全 文 ：啶, 加入 015 mL 乙酸酐, 室温搅拌 24 h。蒸干溶剂,
硅胶柱纯化, 环己烷2醋酸乙酯 (6∶1) 洗脱, 得 35
m g (得率 92% ) 无色油状物Í , 经波谱分析, 确定为
化合物É 的乙酰基衍生物。分子式C 25H 38O 4, 相对分
子质量 402。 1H 2NM R (400 M H z, CDC l3) : 6184 (d,
2H , J = 2112 H z) , 6179 ( t, 2H , J = 2108 H z) , 5139
(m , 2H ) , 2164 ( t, 2H , J = 7159 H z) , 2129 ( s, 6H ) ,
2106 (m , 4H ) , 1165 (m , 2H ) , 1135 (m , 16H ) , 0193
(t, 3H , J = 7109 H z)。13C2NM R (100 M H z, CDC l3) :
168188, 150173, 145121, 129180, 129165, 118174,
112149, 35153, 31166, 30174, 29160, 29120, 29107,
29103, 28185, 27108, 27104, 22153, 20193, 13198。
M C (C I,N H 3)m öz : 420 (M + N H +4 , 100% )。
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枳实挥发油的化学成分分析及其抗菌活性的研究
廖凤霞1, 2, 孙冠芸3, 杨致邦4, 夏之宁1Ξ
(11 重庆大学 化学化工学院, 重庆　400044; 　21 太极集团有限公司, 重庆　400010; 　
31 重庆中药研究院, 重庆　400065; 　41 重庆医科大学, 重庆　400016)
　　枳实为芸香科乔木酸橙C itrus au ran tium L 1,
或枸橘 (枳) 与香橼未成熟果实, 主产于四川、福建、
江苏、湖南、浙江、江西等地。其味苦、辛、酸, 微寒; 归
脾、胃、大肠经。枳实具有破气消积和化痰散痞的功
效[1 ]。枳实的挥发油有镇静、镇痛、镇咳、祛痰、抗菌
及中枢抑制作用[2 ]。近年来, 由金黄色葡萄球菌引起
的医院内感染越来越多, 临床分离出的这种菌株显
示对多种抗生素耐药。金黄色葡萄球菌正成为全球
范围内多重耐药的病原菌, 危害极大。枳实挥发油具
有抗菌作用, 为从中发现对耐药金葡萄球菌有抑制
作用的新的活性成分, 本实验采用水蒸汽蒸馏提取
枳实挥发油, 利用 GC2M S 对获得的挥发油的化学
成分进行了分析鉴定, 同时研究了枳实挥发油对耐
药金葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用。
1　枳实挥发油的提取
枳实购于重庆中药材市场, 经太极集团涪陵制
药厂副主任中药师杨修齐鉴定为枳实。按《中华人民
共和国药典》2000 年版 (附录XD ) 中方法提取挥发
油, 得淡黄色油状物。枳实出油率为 0164%。
2　仪器分析条件
仪器为 GC- 17A &GCM S- Q P5050A (日本岛
津公司)。气相色谱条件: 色谱柱为DD 217A 50% 的
苯2聚硅氧烷 (30 m ×015 mm , 0125 Λm )弹性石英毛
细管柱, 柱温 50 ℃ (保持 1 m in) , 以 5 ℃öm in 升温
至 80 ℃, 再以 2 ℃öm in 升温至 200 ℃, 然后保持至
分析完成; 汽化室温度 250 ℃; 载气为高纯度氦气;
柱前压 52143 kPa; 载气流量 115 mL öm in; 进样量 1ΛL ; 分流比 50∶1。质谱条件: 离子源为电喷雾离子
源; 离子源温度为 230 ℃; 电子能量 70 eV ; 质量范
围: 20～ 400 m öz。经谱库检索与保留时间相结合鉴
定各组分峰, 并对色谱峰用面积归一法计算, 求取各
组份的百分含量。
·02· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 1 期 2004 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2003206206
基金项目: 国家自然科学基金 (20175038) ; 教育部高校青年教师奖资助 (人教司[ 2002 ]123)3 通讯作者　　T el: (023) 65106615　Fax: (023) 65106615　E2m ail: zhnx ia@yahoo1com. cn
3　体外抑菌实验
以氨卞青霉素、青霉素、先锋V 和卡那霉素的
标准抗生素药物纸片 (北京天坛药物生物技术开发
公司)作为药物对照品。菌株来源: 药敏金葡萄球菌
来自重庆医科大学微生物室保存的标准菌株
(A TCC26112) ; 耐药金葡萄球菌和大肠杆菌为重庆
医科大学微生物室收集的临床菌株。
将枳实挥发油用聚山梨酯 80 按 1∶4, 1∶8, 1∶
12, 1∶35, 1∶54, 1∶128 的比例稀释, 制成无菌样
品。将各菌株分别培养 18 h, 生理盐水洗下, 按比浊法
配成 105 cfuömL 菌液, 菌液按 1∶10 加入营养琼脂
中倾注平皿, 琼脂厚度约 0125 cm。然后用直径约 7
mm 的打孔器在琼脂上打孔, 孔容积约为 0118 mL。
在孔中加满上述样品, 用标准抗生素药物纸片氨苄青
霉素、青霉素、先锋V 和卡那霉素作对照, 同时用聚
山梨酯 80 作空白对照实验。平皿置 37 ℃培养 24 h
后测量抑菌环, 并确定最低抑菌浓度 (M IC)。
4　结果与讨论
经 GC2M S 联用仪分析鉴定, 枳实挥发油共检
出 19 个峰, 鉴定出 15 个化合物, 占挥发油总量的
93181%。见表 1 和图 1。枳实挥发油成分以萜类化
合物中的单萜为主, 分别是柠檬烯、芳樟醇、异松香
烯等。单萜广泛存在于高等植物中的分泌组织里, 多
数具有较强的香气和生理活性。枳实挥发油中的柠
檬烯有镇咳、祛痰、抗菌的作用; 芳樟醇有防腐抗菌、
抗病毒、镇静的作用[3 ]。挥发油中柠檬烯的含量
41120% 与文献参考值 80% 有较大差异[4 ] , 可能与
产地、采摘时间或储存方式等相关, 这对研究枳实的
指纹图谱有参考价值。柠檬烯含量高低对枳实挥发
油抗菌活性的影响, 以及其他成分在抗菌活性中所
发挥的协同或抗拮作用, 有待进一步研究。
表 1　枳实挥发油的化学成分
Table 1　Con stituen ts of vola tile o il from F rucus
A uran tii Imm a turus
峰号 化合物名称 含量ö%
　　1 Α2水茴香萜 　　0135
2 Α2蒎烯 1152
3 桧烯 1107
4 Β2蒎烯 1110
5 Β2香叶烯 2167
6 Α2松油烯 0168
7 柠檬烯 41120
8 3, 72二甲基, 1, 3, 62辛三烯 0147
9 32异丙基甲苯 0194
10 Χ2松油烯 3195
11 异松香烯 7132
12 芳樟醇 26110
13 42松油醇 0156
14 Α2松油醇 0132
15 1, 3, 32三甲基222乙烯基2环己烯 5156
时间 töm in
图 1　枳实挥发油的 GC-M S 总离子流色谱图
F ig11　Tota l ion ic curren t chromatogram of vola tile o il from F ructus A uran ii Imm a turus by GC-M S
　　体外抑菌实验所得结果见表 2。在大肠杆菌和
金葡菌的菌液浓度为 10- 4 cfuömL 的平皿上, 聚山
梨酯 80 无抑菌环, 说明样品所用溶剂不对实验产生
干扰。氨卞青霉素、先锋V 对金葡菌中药敏菌株的
抑菌环大于耐药菌株, 而青霉素对耐药菌株不出现
抑菌环, 说明临床分离所得的金葡萄球菌对青霉素、
氨卞青霉素、先锋V 具有不同程度的耐药性。枳实
挥发油对药敏菌株与耐药菌株的抑菌环大小相近,
说明对二者的抑菌程度相同, 实验所得的最低抑菌
浓度均为 3213 m gömL。枳实挥发油对大肠杆菌无
抑制作用。由此可知, 枳实挥发油对金葡萄球菌的抗
菌作用机制, 与对照药品Β2内酰胺类抗生素不同。目
前金葡萄球菌仍是细菌性感染的主要病原菌之一,
占临床分离菌的 10%～ 20% [5 ]。这类细菌中的耐药
菌株对多种抗菌药物呈现耐药性, 成为治疗了上的
难题。枳实挥发油对耐药金葡萄球菌有抑制作用, 为
其用于临床治疗耐药金葡萄球菌感染提供了依据。
此外, 对枳实挥发油中各化学组份进行分离, 并追踪
·12·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 1 期 2004 年 1 月
表 2　枳实挥发油的抑菌结果
Table 2　An tibacter ia l activ ities of vola tile o il
from F ructus A uran tii Imm a turus
菌种名称 药　　品 抑菌圈 (d ömm )
大肠杆菌 枳实挥发油 0
卡那霉素 15
金葡萄球菌 枳实挥发油稀释液 (1∶35) 13
标准菌株 氨苄青霉素 30
(A TCC26112) 先锋V 42
青霉素 20
耐药金葡萄 枳实挥发油稀释液 (1∶35) 10
球菌 1 氨苄青霉素 20
先锋V 30
青霉素 0
耐药金葡萄 枳实挥发油稀释液 (1∶35) 11
球菌 2 氨苄青霉素 24
先锋V 34
青霉素 0
其活性成分, 有助于从天然植物中发现新的抗菌活
性成分。
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杂交贝母非生物碱成分的结构研究
阮汉利, 张勇慧, 皮慧芳, 夏　蓉, 潘旭初, 吴继洲Ξ
(华中科技大学同济医学院药学院, 湖北 武汉　430030)
　　杂交贝母是以利川贝母 F ritilla ria lichuanensis
P1L i et1C1P1Yang 为父本, 湖北贝母 F 1hup ehensis
H isiao et K1 C1 H sia 为母本杂交而成, 进行有性繁
殖, 且具结实率高, 所结种子饱满, 发芽率高, 病虫害
少, 成本低等特点。为评价杂交贝母的药用价值, 扩大
贝母资源提供依据, 本实验对杂交贝母化学成分进行
了提取、分离和鉴定, 从其非生物碱部位中分离得到 6
种成分, 经与标准品 TL C 对照比较及光谱分析, 鉴定
为胡萝卜苷 (É ) , en t2kau ran216Β, 142dio l (Ê ) , Β2谷
甾 醇 ( Ë ) , cho lest252en23Β2oxyl hexadecanoate
( Ì ) , 硬脂酸 (Í ) 和软脂酸 (Î ) , 化合物É～ Î 均为
首次从杂交贝母中得到。
1　仪器与材料
熔点用X- 4 型显微熔点测定仪测定, 温度未校
正; 旋光用W ZZ- 1 自动指示旋光仪测定; IR 光谱用
岛津 IR - 460 测定; 1H 2NM R 和 13C2NM R 光谱用
GE- Om ega 600 测定; E I2M S 谱用 JEOL JM S-
DX - 300 质谱仪测定; 薄层色谱用高效硅胶H 板和
柱色谱用硅胶为青岛海洋化工厂生产; 薄层展开剂为
正己烷2醋酸乙酯系统, 显色剂为 5% 茴香醛2硫酸甲
醇溶液。杂交贝母药材由湖北省利川市中药材公司彭
德太同志提供。
2　提取与分离
取杂交贝母药材 317 kg, 乙醇回流提取, 得总
浸膏 85 g。浸膏用 2% HC l 溶液捏溶出生物碱部分,
酸不溶部分用水饱和的醋酸乙酯萃取, 合并醋酸乙
酯提取液, 回收醋酸乙酯得浸膏 16 g。以极性递增的
石油醚2醋酸乙酯系统和醋酸乙酯2甲醇系统进行反
复的硅胶柱色谱, 得到É～ Î 等 6 个化合物。
3　结构鉴定
化合物É : 灰白色粉末 (E tOA c) , mp 298 ℃～
301 ℃, 其红外光谱数据与文献报道的 Β2胡萝卜苷
相一致[1 ]。与 Β2胡萝卜苷标准品做 TL C 比较, 二者
R f 值相同, CO 2TL C 分析斑点不分离, 证明É 为 Β2
胡萝卜苷 (dauco stero l)。
化合物Ê : 无色针晶 (E tOA c) , mp 188 ℃～ 189
℃, [Α]D - 3814 (c, 0176, CHC l3)。HR 2M S 测得分子
式C20H 34O 2, 相对分子质量 3061259 7。IR: 3 400,
1 080, 1 040, 3 0002 2 840, 1 4782 1 435, 1 385,
1 365。E I2M S: 分子离子峰M + 306, 主要碎片峰m ö
z : 288 [M - H 2O ]+ , 275 [M - CH 2OH ]+ , 257 [M -
OH - CH 2OH ]+ , 123。Ê 的1H 2NM R及13C2NM R数
·22· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 1 期 2004 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2003204220
基金项目: 湖北省卫生厅资助项目 (11299001)