全 文 ：测定峰面积。结果表明供试品溶液及对照品溶液在
9 h内基本稳定 ,以峰面积计算 , RSD分别为 1.20%
和 0.071%。
2.6　干扰性考察:将阴性对照溶液进样 5 μL , 测
定 ,结果在与厚朴酚对照品相应保留时间的位置无
色谱峰。
2.7　重现性试验:取同一批号小儿磨积片样品 ,除
去糖衣 ,研成细粉 ,精密称取 5份 ,按供试品溶液制
备项下方法制备供试品溶液 ,进样测定 ,计算厚朴酚
中厚朴酚的含量。结果厚朴酚含量为 1.15 mg/g ,
RSD为 1.31%。
2.8　加样回收试验:取厚朴酚含量为1.15 mg/g 的
小儿磨积片 ,除去糖衣 ,研成细粉 ,精密称取约 0.15
g ,加入相当于原样品中厚朴酚量的 75%、110%、
150%的厚朴酚对照品 ,制备供试品溶液 ,进样测定 ,
结果平均回收率为 100.1%, RSD 为 1.79%(n =
9)。
2.9　样品测定:按供试品溶液制备项下方法制备供
试品溶液 ,进样 5 μL ,按外标法 ,以峰面积计算厚朴
酚的含量 ,结果见表 1 。
表 1　小儿磨积片中厚朴酚的测定结果(n=3)
Table 1　Magnolol in Xiao er Moj i Tablet(n=3)
批　号 厚朴酚含量/(mg·g -1) RSD/ %
20030401 1.28 0.21
20030501 1.15 0.67
20030701 1.21 0.19
3　讨论
　　本试验对比了甲醇 、50%甲醇 、95%乙醇和
50%乙醇的提取效果 ,确立 95%乙醇为提取溶剂 ,
同时调整流动相比例排除干扰 ,使厚朴酚实现基线
分离。试验证明 ,此方法准确度高 、重现性好 ,可作
为该制剂质量检测的方法 ,提高药品质量可控性 ,确
保临床用药的有效性。
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Xueyuan Press , 1998.
RP-HPLC法测定山楂提取物中金丝桃苷的含量
张忠会1 ,秦　婷2 ,王惠达2 ,王　栋3 ,元英进1
(1.天津大学化工学院 , 天津　300072;2.承德颈复康药业集团有限公司 , 河北 承德　067000;
3.承德医学院 , 河北 承德　067000)
　　山楂为常用中药 ,药食同源 ,味酸 、甘 ,性微温 ,
归脾 、胃 、肝经。具有消食健胃 、行气散瘀的功效 ,用
于肉食积滞 、胃脘胀满 、泻痢腹痛 、瘀血经闭 、产后瘀
阻 、心腹刺痛 、疝气疼痛 ,高脂血症[ 1] 。山楂中含有
黄酮类 、三萜酸类等成分。其中山楂黄酮类成分被
认为是保护心肌 、促进心肌收缩的主要有效成分 ,而
金丝桃苷有抗心肌缺血损伤 、心肌脂质过氧化等作
用 ,被认为是其中的代表性有效成分。《欧洲药典》
规定山楂叶中黄酮类的含量测定采用比色法测定总
黄酮 ,尚无指标性成分金丝桃苷等的含量测定[ 2] 。
本实验以金丝桃苷为指标 ,建立了山楂提取物的
HPLC含量测定方法 ,并测定了不同批号的山楂提
取物中的金丝桃苷的含量 ,为山楂提取物及其制剂
的质量控制提供依据[ 3 , 4] 。
1　仪器与试药
日本岛津 LC —10AVP高效液相色谱仪(包括在
线脱气机 、二元泵 、SPD—M10AVP 二极管阵列检测
器 ,CLASS —VP5.03 软件), Metler 十万分之一电
子分析天平 ,超声清洗仪。
　　金丝桃苷对照品(中国药品生物制品检定所 ,批
号 1521-200202),山楂提取物由承德颈复康药业集
团有限公司雾灵药业公司提供 ,乙腈 、四氢呋喃为色
谱纯 ,其他试剂均为分析纯 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件:色谱柱:Intersil ODS-3 C18柱(250
mm×4.6 mm ,5 μm)(GL Science Co.Ltd);流动相:
·884· 中草药　Chinese T raditional and Herbal Drugs　第 35 卷第 8 期 2004年 8月
收稿日期:2003-11-13作者简介:张忠会(1975—),男 ,河北承德人 ,工程师 ,就职于承德颈复康药业集团有限公司 ,从事中药研发 ,天津大学工程硕士。
Tel:(0314)2153758　E-mail:zzh 03076@yahoo.com.cn
乙腈-四氢呋喃-水-甲酸(55∶45∶400∶1.5);体积流
量:1.0 mL/min;检测波长:255 nm;柱温:25 ℃。
在上述色谱条件下 ,金丝桃苷与其他成分得到了很
好的分离 ,色谱图见图 1 ,金丝桃苷保留时间约为 28
min ,理论塔板数为 6 000。
＊-金丝桃苷
＊-hyperoside
图 1　金丝桃苷(A)和山楂提取物(B)的 HPLC图
Fig.1　HPLC of hyperoside(A)and
Fructus Crataegi extract(B)
2.2　对照品溶液的制备:精密称取干燥至恒重的金
丝桃苷对照品 0.84 mg ,置25 mL 量瓶中 ,加甲醇溶
解并稀释至刻度 ,混匀即得。
2.3　线性关系考察:精密称取金丝桃苷对照品
3.08 mg ,置 25 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻
度 ,混匀 。分别精密吸取 1 、2 、3 、4 、5 mL 置 10 mL
量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,混匀 ,微孔滤膜滤过。依次
进样 10 μL ,按上述色谱条件操作。以峰面积为纵
坐标 ,质量浓度为横坐标 ,进行线性回归 ,得回归方
程 Y =1 714 968.34 X -20 498.2 , r =0.999 9。
结果表明 ,金丝桃苷在 12.32 ～ 61.6 μg/mL 与峰面
积线性关系良好 。
2.4　供试品溶液的制备:精密称取山楂提取物 0.4
g ,加入 70%丙酮溶液超声提取 ,共 3次 ,每次使用
溶液 30 mL 、超声 10 min ,滤过 ,最后使用少量 70%
丙酮溶液反复洗涤 3 ～ 4次 ,合并滤液 ,水浴挥干 ,残
渣加甲醇溶解 ,并稀释成 50 mL ,摇匀 ,微孔滤膜滤
过 ,即得。
2.5　方法学考察
2.5.1　精密度试验:取同一份山楂提取物的供试品
溶液连续进样 6次 ,测定金丝桃苷的峰面积 ,计算其
RSD为 0.52%(n=6)。
2.5.2　重现性试验:精密称取同一批山楂提取物 6
份 ,每份 0.4 g ,制备供试品溶液 ,检测 ,测定金丝桃
苷质量分数 ,计算得其 RSD为 0.63%。
2.5.3　稳定性试验:取一份山楂提取物供试品溶
液 ,分别在 0 、1 、2 、4 、8 、14 、24 h检测 ,测定金丝桃苷
峰面积 ,计算得其 RSD为 0.90%。
2.5.4　回收率试验:精密称取同一批 2.15 mg/g 山
楂提取物样品 0.25 g ,共 6份 ,分别精密加入 0.553
0 mg/mL 金丝桃苷对照品溶液 0.8 、0.8 、1.0 、1.0 、
1.2 、1.2 mL , 按供试品溶液的制备项下的方法操
作 ,采用 HPLC 分别检测 , 结果平均回收率为
101.7%,RSD为 0.77%。
2.6　样品测定:将 5个不同批次的山楂提取物制成
供试品溶液 ,进样 ,测定峰面积 ,采用外标法计算金
丝桃苷的质量分数 。结果见表 1。
表 1　山楂提取物中金丝桃苷的含量(n=3)
Table 1　Hyperoside in Fructus Crataegi extract(n=3)
批　号 金丝桃苷/(mg·g -1) RSD/ %
20021001 2.23 0.47
20030501 3.24 0.23
20030702 1.95 0.61
20030902 2.63 0.55
20031101 2.46 0.29
3　讨论
　　试验曾直接使用甲醇超声提取;使用 80%乙醇
超声提取 ,挥干后 ,甲醇溶解;使用 70%丙酮超声提
取 ,挥干后 ,甲醇溶解处理山楂提取物 。通过比较色
谱峰的峰面积 、分离度和溶液的处理难度 ,最后使用
70%丙酮超声提取 、挥干后 ,甲醇溶解的方法。
　　在色谱条件的探索中 ,单纯使用乙腈-水或四氢
呋喃-水系统均不能够得到最佳分离 ,而两者合用可
以达到较理想的分离;加入甲酸可以有效地防止拖
尾;金丝桃苷在 255 nm 处有较强的吸收 。同时在
此波长下检测 ,可于同一色谱中显示其他黄酮类成
分的保留时间 、峰面积等参数 ,在测定金丝桃苷的同
时 ,可增加色谱的指纹性。
References:
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