全 文 ：计算含量 ,结果见表 1。
表 1　通脉颗粒中阿魏酸含量测定 ( n= 3)
Table 1　 Ferulic acid in Tongmai Granula (n= 3)
批　号 阿魏酸含量 / ( mg· g- 1) RSD /%
20001110 0. 068 1. 04
20001211 0. 072 1. 94
20001213 0. 072 1. 12
3　讨论
3. 1　阿魏酸是当归中有效成分之一 ,具有明显扩张
冠脉血管 ,增加冠脉流量 ,改善心肌缺血作用。 它是
弱有机酸 ,根据文献我们采用流动相溶解 [ 1] ,使阿魏
酸稳定性增加 ,提高了分析结果的准确性。
3. 2　本品在进行波长选择时 ,取阿魏酸对照品适
量 ,用流动相溶解后做紫外扫描 ,测得最大吸收波长
为 313 nm ,与文献报道相同 [2 ] ,所以检测波长定为
313 nm。
3. 3　阿魏酸含量测定所用流动相文献报道主要有
甲醇-水 -磷酸系统和甲醇 -水 -冰乙酸系统 ,经比较以
甲醇 -水 -冰乙酸系统为佳 ,将甲醇与不同浓度冰乙
酸溶液以不同比例混合作为流动相进行洗脱 ,最终
确定为甲醇 -0. 8%冰乙酸溶液 ( 30∶ 70)作为流动
相 ,样品中阿魏酸峰可获得良好的分离效果 ,理论塔
板数以阿魏酸峰计算约为 4 000,在上述条件下 ,阿
魏酸与杂质峰分离度符合要求。
3. 4　分别用甲醇、 50%甲醇、醋酸乙酯 -甲酸、甲醇-
甲酸、甲醇 -冰乙酸等作溶媒对样品进行提取方法的
摸索。经测定 ,以甲醇-冰乙酸 ( 19∶ 1)作为提取溶剂
超声处理样品为佳。 通过对超声时间和提取溶媒量
的考察 ,发现用 50 mL甲醇-冰乙酸 ( 19∶ 1)提取 30
min已将样品中阿魏酸提取完全。
References:
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质研究 ) [M ] . Bei jing: China Medicinal Science and Tech nolo-
gy Publishing House, 1994.
大孔吸附树脂提取纯化银杏酚酸的研究
倪学文 ,吴谋成
(华中农业大学 食品科技系 ,湖北 武汉　 430070)
　　银杏酚酸 ( ginkgo lic acids)存在于银杏外种皮、
果肉和叶中 ,属漆树酸类化合物 ,具有抗肿瘤、抗炎、
抗过敏、抑菌、防治病虫害和日化用品添加剂等功
效 [1, 2 ]。从 20世纪 60年代就已经有银杏酚酸的分离
提取方法的报道。 Gellerman [3 ]利用氯仿和甲醇浸
提 ,用硅胶柱层析分离银杏酚酸 ; Itokaw a[ 4]将银杏
外种皮用甲醇浸提 ,再经硅胶柱和 ODS柱得 3种酸
性成分 ; Irie[5 ]使用正己烷浸提银杏叶 ,然后经硅胶
柱和 Sephades LH-20分离 ,用高效液相制备柱制备
银杏酚酸。这些方法普遍存在所需溶剂、设备昂贵 ,
方法烦琐的缺点 ,且无法对银杏酚酸进行大规模的
分离 ,在实际生产中难以得到应用。
本实验以银杏外种皮为原料 ,比较几种吸附树
脂对银杏酚酸的吸附性能 ,挑选出了适宜的吸附剂 ,
为吸附树脂法分离纯化银杏酚酸奠定一定的基础。
1　材料和仪器
银杏外种皮:采自湖北安陆 ,经清洗去杂和粉碎
干燥 ;大孔吸附树脂: 南开大学化工厂 ;其他试剂均
为分析纯 ,双蒸水。银杏酚酸对照品由本实验室制
备 ,经归一化法测定 ,含量大于 98%。
　　岛津 LC-6A高效液相色谱仪 ,配有 SPD-6AV
紫外可见检测器 , C TO-6A柱温箱 ;电子恒温水浴
锅 ;真空旋转蒸发器 ; Alpha l-5真空冷冻干燥器。
2　实验方法
2. 1　银杏酚酸粗提液的制备:称取银杏外种皮 ,以
80%工业乙醇为浸提溶剂 ,采用 1∶ 7的料液比 ,
60℃下回流提取 3次 ,每次 4 h,经抽滤 ,真空浓缩
后得到银杏酚酸粗提液即吸附原液。
2. 2　银杏酚酸测定方法: 采用高效液相色谱检测。
色谱条件:色谱柱: Supelcosi lTM LC-18 ( 15 cm× 4. 6
mm , 5μm);流动相: 90%甲醇 ,乙酸调 pH值为
3. 15;紫外检测波长: 310 nm;流速: 0. 7 mL /min;灵
·231·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 3期 2003年 3月
收稿日期: 2002-06-14作者简介:倪学文 ( 1977— ) ,女 ,湖北天门人 ,在读博士研究生 ,研究方向为天然产物化学。
Tel: ( 027) 87283263　 E-mail: nx w-d@ 163. com
敏度: 0. 04 AUFS;柱温: 30℃。
2. 3　树脂预处理:树脂先用 2 mo l /L NaOH浸泡 5
h,用蒸馏水洗至中性 ;再用 3 mol /L HCl浸泡 8 h,
用蒸馏水洗至中性 ;最后用乙醇浸泡 24 h,充分溶
胀 ,用乙醇洗至流出液加适量水无白色浑浊现象 ,再
用蒸馏水反复清洗至无醇气味 ,用蒸馏水浸泡待用。
2. 4　树脂的筛选:实验选用 4种吸附树脂 ( N AK-
9, ADS-17, D3520, D4020)测定静态吸附容量以筛
选树脂。静态吸附容量的测定:准确称取经预处理的
湿树脂 1. 5 g ,置于 100 mL具塞磨口烧瓶中 ,加入
一定量的吸附原液 ,盖紧瓶塞 ,在室温下振荡 36 h。
充分吸附后 ,过滤 ,对滤液进行 HPLC测定 ,与原液
的测定结果比较 ,按下式计算吸附容量:
　　吸附量= (原液浓度 -吸附液浓度 )×溶液体积干树脂质量
2. 5　计算不同吸附流速下的泄漏率:将预处理好的
湿树脂 D4020装柱 ,取吸附原液上柱吸附 ,控制一
定流速 ,收集流出液 ,测其银杏酚酸含量 ,计算泄漏
率 ,分别取流速为 1, 2, 3, 4 mL /min作比较。
　　泄漏率= 流出液浓度×流出液体积原液浓度×原液体积 × 100%
2. 6　测定不同浓度洗脱剂的洗脱流出液的银杏酚
酸含量:取适量树脂 D4020装柱 ,加入吸附原液进
行吸附 ,待吸附完全后 ,用一定浓度的乙醇洗脱剂将
银杏酚酸类化合物洗脱下来 ,洗脱速度控制为 1. 5
m L /min,收集与 1%三氯化铁溶液反应呈阳性的洗
脱液 (紫外扫描监控 ) ,洗脱液经浓缩干燥后用
HPLC检测银杏酚酸含量 ,对不同浓度乙醇洗脱剂
的洗脱效果进行比较。
3　结果
3. 1　树脂的筛选: 4种树脂 ( ADS-17, N AK-9,
D4020, D3520)进行静态吸附实验测定其吸附容量 ,
结果见表 1。
表 1　不同树脂对银杏酚酸的吸附量
Table 1　 Adsorption of diff erent resins on ginkgolic acids
型　号 吸附容量 / (mg· g- 1 )
ADS-17 108. 65
N AK-9 115. 86
D4020 180. 42
D3520 167. 31
　　由表 1可见 ,树脂 D4020, D3520的吸附量明显
高于 ADS-17和 NAK-9。银杏酚酸是极性弱的化合
物 ,在非极性树脂 D4020和 D3520上能较好地被吸
附 ,而在中等极性树脂 ADS-17和极性树脂 NAK-9
上吸附率低 ,因此 ,选择 D4020树脂进行后面的实
验研究。
3. 2　吸附流速对吸附效果的影响:吸附流速主要是
影响溶质向树脂表面扩散 ,从而决定了吸附效果 ,如
果流速太快 ,溶质分子来不及扩散到树脂的内表面 ,
就会发生漏过 ,造成样品的流失。分别取吸附流速为
1, 2, 3, 4 mL /min作比较 ,结果见表 2。
表 2　不同吸附流速的比较
Table 2　 Comparison of current velocity on adsorption
流速 / ( m L· min- 1 ) 泄漏率 /%
1 16. 15
2 17. 87
3 23. 92
4 33. 54
　　从表 2可看出 ,随着吸附流速的加快银杏酚酸
类化合物的泄漏越来越严重 ,但流速过慢会延长生
产周期 ,提高成本 ,流速为 1, 2 mL /min时泄漏率差
异不是很大 ,综合考虑 ,选择吸附流速为 2 mL /
min。
3. 3　乙醇浓度对树脂洗脱性能的影响:分别研究了
70% , 80% , 90%乙醇对银杏酚酸的洗脱效果 ,结果
见表 3。
表 3　洗脱剂浓度对银杏酚酸含量的影响
Table 3　 Effect of eluent concentration on ginkgolic ac ids
乙醇浓度 产物中银杏酚酸含量 /% 得率 /%
70% 35. 17 1. 02
80% 47. 87 2. 75
90% 54. 32 3. 21
　　 90%乙醇洗脱效果最好 ,洗脱峰较集中 ,基本上
可将银杏酚酸类化合物完全解吸下来 ,产物纯度和
得率也较高。
3. 4　原液重复过柱对树脂吸附率的影响:为了让提
取液中的银杏酚酸尽可能地利用而不致于损失 ,研
究了提取液重复过柱的吸附变化情况 ,结果见表 4。
表 4　原液重复过柱对树脂吸附率的影响
Table 4　 Ef fect of solution repeat adsorption
on resin adsorption ratio
过柱次数 银杏酚酸吸附率 /%
1 74. 85
2 87. 74
3 88. 96
　　从表 4可知 ,第 2次过柱后吸附率提高了
12. 89% ,第 3次过柱比第 2次提高了 1. 22% 。从提
高生产效率考虑 ,流出液重复过柱一次即可。
4　讨论
　　大孔吸附树脂具有吸附容量大 ,选择性好 ,易解
吸 ,易再生 ,成本低 ,效率高等优点 ,国内外研究者已
广泛将其用于生物碱、皂苷、黄酮、多糖等的提取 ,取
得了显著的效果 [6 ]。 本实验研究了利用大孔吸附树
·232· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 3期 2003年 3月
脂分离银杏酚酸的方法 ,采用吸附树脂精制银杏酚
酸 ,工艺较简单 ,成本低 ,产率高 ,不存在重金属、有
机溶剂毒性残留的问题。通过对大孔吸附树脂吸附
银杏酚酸性能的筛选 ,确定出性能较佳的 D4020树
脂。得到最优的吸附-解吸实验条件为: D4020树脂
上柱 ,吸附流速为 2 mL /min,原液过柱吸附两次 ,
用 90%乙醇洗脱 ,所得产物的银杏酚酸含量和得率
都较高。
References:
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acids f rom Ginkgo biloba [ J ]. J Hubei Coll Trad it Ch in Med
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健脑灵口服液提取工艺研究
尹一子 1 ,李子健 1* ,高　越 1 ,刘　宁 2
( 1. 吉林大学第一医院 药剂科 ,吉林 长春　 130021; 2. 吉林大学生命科学技术研究所 ,吉林 长春　 130023)
　　健脑灵口服液主要由淫羊藿、益智、甘草等中药
组成 ,具有补肾扶阳、益精生髓、健脑益智 ,主要用于
记忆减退、智力障碍、老年性痴呆。实验发现本方提
取工艺对疗效影响显著 ,本处方中大多数有效成分
为水溶性成分 ,故工艺上采用水煎煮法 ,采用正交设
计试验 ,以淫羊藿中有效成分淫羊藿苷含量为考核
指标 ,对水煎煮法提取工艺进行了优选。同时 ,对益
智中挥发油的提取及乙醇沉淀的浓度进行了考察。
1　仪器、试剂与药品
岛津 LC-10AT 高效液相色谱仪 (日本 ) ;
CLASS-LC10色谱工作站 ,甲醇为色谱纯 ,其他试
剂均为分析纯。淫羊藿苷对照品购自中国药品生物
制品检定所。 淫羊藿 Epimedium koreanum Nakai、
甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.药材购于吉林省
药材公司。
2　方法与结果
2. 1　挥发油提取时间的确定:本处方中益智含有大
量挥发性成分 ,采取水蒸气蒸馏法提取挥发油 ,蒸馏
时间对收油率影响很大 ,故考察蒸馏时间。
　　取益智 500 g,加 3. 5倍量水 ,浸泡 1～ 2 h,充分
浸透后开始蒸馏 ,并在规定时间内量取。结果见表 1。
　　由表 1可见 , 5 h内大部分挥发油被提取出来 ,
为节约能源 ,降低成本 ,将提取挥发油时间定为 5 h。
表 1　益智中挥发油提取时间与收油率关系 (n= 3)
Table 1　Relationship between oil yield and
extraction duration of volatile oil
in Fructus Alpiniae Oxyphyllae (n= 3)
提取时间 /h 收油量 /mL
1 0. 91
2 2. 89
3 4. 10
4 4. 93
5 5. 06
6 5. 18
2. 2　水煎煮条件的优化
2. 2. 1　正交试验设计:本处方中淫羊藿、甘草、益智
等主药均含有大量水溶性成分 ,故工艺上采用了水
煎煮法 ,加水量、煎煮时间、煎煮次数是影响煎煮效
果的主要因素 ,因此采用这 3个因素为考察对象 ,以
淫羊藿中有效成分淫羊藿苷含量为考核指标 ,进行
正交试验优化 (表 2)。
2. 2. 2　色谱条件 [ 1]:色谱柱: Shim-pack CLC-ODS
( 150 mm× 6. 0 mm );流动相: 甲醇-水 ( 64∶ 46) ;柱
温: 30℃ ;流速: 1 mL /min;检测波长: 270 nm;理论
板数按淫羊藿苷峰计算应不低于 4 000。
2. 2. 3　标准曲线的绘制:精密吸取淫羊藿苷对照品
·233·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 3期 2003年 3月
收稿日期: 2002-11-08作者简介:尹一子 ( 1962— ) ,女 (朝鲜族 ) ,吉林延吉人 ,副主任医师 ,理学硕士 , 1984年毕业于沈阳药科大学药学系 , 2000年吉林大学生命科学学院研究生毕业 , 1991年赴日本北理大学研修 ,现为中华医院管理学会药事管理专业委员会委员 ,吉林省药学会理事 ,主要从事新药研制与开发及药代动力学研究。 Tel: ( 0431) 5612573
* 通讯作者