全 文 ：福田河白菊与其他菊花栽培品种 HPLC 指纹特征研究
陈科力, 李　鹏, 叶从进, 詹爱萍Ξ
(湖北中医学院, 湖北 武汉　430061)
摘　要: 目的　比较不同产地各种菊花栽培品种的 H PL C 指纹特征, 为构建福田河白菊的 H PL C 指纹图谱奠定基
础。方法　采用 IN ER T S IL C18柱, 乙腈2水 (含 2% 四氢呋喃, 011% 三氟醋酸)为流动相, 梯度洗脱, 体积流量 1 mL ö
m in; 柱温 30 ℃, 对不同菊花栽培品种以及同属其他相关种进行对比色谱分析。结果　构建了菊花的H PL C 指纹图
谱模式, 该模式显示不同产地菊花品种的 H PL C 图谱具有较高的相似性, 有 15 个共有峰, 其中 4 个为 10 强峰, 2 个
为 10 强峰或次强峰。指纹数据反映了各品种菊花在地域和亲缘关系上的联系以及各自独特的特征。结论　该色谱
系统可以用于构建福田河白菊、湖北金菊等不同菊花品种的指纹图谱。
关键词: 菊花; 野菊花; 神农香菊; 指纹图谱
中图分类号: R 282102　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 09 1050 04
HPLC f ingerpr in ts of F los Ch rysan them i from Futianhe reg ion and other cult iva tion breeds
CH EN Ke2li, L I Peng, YE Cong2jin, ZHAN A i2p ing
(H ubei Co llege of T radit ional Ch inese M edicine, W uhan 430061, Ch ina)
Abstract: Object　To compare the H PL C fingerp rin ts of F lo s Ch rysan them i from differen t hab ita ts1
M ethods　W ith Inertsil C 18 co lum n, gradien t elu te w as perfo rm ed by mob il phase con ta in ing aceton it rile2
w ater ( 2% tetrahydrofu ran, 011% trif luo racet ic acid ) 1 T he flow rate w as 1 mL öm in and co lum n
temperatu re 30 ℃1 D ifferen t b reeds of F los Ch ry san them i from variou s p roducing areas and o ther species
from the sam e genu s w ere comparat ively analyzed1 Results　 It is d iscovered that the H PL C fingerp rin ts
from differen t b reeds of F los Ch ry san them i have a strong comparab ility1 T hey have 16 m u tual peak s and
among them fou r are from the ten strongest peak s, tw o from the ten strongest peak s o r st ronger peak s1
T he fingerp rin t data reflect the aff ilia t ion on p roducing area and genet ic rela t ion sh ip of d iffern t b reeds of
F los Ch ry san them i, and also characterist ic fea tu res of each b reed1 Conclusion 　T h is m ethod can be u sed
to estab lish the H PL C fingerp rin ts of d ifferen t b reeds p roduced in differen t areas1
Key words: F los Ch ry san them i; C 1 ind icum L. ; C 1 ind icum var. a rom a ticum Q 1 H 1 L iu et S1 F1
Zhang; f ingerp rin t
　　菊花是我国的一种常用中药和深受欢迎的保健
饮品。福田河白菊是产于湖北麻城福田河地区的白
菊花, 其加工方法类似于杭白菊, 长期以来, 以杭白
菊之名销往全国各地。近年来, 由于福田河白菊花品
质优异, 产量增加, 已成为一种深受欢迎的菊花品
牌, 药材市场上已广泛称之为“福田河白菊”。为了便
于监控福田河白菊的内在质量, 促进这一品牌商品
的发展, 笔者对福田河白菊进行了指纹特征研究, 并
与其他产地的菊花栽培品种进行了对比分析, 同时
用同属植物野菊花和神农香菊进行对照, 以了解菊
花药材的共同指纹特征和福田河白菊的独特特征,
为构建福田河白菊的H PL C 指纹图谱奠定基础。
1　实验材料
111　仪器与试药: W aters 515 高效液相色谱仪,
(W aters 600 E 四元泵、W aters 996 紫外检测器、
W aters 脱气机)。水为超纯水。绿原酸对照品 (中国
药品生物制品检定所)。乙腈、三氟醋酸、四氢呋喃为
色谱纯, 水为去离子水, 其余试剂均为分析纯。
112　药材: 福田河白菊和其他相关菊花品种样品,
经 笔 者 鉴 定, 分 别 为 菊 科 菊 Ch ry san them um
m orif olium R am at1 的干燥头状花序, 菊科神农香
菊C 1 ind icum var1 a rom a ticum Q 1 H 1 L iu et S1 F1
Zhang 的干燥头状花序, 菊科野菊花C 1 ind icum L 1
的干燥头状花序。来源见表 1。
2　方法与结果
211　色谱条件: InertsilC18柱 (250mm ×416mm , 5
·0501· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 9 期 2004 年 9 月
Ξ 收稿日期: 2003212230
基金项目: 湖北省科技攻关计划重大项目《湖北省地道药材规范化种植及示范基地建设研究》2001AA 304A 菊花子项目
作者简介: 陈科力 (1947—) , 男, 教授, 从事中药资源和中药质量研究。T el: (027) 68889106
　　　　　　　　表 1　样品来源
Table 1　Source of samples
编号 样品 品种 时间 　　　采集或购买地
1 福田河白菊 菊 2001211 湖北麻城福田河镇 (头水花)
2
　
福田河白菊
　
菊
　
2002203
　
湖北麻城福田菊花制品厂
(盒装一等品)
3
　
福田河白菊
　
菊
　
2002203
　
湖北麻城福田菊花制厂 (盒
装二等品)
4 桐乡杭菊 菊 2001211 浙江桐乡 (头水花)
5
　
桐乡杭菊
　
菊
　
2002203
　
浙江惠盛精致白菊花制品厂
(盒装二等品)
6
　
桐乡杭菊
　
菊
　
2002203
　
浙江惠盛精致白菊花制品厂
(盒装一等品)
7
　
盐城杭菊
　
菊
　
2003208
　
武汉市香港路茶叶市场 (散
货一等品)
8 神农香菊 神农香菊 2001211 湖北神农架
9 湖北金菊 菊 2001211 湖北荆州
10
　
湖北金菊
　
菊
　
2003208
　
武昌同济堂药店胭脂路分店
(盒装一等品)
11 贡菊　　 菊 2001211 武昌区药材公司
12 贡菊　　 菊 2003208 武昌同济堂药店胭脂路分店
13 野菊花　 野菊花 2001212 武昌蛇山Λm ) ; 乙氰2水 (含 2% 四氢呋喃, 011% 三氟醋酸) 为
流动相, 梯度洗脱; 检测波长 328 nm ; 进样量 10 ΛL ;
体积流量: 1 mL öm in; 柱温: 30 ℃。
212　对照品溶液的制备: 精密称取绿原酸对照品适
量, 用甲醇溶解制成 1100 m gömL 溶液, 即得。
213　供试品溶液的制备: 取各样品粉末 0150 g (过
一号筛) , 加甲醇 10 mL , 超声提取 30 m in, 滤过, 滤
液过特制 SPE 柱, 将滤液定容至 5 mL 量瓶中, 用
0145 Λm 微孔滤膜滤过, 即得。
214　H PL C 分析: 取样品溶液 10 ΛL , 注入高效液
相色谱仪, 记录色谱图 (图 1) 和各色谱峰的保留时
间, 以面积归一化法计算各色谱峰的相对峰面积
R A , 以各谱图中峰面积最大的 10 个峰为 10 强峰
(表 2)。
215　色谱相对保留指纹谱的构建
21511　相对保留值 Α的计算: 选择一个出峰时间较
居中、在各样品中均存在的组份作为参照峰 (Α= 1)。
求出样品所有峰的相对保留值为: Α= tR iötRa, 式中 tR i
为各组份的出峰时间, tRa为参照峰的出峰时间。
21512　参照峰的选择: 通过与对照品的色谱图比
较, 可知各样品色谱图中 2 号峰为绿原酸峰, 选取 2
号峰后, 保留时间在 (24123±0108) m in, 色谱图中
的第 2 个强峰 (12 号峰) 为参照峰, 计算各峰的相对
保留值 Α。
21513　Α值窗口的设定: 计算各样品色谱图中同一
峰位 Α值的平均值, 作为每个色谱峰的标准Α值。计
算每个峰位 Α值的 R SD 值, 除 1 号峰的 R SD =
图 1　福田白菊 (A)和桐乡杭菊 (B)指纹特征峰
F ig11　F ingerpr in t peaks of F los Ch rysan them i growing
in Futianhe (A) and Tongx iang (B)
113% 外, 其余 Α值 R SD 均小于 1%。所以设定窗
口≤1% , 同一窗口内的色谱峰认定为同一 Α值的色
谱峰, 予以归并, 可信限范围在±1%。
21514　指纹谱的建立: 按标准 Α值的大小排序, 在每
个色谱峰的 Α值下标出该组份用归一化法计算的相
对峰面积值 (R A )。每个样品色谱峰的相对保留值 Α
和相对峰面积R A 构成了其H PL C 指纹特征 (表 2)。
216　重叠率: 以某样品的指纹谱为基准, 以其峰数
与被比较样品的峰数之和为分母, 两者共有峰的两
倍为分子, 求得其百分率即为峰的重叠率。
217　方法学考察
21711　精密度试验: 取样品 (1) 供试品溶液连续进
样 5 次, 测得共有峰 27 个, 各共有峰的相对保留值
的 R SD < 1% , 10 个主要共有峰峰面积的 R SD 为
017%～ 217%。
21712　稳定性试验: 取样品 (1) 供试品溶液在 0、2、
4、12、24 h 分别进样, 测得各共有峰的相对保留值
的 R SD < 1% , 10 个主要共有峰峰面积的 R SD 为
015%～ 316%。
21713　重现性试验: 取样品 (1) 5 份, 按供试品溶液
制备方法制备, 分别进样, 测得各共有峰的相对保留
值的R SD < 1% , 10 个主要共有峰峰面积的R SD 为
111%～ 418%。
3　讨论
311　由表 2 可见, 菊花 (福田河白菊、桐乡菊花、盐
城菊花、贡菊、湖北金菊等) 有 16 个共有峰, 其中 Α
值为 01756、11000、11114、11141 峰为 10 强峰, Α值
为 11061、11373 峰为 10 强峰或次强峰 (相对峰面积
R A 大于 1) , 可以作为不同菊花栽培品种的共同指
纹特征。
·1501·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 9 期 2004 年 9 月
表 2　样品中的 Α-RA 指纹特征
Table 2　Α-RA F ingerpr in t character istics of samples
色谱峰 Α值 R A
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
1# 01651 1112 1108 0191 0166 0175 1120 1126 0175 0165 0150 1104 0168
2# 01756 121662 121592 8139 10170 6197 111073 91123 5123 91683 6180 10132 101393 0197
9　 01956 1191 2133o 2113 1159 1174 2163o
11# 01990 0165 1159 1146 0160 3 　 1125 3 　 3 　 3 　 3 　 3 0153
12# 11000 61833 101683 111623 101083 101823 111422 3174 71733 5196 4135 131283 7175
13# 11024 2114 1195 1198 7124 6122 1176 2109 4126 4127o 3173 1188 1121
14　 11042 3104 2112 1187 2105 1157 1193 1111
15# 11061 1182 1161 1108 1126 1108 1114 1164 3194 5106 4123 1152 1132
17# 11089 4138 8157 131582 131842 201871 8162 1131 2101 1164 1115 5163 2165o
18# 11101 5110 3144 1159 1153 3141 3181 2185 0166 1151 2125 4154 4192
19# 11114 211611 241361 161821 191681 161482 211871 291141 111012 191861 131682 291401 321801
20　 11127 0189 3120 1154 0183 1181 0197 1154
21# 11141 7165 9168 6188 7129 8184 7187 101412 5155 7132 5147 131332 151192
22# 11154 1139 1136 1138 1195 0176 1135 1153 3 　 1108 0174 1113 0151
24# 11207 5187 4108 2153 3114 7175 3147 1178 1105 1103 1104 1195 2104
26# 11219 0162 0160 0149 0163 3 　 0166 2192 0165 0174 0184 1132 0195
27　 11231 3130 3126 3137 1185 1175 3108 3123 0171
29　 11254 0166 0199 1166 1108
31　 11302 0155 1119 3 　 1117 1121
32　 11314 0194 1147 2176 1145 1140 0194 1118 1147 4150
33　 11330 0159 0145 0144 0130 2141 0170 1105 0168 2122 3153
34　 11346 1100 0157 0158 1104
35　 11363 2143 0183 0170 0137 0195 0147
36# 11373 4153 1191 3111 4159 2141o 2138 3194 6100 4193 5150 1177 1100 91292
37　 11406 1110 0165
38　 11412 1113 0148 0161 3113 2170o 2171 2179 0174 0172
39　 11436 4105 0162 0179 0180
41　 11471 0198 8160 0189 4169 5171 7154 2168 2125 81003 6138 8182
42# 11512 1144 1109 1191 0162 0192 1117 3 　 1114 0158 0164 0167 3 　 4178
43　 11526 1163 0175 1130 1139
46　 11592 0185 0180 0172
48# 11715 0194 0133 0181 0138 3 　 0158 3 　 1188 1164 1197 1102 0168 2156
51　 11891 5183 4140 5141 0195
53　 11990 261581 131782 171931 1183 0144
54　 21018 1100 0127 0144 0193 3 　 3 　 1140 231902
55　 21135 0195 1144 2159 1165 1100 1127 451311
　　下划线 (例8160)表示 10 强峰, 角标 (例101412)表示第 1～ 3 强峰, 3 表示相对峰面积≤0130%。# (例 48# )表示菊花共有峰
　　U nderline indicates peak s in ten strongest peak s in area such as 8160; superscrip t indicates first to th ird peak such as 101412;
　　3 indicates the relative peak area ≤0130% ; # indicates m utual peak s of F los Ch ry san them i such as 48#
312　福田河菊据称引种于浙江桐乡, 由表 3 可见,
福田白菊除有菊花的 16 个共有峰外, 还有 7 个共有
峰, Α值分别为 01956、11042、11231、11254、11314、
11363、21018, 其中 Α值为 11231 的峰为 10 强峰, Α
值为 01956、11042 和 11314 的峰为 10 强峰或次强峰
(相对峰面积大于 019% )。这些峰中 5 个峰与杭菊中
桐乡菊花和 (或)盐城菊花共享, 说明福田河白菊接近
杭菊, 但每种菊花都有不同的指纹特征, 可以区别开。
313　根据武昌区药材公司的调查, 湖北金菊据称为
神农香菊和黄山贡菊的杂交品。从表 3 分析, 湖北金
菊与神农香菊有较大相似性, 他们有 27 个共有峰,
其中 Α值为 01756、11000、11024、11061、11114、
11141、11373、11412、11891、11990 等 10 组峰均为
10 强峰或较强峰 (相对峰面积大于 215% ) , 另有 5
组峰均为次强峰 (相对峰面积大于 110% ) , 其色谱
峰相对保留值的重叠率接近 100% , 但神农香菊峰
11990 为最强峰, 相对峰面积为 26% , 高于湖北金菊
约 1 倍, 图形有较大差异。湖北金菊与贡菊也有一定
相似性, 它们有 20 个共有峰, 其色谱峰相对保留值
的重叠率为 85%。
314　野菊花和神农香菊仅仅作为同属不同种植物
的参照标准, 只采了一个样品。由图谱分析, 野菊花
·2501· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 9 期 2004 年 9 月
表 3　菊花不同栽培品种的指纹特征
Table 3　F ingerpr in t character istics of d ifferen t cultivars of F los Ch rysan them i
样　品 Α
福田白菊 01956 11042 (11127) 112313 11254 11314 (11330) (11412)
桐乡杭菊 01956 11042 11127 11231　 (11254) 11314 (11330) (11412)
盐城杭菊 11042 11127 112313 11330 114123
贡　　菊 11314 113303 11412 (11891) 11990
湖北金菊 (11231) 11314 11330 11412 118913 119903
神农香菊 11314 11330 114123 118913 119903
　　下列线加3 表示 10 强峰, 下划线表示 10 强峰或次强峰 (相对峰面积大于 0190% ) , 括号表示部分样品有这一特征峰
　　U nderline and 3 indicate peak s are among ten largest peak s in area; U nderline indicates ten largest peak s o r near to ten largest peak s
( their relative peak area ≥0190% ) ; b rackets indicat that on ly a part of th is cu lt ivar have specific peak
与菊花有明显的区别, 也有共同点。神农香菊作为野
菊花的变种, 与野菊花的指纹数据差异较大, 其保留
时间重叠率为 40% , 而与菊花类指纹数据较为接
近, 与贡菊、杭菊 (桐乡)、福田河白菊的重叠率分别
为 85%、69% 和 71% , 但其尾部峰形又呈现野菊花
的趋势。
315　由表 2, 3 可见, 图谱数据呈现明显的分类学特
征: 其中杭菊系列的 3 种菊花 (福田河白菊、桐乡杭
菊、盐城杭菊)有较大的相似性, 他们的共有峰和强度
较高的峰集中在谱图较前面的高极性部分 (01956～
11314) ; 而贡菊和湖北金菊的共有峰集中在谱图靠后
面的低极性部分 (11314～ 11900) , 其中湖北金菊继
承了神农香菊的品质, 其 Α值为 11990 的峰为第一
或第二强峰, 说明它们含有较大比例的芳香成分。虽
然由于各品种菊花的样本太少, 难以非常准确地总
结各自的独特指纹特征, 但各样品图谱准确反映了
各品种在地域和亲缘关系上的联系和区别。
　　综上所述, 菊花不同栽培品种同一指纹峰的相
对保留值 (Α值) 的 R SD 小于 1% (仅 1# 共有峰的
R SD = 113% ) , 图谱具有较高的稳定性和可比性; 每
一品种又有较多的 10 强峰和次强峰, 峰形也有较大
的相似性; 同时图谱数据也反映了菊花各品种在地
域和亲缘关系上的区别和联系, 并能与其他同属近
缘植物区别开。因此, 该方法可以用于构建福田河白
菊、湖北金菊、杭菊、贡菊等不同产地菊花的指纹图
谱。由于菊花含有大量黄酮和色素, 易氧化, 同时各
样品又采集于不同时间段, 商品等级也不同, 所以不
同品种、不同样品共有峰的峰面积比有较大差异, 所
以制定各栽培品种菊花的指纹图谱需要根据采收时
间、储存条件、商品等级等进一步进行研究。
新疆药用桑树 9 个栽培群体的 RAPD 分析
傅大煦1, 张　辉2, 陈　纹2, 苏　雪2, 孙　坤23 , 陈家宽1Ξ
(11 复旦大学生物多样性科学研究所, 上海　200433; 21 西北师范大学植物研究所, 甘肃 兰州　730070)
摘　要: 目的　从DNA 分子水平上分析新疆药用桑树资源 9 个栽培群体的遗传关系。方法　从 100 个随机引物中
筛选出 10 个引物, 用这 10 个引物做RA PD 扩增, 应用N T SYS 软件对扩增结果进行聚类分析。结果　共扩增出
108 个位点, 其中多态性位点 91 个, 多态比例为 84126% , 各群体间存在较明显的遗传分化。另外, 获得药桑的 8 个
特异位点。结论　RA PD 分析结果与新疆药用桑树资源植物的遗传关系的传统划分是基本一致的。
关键词: 桑树; 栽培群体; RA PD; 遗传多样性
中图分类号: R 282102　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 09 1053 04
RAPD ana lysis of n ine popula tion s of m ed ic ina l m ulberry cult iva ted in X in j iang
FU D a2xu1, ZHAN G H u i2, CH EN W en2, SU Xue2, SUN Kun23 , CH EN J ia2kuan1
(11 Inst itu te of B iodiversity Sciences, Fudan U niversity, Shanghai 200433, Ch ina; 21 Inst itu te
of Bo tany, N o rthw est N o rm al U niversity, L anzhou 730070, Ch ina)
·3501·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 9 期 2004 年 9 月
Ξ 收稿日期: 2004202212
作者简介: 傅大煦 (1963—) , 男, 江苏人, 研究员, 博士, 主要从事天然药物的研究与开发和管理工作。3 通讯作者