全 文 ：不受梯度洗脱的影响, 较H PL C2UV 优越。
213　标准曲线和线性范围: 精密吸取上述对照品溶
液 5、10、15、20、25、30 ΛL , 在上述 H PL C2EL SD 色
谱条件下进样, 以峰面积 (Y ) 为纵坐标, 进样量 (X )
为横坐标作标准曲线, 回归方程和线性范围见表 1。
表 1　各组份的回归方程和线性范围
Table 1　Standard curves equation and relevan t
data of g in senosides Rb1, Rc, and Rb3
人参皂苷 回归方程 r 线性范围öΛg
Rb1 Y = 217138 X + 341789 01998 8 1175～ 10150
Rc Y = 871116 X + 251201 01999 1 510～ 3010
Rb3 Y = 134183 X + 211033 01999 7 3175～ 22150
214　精密度试验: 取上述对照品溶液重复进样 6
次, 测得人参皂苷R b1、R c 和R b3 峰面积的R SD 分
别为 0152%、0123%、0116%。
215　稳定性试验: 取上述对照品溶液, 每隔 30 m in
进样, 连续 4 h, 结果 4 h 内人参皂苷R b1、R c 和R b3
的峰面积积分值基本稳定, 峰面积的R SD 分别为
115%、119%、018%。
216 　重现性试验: 取三七叶总皂苷样品 (批号:
20010901) 共 5 份, 制备供试品溶液, 测得人参皂苷
R b1、R c 和 R b3 的质量分数的 R SD 分别为 119%、
218%、212%。
217　加样回收率试验: 取已知含量的三七叶总皂苷
样品 01050 g, 分别添加人参皂苷R b1、R c 和R b3 对
照品溶液 1 mL , 一式 5 份, 按 21112 项下处理并测
定, 结果测得平均回收率分别为 99121%、97132%、
98125% , R SD 分别为 211%、119%、219%。
218　样品测定: 按上述方法对不同批号的三七叶苷
进行了含量测定, 结果见表 2。
3　讨论
表 2　样品含量的测定结果 (n= 3)
Table 2　Results of samples’ determ ination (n= 3)
批　号
人参皂苷ö(m g·g- 1)
Rb1 Rc Rb3 总量
20010901 2518 12816 12718 28212
20010902 3116 13017 14013 30216
20010904 2717 12911 12919 28617
311　在三七叶总皂苷中人参皂苷 R b1、R c 和 R b3
为三萜皂苷成分, 仅在 200 nm 左右有末端吸收, 因
此采用H PL C2UV 进行测定时, 噪音对结果影响较
大, 灵敏度也较低。蒸发光散射检测器为质量型通用
检测器, 其响应值取决被分析物质颗粒的数量和大
小, 能用于检测那些不含发色团的化合物, 即响应不
依赖样品的光学特性, 任何挥发性低于流动相的样
品都能被检测。
312　提取溶剂的选择: 取三七叶总皂苷适量, 分别
用甲醇、75% 乙醇、水饱和正丁醇溶液 3 种提取溶剂
提取, 按前述方法进行测定, 结果表明, 3 种提取溶
剂提取后测得的人参皂苷R b1、R c 和R b3 的含量几
无差别, 说明 3 种提取溶剂都可以选用。由于甲醇提
取后制备的供试品溶液杂质含量少, 干扰小, 处理方
便, 所以选择甲醇作为提取溶剂。
313　超声时间比较试验: 取三七叶总皂苷适量, 按
前供试品溶液制备方法制备, 曾比较超声时间: 10、
20、30、40、50 m in, 发现 10 m in 即可以将三七叶总
皂苷中的有效成分提取完全。
References:
[ 1 ]　Chen D C1 T he M anua l of Chem ica l R ef erence S ubstance on
Ch inese M ed icine1 (中药化学对照品工作手册) [M ]1 Beijing:
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[ 2 ]　D rug S tand ard in Y unnan P rov ince (云南省药品标准) [S ]1
Q öW S 78421985, 1985.
HPLC-EL SD 法测定银杏叶提取物中内酯的含量
单鸣秋, 张　丽, 曹雨诞Ξ
(南京中医药大学, 江苏 南京　210029)
　　银杏叶为银杏科植物银杏G inkg o biloba L 1 的
干燥叶, 味苦涩、性平, 有毒, 归肺经, 是传统的止咳
平喘药。明代李时珍《本草纲目》即有记载。银杏叶
主要含有银杏黄酮及内酯等成分, 具有收敛定喘、止
带缩尿之功效, 主治哮喘痰嗽、带下白浊、小便频数、
遗尿等, 用于肺虚咳喘以及高血压、冠心病心绞痛、
脑血管痉挛等的治疗。银杏叶提取物常用的质量控
制指标是黄酮和银杏内酯[1, 2 ]。因银杏内酯紫外吸收
·6631· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
Ξ 收稿日期: 2004202226
作者简介: 单鸣秋 (1978—) , 男, 江苏南京人, 中药硕士, 从事分析化学教学及药品质量研究。
较弱, 故本实验通过H PL C2EL SD 方法对银杏叶提
取物中内酯类成分进行测定, 以期为银杏叶提取物
的质量控制提供更多的检测手段。
1　仪器与试药
美国W aters 公司 515 型高效液相色谱仪,A ll2
tech 蒸发光散射检测器,M illenn ium 32色谱软件系
统, H 66025T 型超声清洗机 (无锡超声电子设备
厂) , BW T 550 型石英亚沸高纯水提取器 (江苏金坛
高教仪器厂) ,L IBROR A EL —40SM 电子分析天平
(精确到 01000 01 g)甲醇为色谱纯, 水为重蒸水, 四
氢呋喃为分析纯。
　　银杏叶提取物 (广东天之骄药物开发有限公司
提供, 批号: 03031300、03031301、03031315) ; 银杏内
酯A (GA , 批号: 086229903)、银杏内酯 B (GB , 批
号: 086329902 )、银杏内酯 C ( GC, 批号: 08642
9902)、白果内酯 (Bb, 批号: 086529601) 对照品均购
自中国药品生物制品检定所。
2　方法与结果
211　色谱条件[3 ]: 色谱柱: N ucleo sil C 18反相柱 (150
mm ×416 mm , 5 Λm ) ; 流动相: 水2甲醇2四氢呋喃
(75∶20∶10) ; 体积流量: 018 mL öm in; 进样量: 20ΛL ; 蒸发光散射检测器, 漂移管温度: 110 ℃; 载气流
速: 2175 SL PM ; 柱温: 30 ℃。在此条件下 GA、GB、
GC、Bb 与其他组份基本达到基线分离。见图 1。
12银杏内酯C　22白果内酯　32银杏内酯A 　42银杏内酯B
12ginkgo lide C　22b ilobalide　32ginkgo lide A 　42ginkgo lide B
图 1　对照品 (A)和银杏叶提取物 (B)的 HPLC 图谱
F ig1 1　HPLC chromatogram s of reference substances
(A) and G. biloba leaf extract (B)
212　提取条件的选定: 银杏提取物在流动相中溶解
性较好, 故以流动相即水2甲醇2四氢呋喃 (75∶20∶
10)溶解即得。
213　供试品溶液的制备: 取经 60 ℃干燥后的银杏
叶粉末 (过 20 目筛)约 20 m g, 精密称定, 置 5 mL 量
瓶中, 加流动相稀释至刻度, 微孔滤膜 (0145 Λm ) 滤
过, 即得。
214　线性关系考察: 精密称取Bb 对照品 4 m g,
GA、GB、GC 对照品 2 m g, 置 10 mL 量瓶中, 加流动
相溶解并稀释至刻度, 摇匀, 即得混合对照品溶液。
按上述色谱条件分别进样 4、8、12、16、20 ΛL , 各两
次, 记录峰面积, 以峰面积的对数值为 (Y ) 纵坐标,
以 GA、GB、GC、Bb 的质量的对数值为 (X ) 横坐标,
计算回归方程, 结果见表 1。
表 1　线性范围及回归方程
Table 1　L inear ities and regression equation
成　分 标准曲线方程 r 线性范围öΛg
银杏内酯A Y = 11454 9 X + 51588 8 01999 2 0182～ 4110
银杏内酯B Y = 11291 2 X + 51116 0 01999 3 0176～ 3180
银杏内酯C Y = 11579 2 X + 51711 1 01999 9 0177～ 3184
白果内酯　 Y = 11558 2 X + 51659 3 01999 5 1160～ 8102
215　精密度试验: 精密吸取对照品溶液 12 ΛL , 重
复进样 6 次, GA、GB、GC、Bb 的峰面积的R SD 分别
为 2105%、1109%、3105%、1146% (n= 6)。
216　稳定性试验: 取批号为 03031300 的样品制备
供试品溶液, 分别于 0、1、3、5、7、9 h 各测定 1 次, 进
样 20 ΛL , 记录峰面积, 计算, 结果 GA、GB、GC、Bb
的峰面积的 R SD 分别为 2151%、2132%、2179%、
1190% (n= 6)。表明供试品溶液在 9 h 内是稳定的。
217　重现性试验: 取批号为 03031300 的粉末 5 份,
每份 20 m g, 制备供试品溶液。依法测定, 计算各成
分的含量, 结果样品中 GA、GB、GC、Bb 的平均质量
分数分别为 31141、13119、19180、45112 m gög, R SD
分别为 2119%、1158%、2157%、1187% (n= 5)。
218　回收率试验: 取批号为 03031300 的样品粉末
6 份, 每份 10 m g, 精密称定, 置于 5 mL 量瓶中, 分
别精密添加混合对照品溶液 1 mL , 用流动相溶解并
稀释至刻度, 依法测定, 计算回收率。结果 GA、GB、
GC、Bb 的平均回收率分别为 98132%、99179%、
102116%、101150% , R SD 分别为 3111%、2179%、
2135%、2176%。
219　样品的测定: 精密吸取供试品溶液 20 ΛL 进
样, 各两次, 依法测定, 计算样品中 GA、GB、GC、Bb
的含量, 测定结果见表 2。
表 2　银杏叶提取物中内酯的含量测定结果 (n= 3)
Table 2　D eterm ination of lactones in G1 biloba
leaves extract (n= 3)
批　号
银杏内酯Aö(m g·g- 1) 银杏内酯Bö(m g·g- 1) 银杏内酯Cö(m g·g- 1) 白果内酯ö(m g·g- 1)
03031300 32135 13104 19158 45161
03031301 31174 12134 19173 48162
03031315 35163 17134 25128 42124
·7631·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
3　讨论
311　由于银杏中内酯类成分在紫外光区吸收小, 检
测灵敏度低, 因此本实验采用H PL C2EL SD 法进行
测定。但 EL SD 的信号响应不同于紫外检测器, 其
信号与浓度间的关系不是直接成线性, 而是成对数
线性关系, 本实验的结果也证实了该理论。
312　从实验结果可以看出, 同一提取物不同批号之
间银杏内酯类成分的含量有比较大的差别, 说明对
原料必须有更严格的控制, 从药材的采集到原料的
提取, 都需制定严格统一的标准, 以保证质量。
313　EL SD 的使用应注意所用流动相的蒸发残渣
及载气的含水量, 其中四氢呋喃对内酯类成分的分
离起了很好的作用, 但其量的增加会使检测器噪音
增大, 检测灵敏度降低。
314　方法学考察结果显示该方法准确度高、专属性
强、灵敏度及稳定性均较好, 测定方法可靠, 测定结
果能客观反映银杏提取物的内在质量。
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药科大学学报) , 2001, 32 (1) : 342361
毛细管气相色谱法测定枳实及其提取物中有机氯农药残留量
惠玉虎, 王让成Ξ
(西安皓天生物工程技术有限责任公司, 陕西 西安　710075)
　　枳实为芸香科植物酸橙 C itrus au ran tium L 1
的幼果。其中主要含有生物碱、黄酮、挥发油。枳实
及其提取物中的生物碱辛弗林、N 2甲基酪胺等成分
具有强心、升压及对外周血管等多种功能与作用[1 ]。
有机氯农药在我国已禁用多年, 但由于它性质稳定,
在环境中可以存在几年甚至几十年。因此, 测定枳实
及其提取物中的有机氯农药残留量具有十分重要的
意义。本实验对枳实及其提取物中有机氯农药残留
测定方法进行了研究[2, 3 ]。结果表明, 该方法易于操
作、重现性好, 可用于枳实及其提取物中的有机氯农
药残留量测定。
1　材料与仪器
试剂均为分析纯, 水为二次重蒸馏水。Α2BHC、Β2BHC、Χ2BHC、∆2BHC、PP′2DD E、PP′2DDD、O P′2
DD T、PP′2DD T、PCNB (纯度大于 99% ) 由国家标
准物质研究中心提供。枳实为广西、湖南产, 由西安
天诚医药生物工程有限公司崔树玉博士鉴定, 提取
物由西安天诚医药生物工程有限公司生产。
　　GC—14B 带 ECD 电子捕获检测器的气相色谱
仪 (日本岛津) , KQ —250 型超声波清洗器 (江苏昆
山超声仪器公司)。
2　方法与结果
211　色谱条件: 毛细管色谱柱 Supelco PT E25 (30 m ×0125 mm ×0125 mm , 美国 Supelco 公司) ; 汽化室温度: 230 ℃; 检测器温度: 290 ℃; 柱温为程序升温, 初始 100 ℃, 保持 015 m in, 25 ℃öm in 升至 270℃, 保持 5 m in; 进样量: 2 ΛL ; 进样方式为不分流进样; 载气为高纯氮, 体积流量为 2 mL öm in; 尾吹气为高纯氮, 体积流量为 20 mL öm in。在上述色谱条件下, 理论塔板数按 Α2BHC 峰计算不低于 5×105两个相邻色谱峰分离良好。212　对照品储备液的制备: 分别精密称取 Α2BHC、Β2BHC、Χ2BHC、∆2BHC、PP′2DD E、PP′2DDD、O P′2DD T、PP′2DD T、PCNB 对照品适量于 100 mL 量瓶中, 加入少量苯溶解后, 用石油醚配制成质量浓度分别 为 1106、1100、1116、1112、1106、1109、0199、0195、1107 m gömL 的对照品储备液。213　混合对照品溶液的制备: 分别精密量取 Α2BHC、Β2BHC、Χ2BHC、∆2BHC、PP′2DD E、PP′2DDD、O P′2DD T、PP′2DD T、PCNB 对照品储备液适量于100 mL 量瓶中, 加石油醚至刻度, 制成质量浓度分别 为 0179、1149、0186、0183、1158、1162、1148、1142、0180 ΛgömL 的混合对照品溶液。214　标准曲线的绘制: 分别精密量取混合对照品溶液 0110、0115、0120、0150、1100 mL 于 10 mL 量瓶中, 加石油醚至刻度, 进样测定, 进样量 1 ΛL , 分别以
·8631· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
Ξ 收稿日期: 2004203204