全 文 ：0. 9, 1. 2, 1. 5 mL置于 5 mL量瓶中 ,再量取 1 mL
甲萘酚内标溶液 ,加甲醇稀释至刻度。 分别进样 10
μL,以对照品溶液浓度为横坐标 ,对照品与内标物
的峰面积比值为纵坐标进行线性回归 ,绘制标准曲
线 ,得到回归方程为 Y = 1. 540X - 0. 011 51, r=
0. 999 9; Y= 51. 73X - 0. 006 294, r= 0. 999 8。结果
表明: 甘草酸在 0. 055～ 1. 10 mg /mL,桂皮酸在
2. 0～ 30. 1μg /m L呈现良好线性关系。
3. 4　精密度试验: 取同一浓度的样品重复进样 6
次 ,以甘草酸和桂皮酸峰面积分别与内标物联苯和
甲萘酚峰面积的比值计算 ,测得 RSD分别为 1. 6%
和 1. 0%。
3. 5　重现性试验: 按“供品溶液的制备”方法制备 6
份供品 ,分别进样 ,以甘草酸和桂皮酸峰面积分别与
内标物联苯和甲萘酚峰面积的比值计算 ,得 RSD分
别为 2. 0%和 1. 4%。
3. 6　回收率试验:精密称取甘草 0. 5 g ,附子 0. 5 g ,
白术 0. 5 g ,桂枝 1 g,共 9份 ,分为低、中、高 3组 ,分
别加入甘草酸对照品 2. 00, 4. 00, 6. 00 mg和桂皮
酸 0. 226, 0. 452, 0. 678 mg ,每剂量 3份 ,处理并测
定 ,计算回收率。结果甘草酸平均回收率为 95. 9% ,
RSD为 2. 6% ;桂皮醛回收率为 94. 8% , RSD为
2. 0%。
3. 7　供试品测定:精密称取甘草 0. 5 g ,附子 0. 5 g ,
白术 0. 5 g ,桂枝 1 g ,按照“供试品溶液的制备”方法
进行处理并测定 ,测得甘草附子汤中含甘草酸 3. 8
mg /g ,桂皮酸 0. 33 mg /g (n= 6)。
4　讨论
4. 1　曾以正交试验设计法对甘草附子汤的提取工
艺进行优化 ,以甘草酸、桂皮酸的含量和浸膏得率为
指标 ,考察了溶剂量、提取时间和提取次数对提取结
果的影响。 经过直观分析和方差分析 ,结果显示以
10倍量 50%乙醇 ,提取 2次 ,每次 1 h能获得最好
的提取效果。
4. 2　在流动相中加入冰醋酸可以有效抑制甘草酸
的解离 ,改善了甘草酸的峰形。经过对流动相的进一
步优化 ,在此色谱条件下待测物质的色谱峰与相邻
峰分离较好 ,重现性佳。本法简便、准确 ,可作为甘草
附子汤质量控制的手段之一。
References:
[1 ]　 Zheng H Z, Dong Z H, Yu J. Modern Stu dy of Tra di tiona l
Ch inese Medicine (中药现代研究与应用 ) [M ] . Vol Ⅱ . Bei-
jing: Xueyuan Pres s, 1999.
[2 ]　 Zheng H Z, Dong Z H, Yu J. Modern Stu dy of Tra di tiona l
Ch inese Medicine (中药现代研究与应用 ) [M ] . VolⅣ . Bei-
jing: Xueyuan Pres s, 1999.
[3 ]　 Zhu L, Kong D Y, Wu X M. Determination of glycyrrhizic
acid in Weiw ansh u Gran ula by HPLC [ J] . Ch in Tradi t Herb
Drugs (中草药 ) , 1999, 30( 5): 339-340.
[4 ]　 Zuo W , Song M S, Kong S L, et al . Separation and d etermi-
nation of β-glycyrrhetic acid in Glycyrrh iza and it s preparation
and Chinese proprietary medicine by high performance liquid
ch romatog raph y [ J]. Ch in J Ch romatog r (色谱 ) , 1995, 13
( 1): 43-44.
[5 ]　 Huang X H, Song Z H, Bi K S. Stud y on alcohol ext raction
p roces s of Linggui Zhugan Decoction wi th orthogonal d esig n
[ J ]. Lishizhen Med Mater Med Res (时珍国医国药 ) , 2002,
13( 4): 199-201.
HPLC法测定风湿关节炎片中士的宁和马钱子碱的含量
李晓妮 ,胡　爽 ,葛　新 ,丁　红
(山西医科大学药学院 ,山西 太原　 030001)
　　风湿关节炎片主要由马钱子、麻黄、当归、苍术、
续断、桃仁等 17味中药组成 ,用于风湿痹痛、腰腿疼
痛、风湿性关节炎等症的治疗 ,具有良好疗效。 马钱
子为本处方中的君药。为保证用药安全有效 ,本实验
采用 HPLC法同时测定制剂中士的宁和马钱子碱
两种有效成分的含量 ,方法简便、快速、准确 ,为提高
和完善该制剂的质量标准提供了依据。
1　仪器和试药
岛津高效液相色谱仪 ( LC— 10A泵 , SPD— 10A
紫外可见检测器 , C— R6A数据处理机 )。
甲醇为色谱纯 ,其他试剂均为分析纯 ;士的宁对
照品和马钱子碱对照品 (中国药品生物制品检定所 ,
批号分别为: 0635-9903, 0725-9806) ;风湿关节炎片
(山西华康药业股份有限公司 )。
·914· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
收稿日期: 2003-01-14作者简介:李晓妮 ( 1957— ) ,女 ,山西省阳城县人 ,副教授 ,毕业于北京医学院药化专业 ,主要从事药物质量标准制定方面的工作。
Tel: ( 0351) 4690071
2　方法和结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱为 Hypersi l BDS C18柱
( 4. 6 mm× 250 mm , 5μm) (大连依特公司 ) ;流动
相:甲醇 -1%冰醋酸 ( 23∶ 77,含 0. 2%三乙胺 ) ;检
测波长: 254 nm;柱温: 25℃ ;进样量: 20μL;理论塔
板数按士的宁峰计算不低于 5 000。
2. 2　供试溶液的制备: 取本品 20片 ,除去糖衣 ,研
细 ,精密称取约 0. 4 g ,置具塞锥形瓶中 ,加入碱性氯
仿 [氯仿 -氨水 ( 9∶ 1) ]20 mL,精密称定 ,冷浸 24 h
后再精密称定 ,用碱性氯仿补足减失的质量 ,摇匀 ,
滤过。 精密量取续滤液 10 mL置蒸发皿中 ,水浴蒸
至近干 ,残渣用适量甲醇使溶解 ,用流动相分次洗涤
后合并置 25 mL量瓶中并稀释至刻度 ,摇匀 ,微孔
滤膜 ( 0. 45μm)滤过 ,即得。
2. 3　检测波长的选择: 精密称取士的宁对照品 5. 2
mg、马钱子碱对照品 7. 0 mg,分别置 10 mL量瓶
中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,制成对照品储备液。
将士的宁和马钱子碱对照品储备液分别在 200～
400 nm波长进行扫描 ,光谱图显示最大紫外吸收波
长: 士的宁为 211, 254 nm ,马钱子碱为 263, 301
nm。 为保证方法的灵敏度 ,选定波长为 254 nm。
2. 4　空白干扰实验:按制剂处方制成不含马钱子的
阴性供试液 ,与供试品在相同的色谱条件下测定 ,结
果在与士的宁和马钱子碱相应的保留时间处无干扰
峰。见图 1。
a-士的宁　 b-马钱子碱
a-s t rychnin e　 b-b rucine
图 1　对照品 (A)、风湿关节炎片 ( B)和缺马钱子
阴性对照 (C)的 HPLC图谱
Fig. 1　 HPLC chromatograms of ref erence substances
(A) , Fengsh i Guan jieyan Pill ( B) and sample
without Semen Strychni (C)
2. 5　线性关系的考察: 精密吸取士的宁储备液
0. 1, 0. 3, 0. 5, 0. 7, 1. 0 mg和马钱子碱储备液 0. 1,
0. 4, 0. 8, 1. 2, 1. 6 m L分别置 25 mL量瓶中 ,用流
动相稀释至刻度 ,摇匀 ,经 0. 45μm微孔滤膜滤过。
取续滤液 20μL,测定峰面积 ,进行线性回归。士的宁
回归方程为 Y= 29 633X - 1 390. 8 (r= 0. 999 6) ,
线性范围为 2. 08～ 20. 8μg /mL;马钱子碱回归方程
为 Y= 17 071X- 857. 42 (r= 0. 999 7) ,线性范围为
0. 56～ 9. 86μg /mL。
2. 6　精密度试验:取 10. 4μg /mL士的宁对照品溶
液和 4. 48μg /mL马钱子碱对照品溶液 20μL进
样 ,测定峰面积 ,重复测定 6次 ,士的宁的 RSD为
1. 3% ,马钱子碱的 RSD为 1. 4% 。
2. 7　重现性试验:取批号为 20020601的供试品制
备供试液 ,按上述色谱条件平行测定 6份 ,计算得士
的宁平均含量为 0. 331 4 mg /片 , RSD为 2. 1% ,马
钱子碱平均含量为 0. 184 2 mg /片 , RSD为 2. 3% 。
2. 8　稳定性试验:取 2. 7项下制备的供试液在配制
后 0. 5, 2, 4, 6 h进样 ,测定峰面积 ,计算得供试品中
士的宁峰面积的 RSD为 1. 4% ,马钱子碱峰面积的
RSD为 1. 2%。
2. 9　回收率试验: 取已知含量的供试品 (批号
20020601) ,分别加入士的宁对照品溶液 ( 0. 52 mg /
mL) 0. 16, 0. 16, 0. 32, 0. 32, 0. 50, 0. 50 mL和马钱
子碱对照品溶液 ( 0. 14 mg /mL) 0. 20, 0. 20, 0. 50,
0. 50, 0. 80, 0. 80 mL,按含量测定方法进行制备、测
定 ,士的宁的平均回收率为 95. 1% , RSD为 1. 6% ;
马钱子碱的平均回收率为 95. 6% , RSD为 2. 4% 。
2. 10　供试品测定:分别精密吸取对照品溶液和供
试品溶液 20μL进样 ,按上述色谱条件测定峰面积 ,
计算制剂中士的宁和马钱子碱含量 ,测定结果见表 1。
表 1　风湿关节炎片中士的宁和马钱子
碱的含量测定结果 ( n= 3)
Table 1　 Contents of strychnine and brucine in Fengshi
Guanj ieyan Tablets (n= 3)
批　号 士的宁 / ( mg· 片 - 1) 马钱子碱 / (mg· 片 - 1 )
20020601 0. 336 8 0. 186 3
20020701 0. 344 8 0. 186 5
20020702 0. 346 9 0. 190 0
3　讨论
3. 1　采用 HPLC法同时测定马钱子及其制剂中的
士的宁和马钱子碱含量的报道有以硅胶柱为固定相
的正相色谱法 [ 1, 2] ,但多为 ODS柱的反相色谱
法 [3～ 5 ]。实验曾以 0. 01 mol /L磷酸二氢钾 -甲醇 -乙
腈 ( 75∶ 10∶ 15, H3 PO4调 pH 2. 5)为流动相 ,虽然
使本制剂中士的宁、马钱子碱与其他组份完全分离 ,
但使用期间色谱柱柱效降低。 最终选择的流动相未
使用磷酸盐和价格较高的乙腈 ,经测定其 pH值为
3. 0,有利于延长柱寿命。
3. 2　对比碱性氯仿提取和浓氨水湿润后氯仿提取
两种方法 ,片粉在前者中不成团、分散性好 ,提取效
率显著提高。
·915·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
References:
[1 ]　 Fu Y H, Han W D, Xu H X. Simul taneous determination of
st rych nine and brucine in Semen S trychni by HPLC [J ]. J
Chin Pha rm Univ (中国药科大学学报 ) , 1998, 29 ( 4) : 281-
283.
[2 ]　Xu L H, Lu J. Determination of s t rychnin e and brucine in Se-
men Str ych ni and preparat ions by HPLC [ J ]. Chin J Pharm
Anal (药物分析杂志 ) , 1998, 18( 6): 383-385.
[3 ]　 Zhang Z Q, Sha M, Yuan C L, et al . Determination of s t rych-
nine and b rucine in Semen Strychni and Sh angke Qiw ei Tablets
by HPLC [J ]. Chin Tra dit Herb Drugs (中草药 ) , 1998, 29
( 4): 236-237.
[4 ]　 Lu Y X, Cui J, Liu Y. Determination of st rych nine and
b rucine in Qubidan Capsule by RP-HPLC [ J] . Ch in Hosp
Pharm J (中国医院药学杂志 ) , 2001, 21( 8): 474-475.
[5 ]　 Li S L, Chen B Y. Simultaneous d etermination of s trych nine
and brucine in Maqianzi Pow der by RP-HPLC [ J] . Chin
Pharm J (中国药学杂志 ) , 1998, 33( 3): 168-169.
荷叶中荷叶碱提取工艺的研究
赵　骏 ,王洪章 ,齐喜红 ,高敏燕 ,高　钊
(天津中医学院 ,天津　 300193)
　　荷叶为 睡莲科植物 莲 Nelumbo nuci fera
Gaertn. 的干燥叶 ,具有清热利湿 ,升发清阳 ,降脂
减肥、止血散瘀等作用。 《本草纲目》载: “荷叶服之 ,
令人瘦劣 ,单服可以消阳水浮肿之气。”今用荷叶配
方生产降脂减肥茶者颇多。据报道 ,将荷叶用乙醇回
流提取后制成浸膏片具有良好的调血脂作用。 国外
尤其是日本关于荷叶化学成分的研究报道较多 ,主
要是生物碱类、黄酮类、鞣质类成分。 我国的荷叶资
源丰富 ,价廉易得 ,为可开发的天然药用植物资源。
本实验以荷叶生物碱为指标 ,利用不同的溶媒采用
加热回流法和超声提取 ,大孔吸附树脂纯化来优化
提取工艺。
1　仪器、试剂和材料
　　 DU— 530紫外可见分光光度计 (美国 Beck-
man公司 ) ,电子天平 (上海天平仪器厂 )。试剂均为
分析纯。荷叶购于天津中医学院门诊部 ,经本院药用
植物教研室鉴定为睡莲科植物莲 N . nuci fera
Gaertn. 的干燥叶片。荷叶碱对照品 (山东医学科学
院药物研究所提供 )。
2　实验方法
2. 1　提取荷叶中总生物碱的正交设计:对不同溶媒
加热回流和不同提取方法的影响因素及水平见表
1, 2。
2. 2　荷叶总生物碱的提取与纯化: 称取荷叶 100
g ,加入表 1中的溶剂 2 000m L浸泡 ,按表 2方法提
取。滤过 ,合并滤液 ,回收溶剂至 100 mL,有机溶剂
提取液拌入适当的树脂 ,挥去乙醇 ,再将拌有样品的
树脂加到预先填好的大孔吸附树脂柱 (药材与树脂
的比例为 1∶ 2～ 1∶ 3)上 ;酸水提取液经 0. 5% 氢
氧化钠溶液调 pH 9～ 11,直接上柱。先水洗去杂质 ,
再用乙醇 -水洗脱 ,减压回收乙醇 ,挥干得总生物碱。
表 1　不同溶媒加热回流提取因素水平表
Table 1　 Factors and levels by heating and
ref luxing with dif ferent resolvers
水平 因　　素
A溶剂 B回流时间 /h C提取次数
1 95% 乙醇 1. 5 1
2 甲醇 2. 0 2
3 0. 5盐酸 2. 5 3
表 2　不同提取方法因素水平表
Table 2　 Factors and levels by diff erent
extracting methods
水平 因　　素
A溶剂 B提取方法 C提取时间 /h
1 0. 5% 盐酸 超声 1. 5
2 0. 5% 醋酸 回流 2. 0
2. 3　对照品溶液的配制:精密称取减压干燥至恒重
的荷叶碱对照品 4. 5 mg ,氯仿定容至 10 mL。精密
吸取 4 mL,加入 20 mL氯仿及 4 mL溴甲酚绿缓
冲液于分液漏斗中萃取 ,取 20 mL氯仿层于试管
中 ,加 0. 01 mo l /L氢氧化钾溶液、无水乙醇各 5
mL摇匀 ,精密吸取上层溶液 6 mL于 10 mL量瓶
中定容 ,即得。
2. 4　标准曲线的制备:分别精密吸取荷叶碱对照品
溶液 0. 1, 0. 5, 1. 0, 1. 5, 2. 0, 2. 5, 5. 0 mL置于干燥
具塞试管中 ,加氢氧化钾溶液及无水乙醇的混合液
至 5 mL,摇匀。以氢氧化钾溶液和无水乙醇的混合
·916· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
收稿日期: 2002-10-12