全 文 ：DA201 型大孔吸附树脂分离银杏叶提取物中
银杏内酯A、B、C 和白果内酯的研究
何　 1, 何照范1, 张勇民2, P ierre Sinay¨2Ξ
(11 贵州大学生化营养研究所, 贵州 贵阳　550025; 21 巴黎高等师范学院, 法国 巴黎　75231)
　　银杏萜内酯主要包括银杏内酯A、B、C 和白果
内酯。银杏内酯B 是一种很有应用前景的特异性血
小板激活因子 (PA F)受体拮抗剂, 其专一性高, 而银
杏内酯A 也是一种重要的昆虫拒食素, 白果内酯对
老年痴呆症和神经系统疾病具有一定疗效[1 ]。目前,
银杏萜内酯对心脑血管及外周血管疾病的有效疗效
已使他成为药品及保健食品的原料。但目前银杏叶
仍是提取银杏萜内酯化合物的主要工业生产来源。
银杏萜内酯的提取分离方法报道较多。由于银杏叶
中这类化合物含量很低, 且具有特定结构, 因此, 提
取分离步骤烦琐, 费时且得率低。目前, 日本专利及
欧洲报道一般采用有机溶剂多级萃取与硅胶吸附2
洗脱或活性碳吸附2洗脱与醋酸铅沉淀法相结合的
提取方法, 但得率低, 工艺繁锁[1, 2 ]。近几年国内银杏
萜内酯的提取分离也有报道, 主要采用高效液相制
备色谱柱进行分离。
　　本实验以银杏叶提取物为原料, 采用大孔树脂
柱分离, 乙醇水溶液梯度洗脱, 乙醇水重结晶得到萜
内酯 4 种单体, 其纯度达到 95% 以上。并且此工艺
不采用有毒的有机溶剂, 所得产品安全性更高, 更适
用于生产口服液、片剂、针剂及食品等。
1　仪器与试剂
银杏叶提取物 (贵州大学中试基地生产, 批号:
021024, 萜内酯含量> 6% ) , 白果内酯、银杏内酯A、
B、C 对照品 (Sigm a 公司, 纯度> 95% ) , DA 201 型
大孔吸附树脂 (天津农药总厂) , 试剂均为分析纯, 水
为重蒸水。
　　Sh im adzu L C—3A 型高效液相色谱仪, SPD—1
型紫外检测器; 3390A 型色谱数据处理机 (美国
H ew let t Packard ) , PB—85 型高级恒温器 (日本
Sh im adzu) , CTO —2A 柱温箱 (日本 Sh im adzu)。
2　方法与结果
211　树脂的处理: 取 2 kg DA 201 树脂, 加水浸泡
48 h, 用分样筛在过微孔膜的自来水的冲洗下筛选
出 60～ 80 目的树脂。取 500 g 树脂用蒸馏水反复清
洗干净后, 加入 4 mo löL N aOH 600 mL 浸泡 4 h, 滤
过, 滤后树脂用蒸馏水洗至近中性。加入 4 mo löL
HC l 600 mL , 浸泡 4 h, 滤过后蒸馏水洗至近中性。
加入 95% 乙醇 500 mL , 浸泡 12 h 后, 用蒸馏水反复
清洗至无乙醇味, 装入玻璃色谱柱 (150 cm ×8 cm )。
212　分离纯化: 称取银杏叶提取物 525 g, 加乙醇
1 000 mL 溶解, 再加入水 2 000 mL , 旋转蒸发浓缩
至无乙醇味, 体积约 1 000 mL , 冷却滤过。滤液上
DA 201 柱 (柱体积为 2 000 mL ) , 过柱流速应控制在
2～ 3 滴ös, 至棕色液离柱下出口约 15 cm , 用水洗至
流出液清亮为止。分别用 2 000 mL 5%、10%、30%、
35% 乙醇水溶液梯度洗脱, 分别收集其单一内酯组
份洗脱液, 收集过程采用硅胶薄板监测 (硅胶 GF
254; 石油醚2醋酸乙酯为 121)。洗脱液经真空薄膜蒸
发器回收乙醇, 浓缩至约 200 mL , 浓缩液放置结晶。
213　重结晶分离: 分别将浓缩液放置结晶, 晶体采
用真空抽滤, 粗晶用乙醇溶解, 再加入水配结晶母液
为 70% 乙醇溶液 (固液比 1∶10) , 室温放置结晶, 分
别得 4 种白色晶体。5% 洗脱液所结晶体为银杏内酯
C; 10% 洗脱液所结晶体为白果内酯晶体; 30% 洗脱
液所结晶体为银杏内酯A ; 35% 洗脱液所结晶体为
银杏内酯B。
　　将银杏内酯A 和银杏内酯B 粗晶体用 80% 乙
醇 2 次重结晶, 得银杏内酯A 和银杏内酯B 无色针
状晶体, 而白果内酯和银杏内酯C 粗晶用 30% 乙醇
水 2 次重结晶, 得白果内酯白色粒状晶体和银杏内
酯C 无色方晶。晶体纯度采用高效液相色谱[2 ]测定,
外标法测得 4 种晶体纯度均大于 95%。
214　树脂的再生: 用 80% 乙醇 2 000 mL 洗柱至棕
色变白色, 80% 洗脱液浓缩至干, 得银杏黄酮 (含量
大于 24% )。再用 4 000 mL 水洗至无乙醇味, 分离
·9531·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
Ξ 收稿日期: 2004202223
基金项目: 国家教委春晖计划资助项目; 中法先进研究计划项目 (PRA BT 00206) ; 贵州大学 2001 年校基金资助
作者简介: 何　 (1974—) , 女, 贵州人, 讲师, 在职研究生, 主要从事中药活性成分分离提纯研究工作。
柱即可重复使用。
215　结果及得率: 银杏叶提取物 525 g, 银杏萜内酯
6115% (白果内酯 3144% , 银杏内酯 C 2109% , 银杏
内酯A 015% , 银杏内酯B 0112% ) , 采用乙醇水梯
度洗脱, 大孔吸附树脂柱连续分离银杏叶提取物中
萜内酯组份, 真空浓缩后结晶, 粗晶用乙醇水溶液重
结晶, 其 4 种萜内酯单体纯度和得率见表 1。
表 1　产品纯度和得率
Table 1　Pur ity and y ield of products
组　份 质量ög 得率ö% 提取率ö%
白果内酯　 12165 2141 70101
银杏内酯C 8118 1146 75145
银杏内酯A 1163 0131 62128
银杏内酯B 0143 0108 69184
　　采用本工艺将总萜内酯质量分数 6115% 的 525
g 原料经纯化可得纯度为 95% 的白果内酯 12165 g,
银杏内酯C 8118 g, 银杏内酯A 1163 g, 银杏内酯B 0143 g, 总萜内酯为 22189 g。总得率为 4126% , 平均提取率为 69127%。晶体及原料采用H PL C 法测定,与对照品的H PL C 图谱相同, 没有干扰峰。3　讨论　　本法只采用一次柱分离, 结晶纯化即可连续制得纯度达 95% 以上的白果内酯, 银杏内酯A、B、C单体。本工艺操作中只采用无毒试剂水和乙醇, 对产品药用提供了安全保障。由于采用的是可重复使用的大孔树脂, 使生产成本降低至约 5 万元ökg。本工艺简便, 采用有机试剂少。因此适用于中试及工业生产, 为大规模开发银杏萜内酯药品奠定了良好基础。References:[ 1 ]　L i Z L 1 E xp loita tion and E x ertion of G inkg o L eaves (银杏开发与利用) [M ]1 Shangsh i: Shanghai Scien tific and T echn icalPub lishers, 19961[ 2 ]　Zhang D Q , H e Z F1 R esearch in the Chem ica l Ing red ien ts inL eaves of G inkg o biloba (银杏叶资源化学研究) [M ]1 Beijing:Ch ina L igh t Industry P ress, 19991
超临界萃取结合水煎煮法提取丹参中有效成分的研究
张　虹1, 柳正良2, 王洪泉1, 杨　莺3Ξ
(11 同济大学附属同济医院, 上海　200065; 21 第二军医大学药学院, 上海　200433; 31 利群医院, 上海　200333)
　　丹参为唇形科植物丹参 S a lv ia m iltiorrh iz a
Bge1 的干燥根及根茎, 味苦, 性微寒, 祛瘀止痛、活
血通经、清心除烦。丹参主要含有结晶性菲醌类化合
物, 如丹参酮É ( tan sh inone É )、丹参酮Ê A、Ê B
( tan sh inone Ê A、Ê B )、隐丹参酮 (cryp to2 tan sh i2
none )、二氢丹参酮 (d ihydro tan sh inone) ; 水溶性有
效成分为丹参素 (dan shen su) 及酚酸类成分原儿茶
醛 (p ro tocate2chualdehyde)、咖啡酸 (caffeic acid )、
迷迭酸甲酯 (m ethyl ro sm arinate) 等, 以及棕罗汉松
酚 (ferrugino l)等其他成分。脂溶性有效成分丹参酮Ê A 经研究表明具有抑制血栓形成等药理作用; 水
溶性有效成分丹参素能抗心肌缺血并对冠状动脉有
较好作用, 原儿茶醛能显著增加冠状动脉流量, 对抗
AD P 诱导的血小板积聚, 并有广谱抗菌作用。本实
验对脂溶性有效成分以丹参酮Ê A 为指标, 水溶性
有效成分以丹参素、原儿茶醛为指标对丹参进行提
取研究, 并作为制剂的一组质控指标。
1　仪器与材料
高效液相色谱仪: 日本岛津 L C—9A , 配有
SPD—6A 紫外可变波长检测器; CR—4A 数据处理
器; 超临界萃取设备: SFX 2—10 型超临界流体萃取
器 (美国 Isco 公司) ; B ran son 1200 型超声波清
洗器。
　　丹参酮Ê A (批号: 07662200011)、原儿茶醛 (批
号: 081029402)购自中国药品生物制品检定所; 丹参
素 (纯度大于 99% ) 购自复旦大学药学院天然药物
化学教研室。丹参药材购于上海市药材公司, 经第二
军医大学宓鹤鸣教授鉴定。本品经自然晾干后, 60
℃干燥 12 h, 粉碎, 过三号筛。甲醇为H PL C 或A R
纯, 蒸馏水为双蒸水 (自制)。
2　有效成分的测定
211　脂溶性成分丹参酮Ê A 的测定
21111　色谱条件: 色谱柱: D iamon silTM C 18柱 (250
mm×416 mm , 5 Λm ) (迪马公司) ; 流动相: 甲醇2水
·0631· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 12 期 2004 年 12 月
Ξ 收稿日期: 2004203212
作者简介: 张　虹 (1967—) , 女, 浙江海宁人, 副主任药师, 1990 年毕业于上海医科大学药学系, 获理学学士学位, 2001 年毕业于第二军
医大学药物分析专业, 获医学硕士学位, 主要从事药物分析及临床药学研究, 发表论文 10 余篇。
T el: (021) 5605108023203　E2m ail: zkzhu@yahoo1com 1cn