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HPLC法测定银杏叶缓释胶囊中总黄酮的含量
王淑君1 , 候　薇2 , 张天政3, 陈济民 1,毕殿洲1

( 1. 沈阳药科大学,辽宁 沈阳　110016; 2. 沈阳第一制药厂,辽宁 沈阳　110023; 3. 盖州市中心医院,辽宁 营口　115200)
　　银杏Ginkgo biloba L.为银杏科银杏属植物。银
杏叶入药, 始载于明《本草品汇精要》, 性平, 味苦、
涩,敛肺平喘、止泻、活血止痛。银杏叶主要成分为黄
酮类、内酯类化合物,能够舒张冠脉, 改善血液循环,
降低心肌耗氧量, 降低钙离子内流, 抑制血小板聚
集,抗血栓、改善微循环、降低血液黏稠度。对心脑血
管具有保护作用。对老年性痴呆具有良好的预防作
用,长期使用无不良反应[ 1, 2]。
我国目前有许多厂家对银杏叶制剂进行了开
发,主要有普通片剂、胶囊剂、口服液等。银杏叶制剂
作为预防、治疗心脑血管疾病的良药,需长期反复用
药才能达到疗效。普通剂型的频繁给药必将给患者
带来不便,血药浓度的波动也将影响药物的疗效。本
实验对制备的银杏叶缓释胶囊建立了 HPLC 法测
定其中总黄酮的含量。结果表明本法准确、简便。
1　仪器与试药
美国Water 高效液相色谱仪, 484紫外检测器,
江申色谱工作站。银杏叶缓释胶囊(沈阳药科大学药
剂教研室) , 槲皮素、山柰素、异鼠李素(中国药品生
物制品检定所) , 甲醇为色谱纯(山东禹王实业总公
司) ,磷酸等均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　溶液配制
2. 1. 1　对照品溶液的制备:分别精密称取经五氧化
二磷干燥过夜的槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品适
量,各加甲醇制成 0. 03, 0. 03, 0. 02 mg / mL 的溶液,
作为对照品溶液。
2. 1. 2　供试品溶液的制备:取胶囊 20粒, 倾出内容
物,研细,精密称取适量(约 400 mg ) ,精密加入甲醇
25 mL,超声处理20 min。滤过, 弃去初滤液,精密量
取续滤液 5 mL,加甲醇-25%盐酸溶液( 4∶1)混合
液 25 mL, 回流 30 m in, 放冷, 转移至 50 mL 量瓶
中,并加甲醇至刻度,摇匀,即得。
2. 2　色谱条件: 色谱柱: Sper isorb C18 ( 4. 6 mm×
250 mm) ; 流动相: 甲醇-0. 4%磷酸溶液( 60∶40) ;
流速: 0. 8 mL/ m in;柱温: 25 ℃;检测波长: 360 nm。
2. 3　专属性试验:在此色谱条件下,槲皮素、山柰素
和异鼠李素色谱图见图 1。
1-槲皮素　2-山柰酚　3-异鼠李素
1-quercet in　2-k aempferol　3-is orhamnetin
图 1　混合对照品(A)和银杏叶缓释胶囊(B)
的 HPLC图谱
Fig. 1　HPLC chromatograms of mixed refe-
rence substances (A) and Ginkgo
Sustained-release Capsule (B)
2. 4　标准曲线制备:分别精密称取槲皮素、山柰素、
异鼠李素对照品各 10 mg 于 10 mL 量瓶中, 用甲醇
溶解并稀释至刻度, 再分别稀释成浓度为 10, 20,
30, 40, 50
g / mL 的溶液, 进样 10
L。以峰面积
( A )与浓度( C)做回归曲线,线性范围为 10～50
g/
mL。回归方程为:槲皮素: Y= 135 718X - 406 491,
r = 0. 999 3; 山柰素: Y = 91 197X + 447 751, r =
0. 999 8; 异鼠李素: Y = 166 038X - 717 919, r =
·163·中草药　Chinese T raditional and Herbal D rug s　第 35 卷第 2 期 2004年 2月

收稿日期: 2003-05-01
0. 999 7。
2. 5　精密度试验:取槲皮素、山柰素、异鼠李素对照
品溶液,按上述色谱条件及检测方法连续进样 5次,
每次 10
L, 测定峰面积,计算 3种溶液的浓度, 其
RSD分别为 1. 57% , 2. 89% , 0. 29%。
2. 6　稳定性试验: 分别于 0, 2, 4, 6, 12 h 测定同一
胶囊中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量, 每次进样
10
L, 其 RSD分别为 0. 35% , 3. 68%, 0. 54%。
2. 7　回收率试验:精密称取银杏叶缓释胶囊两份,其
中一份按含量测定方法测定其中黄酮醇苷元的含量,
另一份定量加入槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品,混
匀, 按含量测定方法测定各自含量,计算回收率。结果
平均回收率分别为 100. 40%, 97. 55%, 101. 06%,
RSD分别为 1. 01%, 2. 25% , 2. 09% ( n= 5)。
2. 8　样品测定:分别精密吸取上述 3种对照品溶液
与供试品溶液各 10
L,注入液相色谱仪, 测定, 计
算 3种黄酮苷元的含量,以下式换算成总黄酮的含
量。测定结果见表 1。
　　总黄酮醇苷含量= (槲皮素含量+ 山柰素含量+ 异鼠李
素含量)×2. 51
3　讨论
3. 1　参照《中华人民共和国药典》及大量文献[ 3] ,用
十八烷基键合硅烷胶为填充剂, 分别配制甲醇-
表 1　银杏叶缓释胶囊中总黄酮含量测定结果 ( n= 2)
Table 1　Content of total f lavone in Ginkgo
Sustained-release Capsule ( n= 2)
批号 总黄酮含量/ mg
010306 28. 94
010307 29. 62
010308 30. 14
0. 4%磷酸水溶液不同比例的流动相。以 5∶5比例
的出峰时间为 29 min, 随着甲醇比例的增加, 出峰
时间缩短,在 7∶3 比例时出峰时间大约为 7 min,
但在此条件下样品中各种成分不能有效分离。在6∶
4比例时, 样品中各种成分能有效分离,故流动相选
择甲醇-0. 4%磷酸水溶液( 60∶40)。
3. 2　同一样品在不同超声时间、不同回流时间测定
各成分峰面积,结果超声提取时间为 20 min, 水解
时间为 30 m in较好。
References:
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HPLC法测定咳喘平口服液中麻黄碱的含量
谢　辉1,狄留庆2, 毛春芹1

( 1. 南京中医药大学, 江苏 南京　210029; 2. 江苏省海洋药物研究开发中心,江苏 南京　210029)
　　咳喘平口服液系根据江苏省中医院儿科名老中
医的经验方生产加工制成, 处方中含有麻黄、半夏、
鱼腥草、白果、地龙等多味中药, 临床治疗小儿热哮
证疗效确切。麻黄系方中君药,测定其有效成分麻黄
碱的含量对咳喘平口服液的质量控制有重要意义。
文献报道的麻黄碱含量测定方法有薄层扫描法、气
相色谱法、高效液相色谱法 [ 1]等, 根据现有条件及
HPLC 法具有简便、灵敏、专属性强等优点,本实验
对 HPLC 法测定制剂中麻黄碱的含量进行了研究。
1　仪器及材料
Waters 高效液相色谱仪, 薄层色谱硅胶 G (青
岛海洋化工集团公司) , 咳喘平口服液(本校药剂教
研室提供) ,盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品
检定所) ,乙腈( HPLC,江苏淮阴塑料制品厂化工研
究所) ,其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件与系统适用性试验:色谱柱为Wa-
ters Nova-Pak C18柱( 4
m, 3. 9 mm×150 mm) , 流
动相为乙腈-水( 40∶60,每 1 000 mL 含磷酸二氢钾
3. 4 g 及十二烷基硫酸钠 1. 7 g ) , 检测波长为 210
nm ;柱温为 25℃,流量为1. 0 mL/ m in。理论塔板数
按麻黄碱计算不低于 6 000。
·164· 中草药　Chinese T raditional and Herbal D rug s　第 35 卷第 2 期 2004年 2月

收稿日期: 2003-04-03作者简介:谢　辉( 1970—) ,女,江苏南京市人,硕士,讲师,主要研究方向:中药制剂。Tel: ( 025) 86798159