸钾缓冲液溶解配制。
1．8统计学处理：数据以z±5表示，采用t检验进
行统计学分析。
2结果
2．1 对拘束应激负荷小鼠血浆中ALT活性的影
响：结果见图1。与对照组相比，拘束应激造成小鼠
血浆ALT活性显著升高。火棘果实提取物各剂量
组均能显著降低应激负荷小鼠血浆的ALT活性，
其中高剂量(P80
— 60
J
趔 40
恤
《
20
O
A B C D E
A一对照组 B一模型组 C～E一火棘果实提取物(500、250、】25
mg／kg)组与模型组比较：’P<0．05一P<0．01
A—controlgroupB-modelgroupC—E—P．fortuneana
fruitextract(500，250，and1 mg／kg)groups
。P<0．05’。P<0．01wmodelgroup
图1火麓果实提取物对拘束应激负荷小鼠血浆ALT
活力的影响Q土S，n一7)
Fig．1EffectofP．fortuneanafruitextract
onALTactivityinplasmaofmiceloaded
withrestraintstress(工士S，n一7)
显低于应激模型组，并显示一定的量效关系。
2．2对拘束应激负荷小鼠血浆和肝脏VC水平的
影响：结果见图2。与模型组相比，不同剂量火棘果
实提取物均可提高小鼠血浆VC水平，其中高剂量
组具有统计学意义(尸出一定的效果。火棘果实提取物对应激负荷小鼠肝
脏中VC的保护作用更为明显。各剂量组与应激模
型组相比差异均具有显著性(P间存在一定的量效关系。
12
11
f 10
冒
} 9
∑
宝8
7
6
400
350
f 300
印
竺250
∑
o
>200
】50
100
A B C D E
A一对照组＆模型组C～E一火棘果实提取物(500、250、125
mg／kg)组与模型组比较：。PA—controlgroupB—modelgroupC—E—P．fo,-Cuneana
fruitextract(500，250，and1 5mg／kg)groups
。P<0．05’。P图2火棘果实提取物对拘束应激负荷小鼠血浆和肝脏中
VC水平的影响“±s，辟一7)
Fig，2EffectofP．fortuneanafruitextractonVitamin
Clevelsinplasmaandliver．ofmiceloaded
withrestraintstress(；±s，n=7)
2．3对拘束应激负荷小鼠血浆和肝脏中MDA水
平的影响：结果见图3。火棘果实提取物显著降低应
激负荷引起的血浆和肝脏中MDA水平的升高，并
存在一定的量效关系。其中高、中剂量组与模型组相
比对血浆MDA水平具有极显著差异(P 万方数据
·1852· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月
对于肝组织匀浆中的MDA水平，高剂量组与应激
模型组相比在统计学上具有显著改善作用(P<
0．05)，中、低剂量组虽有降低效果但不具有统计学
意义。
1．2
1 0
倒O8
蓑06
‘葭0．4
翼0．2
0
2．4对拘束应激负荷小鼠血浆抗氧化能力指数的
影响：结果见图4。火棘果实提取物对于应激负荷引
起的血浆抗氧化能力指数的下降有明显的减缓作
用。与应激模型组相比，高剂量组显示出显著性差异
(P2．5火棘果实提取物及其主要黄酮类成分芦丁和
金丝桃苷的体外抗氧化能力指数：结果见图5。火棘
果实提取物及其主要黄酮类成分芦丁和金丝桃在体
外均能明显延缓荧光物质被活性氧自由基淬灭的速
度。其抗氧化作用与VC类似，且具有明显的量效
关系。
A一对照组B一模型组C～E一火棘果实提取物(500、
250、125mg／kg)组与模型组比较：’P<0．05
A—controlgroupB-modelgroupC～E—P．fortuneana
fruitextract(500，250，and1 mg／kg)groups
’P<0．05usmodelgroup
图4火棘果实提取物对拘束应激负荷小鼠血浆抗氧化
能力指数的影响@士s，靠一7)
Fig．4EffectofP．fortuneanafruitextracton
plasmaantioxidantcapacityinmiceloaded
withrestraintstress(；土s．万一7)
0 20 40 60 801001200 20 40 60 801001200 20 40 60 801001200 20 4060 80100120
t，rain
图5火棘果实提取物及其主要黄酮类成分芦丁和金丝桃苷的体外抗氧化能力指数(；士s，栉一3)
Fig．5AntioxidantcapacityofP．fortuneanafruitextract，rutin，andhyperosideinvitro(工士s，一一3)
3讨论
小鼠拘束12h后血浆ALT水平显著升高，应
激负荷引起急性肝损伤发生。近年来的研究证明应
激性肝损伤发病过程中活性氧自由基具有关键性作
用‘¨。本实验也证明拘束应激负荷小鼠的血浆ALT
活性增高的同时，血浆及肝组织匀浆中脂质过氧化
产物MDA的量显著增高，而机体内VC水平显著
下降，说明拘束负荷使小鼠机体处于一种氧化应激
状态。肝脏是机体中最主要的代谢器官，容易受各种
应激刺激的影响。肝细胞膜在受损伤的同时产生大
6
5
4
3
2
l
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—I_1III二。量一＼《臼互
∞
∞
∞
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0
8
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蒜靼R搓甚薜辎
加
∞
∞
∞
∞
加
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第12期2007年12月·1853·
量新的活性氧基团，促发脂质过氧化的链式反应，损
伤肝脏中的各种细胞，是肝损伤的主要作用机制之
一。而且，脂质过氧化的最终产物MDA具有很强的
细胞毒性，能够干扰正常的细胞周期和活性蛋白的
表达‘6‘。
血中ALT水平是衡量肝损伤程度的临床指
标。实验表明火棘果实提取物能够显著降低拘束应
激所致小鼠血浆ALT水平的升高，说明其能有效
减缓拘束负荷引起的肝损伤作用。体内抗氧化能力
实验证明，火棘果实提取物能够提高拘束负荷小鼠
血浆抗氧化能力指数。同时显著降低血浆及肝脏中
MDA水平，减少机体脂质过氧化损伤。相反，对血
浆和肝组织匀浆中的VC水平则有明显的提高作
用。火棘果实提取物对VC水平的影响说明，其作为
外源性抗氧化剂对机体内的抗氧化物起到保护作
用，减少机体过氧化损伤程度。
火棘果实中富含黄酮类成分，其中含芦丁和金
丝桃苷的量较大。对火棘果实提取物以及芦丁和金
丝桃苷的体外抗氧化能力测定结果也说明，三者均
能明显延缓荧光物质被活性氧自由基淬灭的速度，
表现出与VC相类似的抗氧化效果。本实验结果证
明火棘通过自身清除自由基，抗氧化的作用，有效防
止应激状态下活性氧引起的过氧化损伤，从而改善
了应激性肝损伤的发生。
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羟基红花黄色素A对实验性心肌梗死大鼠的保护作用及机制
王天，傅风华，韩冰，朱梅，李桂生，刘 珂
(烟台大学药学院药理教研室，山东烟台 264005)
摘要：目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对大鼠缺血心肌的保护作用及其作用机制。方法通过结扎大鼠
左冠状动脉前降支造成急性心肌缺血模型，观察HSYA对大鼠心肌梗死面积(MIS)，血清中肌酸激酶同工酶
(CK—MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、6-酮一前列腺素F。。(6一Keto—PGFl。)、血栓烷
B：(TXBz)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的影响。结果与模型组比较，HSYA明显减小急性心肌梗死大鼠MIS，显著
提高血清NOS活性，明显增加N0及6-Keto—PGF，。的量，显著降低血清CK—MB、LDH、TXB：及AngⅡ水平。结论
HSYA对急性缺血心肌具有保护作用，其机制与HSYA调节NO、6-Keto—PGF。。、TXB。和AngI的水平，从而增加
心肌供血供氧，减轻心肌细胞损伤、凋亡有关。
关键词：羟基红花黄色素A(HSYA)；心肌梗死；血栓烷B：(TXB2)；血管紧张素Ⅱ(AngI)
中图分类号：R286．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)12一1853—04
ProtectionandmechanismsofhydroxysaffloryellowA nexperimental
myocardialinfarctioninrats
WANGTian，FUFeng—hua，HANBing，ZHUMei，LIGui～sheng，LIUKe
(DepartmentofPharmacology，SchoolofPharmacy，YantaiUniversity，Yantai264005，China)
Keywords：hydroxysaffloryellowA(HSYA)；myocardialinfarction；TXBz；AngⅡ
收稿日期：2007—04—20
基金项目：烟台大学青年基金资助项目(YX05210)
作者简介：王天(1974一)，男，内蒙古人，讲师，硕士，主要从事心血管药理学研究。
Tel：(0535)6706030—8022E—mail：bluewt@sohu．eom
万方数据
火棘果实提取物对拘束应激负荷引起小鼠肝损伤的保护作用
作者： 续洁琨， 姚新生， 郑洁静， 戴毅， 栗原博， XU Jie-kun， YAO Xin-sheng， ZHENG
Jie-jing， DAI Yi， Hiroshi Kurihara
作者单位： 续洁琨,XU Jie-kun(沈阳药科大学中药学院,辽宁,沈阳,110016;北京中医药大学基础医学院
,北京,100029)， 姚新生,YAO Xin-sheng(沈阳药科大学中药学院,辽宁,沈阳,110016;暨南
大学药学院,广东,广州,510632)， 郑洁静,栗原博,ZHENG Jie-jing,Hiroshi Kurihara(暨
南大学药学院,广东,广州,510632)， 戴毅,DAI Yi(沈阳药科大学中药学院,辽宁,沈阳
,110016)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(12)
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引证文献(5条)
1.王燕.陶钧 复合维生素对D-半乳糖小鼠衰老模型的抗衰老作用[期刊论文]-食品与机械 2010(2)
2.田成.易汪雪.罗祖友 火棘果酱的研制[期刊论文]-食品研究与开发 2009(9)
3.郝庆红.陈冠华.冯雅琪.郭云霞 和厚朴酚延缓小鼠衰老作用研究[期刊论文]-河北农业大学学报 2008(6)
4.唐克华.寻勇 火棘籽油超临界CO2提取及脂肪酸组分测定[期刊论文]-食品科学 2010(24)
5.沈洪.张蓓 急性肝损伤研究进展[期刊论文]-现代中西医结合杂志 2009(18)


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