全 文 ：温脾汤附子先煎、大黄后下的研究
刘春海 ,杨永华 ,王实强
(湖南省中医药研究院 ,湖南 长沙　 410006)
摘　要: 目的　探讨温脾汤先煎后下的条件。方法　采用 HPCE法测定了温脾汤中乌头碱及大黄游离蒽醌的含量。
结果　附子先煎 30 min,乌头碱的含量能达到安全限量 ;大黄先浸泡 30 min并于汤剂煎好前 10 min加入 ,大黄游
离蒽醌的含量最高。 结论　温脾汤中附子应先煎 ,而大黄宜后下。
关键词: 温脾汤 ;先煎 /后下 ;乌头碱 ;大黄游离蒽醌 ;高效毛细管电泳色谱 ( HPCE)
中图分类号: R283. 2; R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 06 0514 03
Study on first decocted Radix Aconit i Preparata and later
decoctedRad ix et Rhizomea Rhei in Wenpi Decoction
LIU Chun-hai, Y ANG Yong-hua, WANG Shi-qiang
( Hunan Academy of TCM , Changsha 410006, China)
Abstract: Object　 To study the condition o f Wenpi Decoction ( WPD) w ith being decocted first and
la ter added medicinal materials. Methods　 Contents o f aconi tine and free anthraquinone in WPD were de-
termined by HPCE. Results　 Aconi tine could reach the sa fe limi t af ter Radix Aconit i Preparata being de-
cocted 30 min fi rst and the content o f f ree anth raquinone w as the highest af ter Radix et Rhizomea Rhei be-
ing decocted 10 min later. Conclusion　Radix Aconit i Preparata should be decocted first and Radix et Rhi-
zomea Rhei should be decocted la ter in WPD.
Key words: Wenpi Decoction ( WPD) ; be decocted fi rst /la ter added; aconitine; f ree anth raquinone;
HPCE
　　温脾汤处方来源于《备急千金要方》 [1 ] ,处方组
成为大黄 9 g ,附子 9 g,党参 6 g,干姜 6 g,甘草 3
g。温脾汤功能温补脾阳 ,攻下冷积。 方中附子含有
乌头碱类毒性成分 ,为了降低其毒性 ,需进行先煎 ,
而大黄含有蒽醌类成分 ,对热不稳定 ,宜后下。 本实
验采用了毛细管电泳色谱法测定了温脾汤中乌头碱
及大黄 4种游离蒽醌的含量 ,探讨了附子先煎对温
脾汤中乌头碱含量的影响及大黄后下对温脾汤中 4
种游离蒽醌含量的影响。
1　仪器与试药
　　 HPCE-3D高效毛细管电泳仪 (美国惠普公
司 ) ,二级管阵列检测器 ;乌头碱、大黄素、大黄酚、大
黄素甲醚、大黄酸对照品均由中国药品生物制品检
定所提供 ;磷酸为色谱纯 ,水为重蒸馏水 ,其余试剂
均为分析纯。试验药材购自湖南省药材公司 ,并由本
院生药室温俊达副研究员鉴定 ,附子为毛茛科植物
乌头 Aconitum carmichaeli Debx . 子根的炮制加工
器 (白附片 ) ,大黄为蓼科植物掌叶大黄 Rheum
palmatum L. 的干燥根茎。
2　附子先煎的试验研究
2. 1　供试品溶液的制备:取 2倍于汤剂处方量的
药材 ,加 10倍量水进行煎煮 ,附子分别先煎 0, 15,
30, 45, 60 min后 ,再与余药混煎 30 min,过滤 ,药液
分别浓缩、定容至 100 mL,依次编为 1# ～ 5# ;另
取附子单味药材 18 g,加水煎煮 30 min,过滤 ,药液
浓缩、定容至 100 mL,编为 6# 。精密吸取药液 30
mL,加浓氨水调至碱性 ,用乙醚萃取 3次 ( 30, 30,
20 mL) ,挥干乙醚 ,残渣加氯仿 30 mL溶解 ,用 5%
盐酸溶液提取 2次 ( 30, 20 mL) ,弃去氯仿液 ,酸液
层加浓氨水调至 pH 9～ 10,用氯仿提取 3次 ( 30,
20, 20 mL) ,弃去氨液 ,氯仿液蒸干 ,残渣加无水乙
醇溶解并定容至 2 mL。 挥干有机溶剂后 ,加入 0. 1
mo l /mL盐酸溶液 2 mL溶解 ,用 0. 45μm微孔滤
膜过滤 ,即得。
2. 2　色谱条件: 缓冲液: 0. 3 mo l /L磷酸缓冲液
( p H= 6. 8) ;毛细管柱: 内径 50μm,有效长度 56
·514· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 6期 2003年 6月
收稿日期: 2002-05-21作者简介:刘春海 ( 1972— ) ,男 ,湖南溆浦人 ,助理研究员 , 1994年获湖南大学工学学士学位 , 2002年获湖南中医学院中药学专业理学硕士学位 , 1994年至今工作于湖南省中医药研究院 ,研究方向为中药新制剂、新技术。 Tel: ( 0731) 8881651
cm;检测波长: 230 nm;温度: 25℃ ;电压: 20 kV;进
样量: 100 mbar· s。
2. 3　标准曲线的制备:精密称取乌头碱对照品 ,加
无水乙醇配成 58μg /mL的对照品溶液。 精密吸取
对照品溶液 1, 2, 3, 4, 5μL进样 ,以峰面积为纵坐
标 ,乌头碱浓度为横坐标作标准曲线 ,得回归方程:
Y= 1. 005 51X - 2. 266 19, r= 0. 999 8。乌头碱浓度
在 58～ 290μg /mL呈良好的线性关系。
2. 4　结果:测定结果见表 1和图 1。
表 1　不同样品中乌头碱的含量
Table 1　 Content of aconitine in diff erent samples
样品 先煎时间 /min 乌头碱 /μg
1# 0 157
2# 15 155
3# 30 117
4# 45 99
5# 60 65. 5
6# 单煎 246. 6
图 1　温脾汤中乌头碱的 HPCE图谱
Fig. 1　 HPCE chromatogram of aconit ine in WPD
　　结果表明 ,随着煎煮时间的增加 ,乌头碱含量也
随之降低 ,经换算 ,汤剂中乌头碱含量明显低于《中
华人民共和国药典》 2000年版一部乌头碱限量规定
(以 1# 样品为例: 157÷ 18= 8. 72μg /g < 167μg /g ,
即小于 0. 016% )。由于目前各医院调配处方所用附
子一般均为炮制后的附片 ,毒性已较生品大为降低 ,
经先煎 15～ 60 min,再经复方煎煮 ,乌头碱含量已
远低于安全限量 ,综合考虑 ,认为附子入汤剂以先煎
30 min为宜。
3　大黄后下的试验研究
3. 1　供试品溶液的制备: 称取温脾汤 2倍处方量
的药材 ,附子先煎 30 min后 ,再与其他药味煎煮 30
min,大黄浸泡 30 min,分别于汤剂煎好前 5, 10,
15, 20, 25 min后下 ,药液分别浓缩、定容至 200
m L,样品编号为 1# ～ 5# 。精密吸取 30 mL药液分
别加入浓盐酸 5 mL,置水浴上加热 30 min,立即冷
却 ,用乙醚萃取 3次 ( 30, 30, 20 mL) ,乙醚液水浴
蒸干 ,残渣加氯仿溶解 ,定容至 5 mL,以 0. 45μm
的微孔滤膜过滤 ,取续滤液作为供试品溶液。
3. 2　色谱条件 [ 2]:缓冲液: 0. 05 mol /L十二烷基硫
酸钠 -0. 03 mol /L磷酸二氢钠溶液 ( p H= 10) ;检测
波长: 254 nm ,温度: 25℃ ;进样量: 40 mbar· s。
3. 3　标准曲线的制备: 分别精密称取大黄素、大黄
酚、大黄素甲醚、大黄酸对照品 ,配制成不同浓度的
对照品溶液。按上述色谱条件进行测定 ,以峰面积为
纵坐标 ,对照品浓度为横坐标作标准曲线 ,得回归方
程 ,结果见表 2。
表 2　大黄游离蒽醌的线性关系
Table 2　 Linear relation of f ree anthraquinone
名　称 回归方程 r 线性范围
/ (μg· mL- 1 )
大黄素　　 Y= 10. 635 07X+ 14. 190 81 0. 999 3 14～ 70
大黄酚　　 Y= 6. 120 74X+ 9. 236 14 0. 999 5 18～ 90
大黄素甲醚 Y= 2. 493 71X+ 1. 840 86 0. 999 6 20～ 100
大黄酸　　 Y= 19. 102 31X - 28. 929 39 0. 999 4 12～ 60
3. 4　校正因子的测定:以 1 mg /mL的对氨基苯磺
酸溶液为内标 ,与对照品溶液按 1∶ 9比例混合 ,进
行测定 ,结果见表 3。
表 3　大黄游离蒽醌校正因子 ( n= 5)
Table 3　 Corrected factors of f ree anthraquinone (n= 5)
名　称 校正因子 R SD /%
大黄素 0. 260 3 2. 23
大黄酚 0. 464 9 1. 97
大黄素甲醚 1. 099 0 2. 47
大黄酸 0. 151 2 2. 56
3. 5　结果:测定结果见表 4和图 2。
表 4　大黄游离蒽醌含量 μg
Table 4　 Content of f ree anthraquinone μg
样品 后下时间 /min 大黄素 大黄酚 大黄素甲醚大黄酸
1# 5 1 535. 25 1 964. 25 462. 74 568. 15
2# 10 1 915. 65 2 528. 90 511. 66 802. 10
3# 15 1 796. 25 1 980. 60 447. 42 660. 65
4# 20 1360. 65 1 205. 25 322. 55 549. 25
5# 25 604. 35 705. 90 215. 34 377. 45
　　可见 ,大黄后下以煎煮 10 min为宜 ,此时 4种
大黄游离蒽醌的含量均较高。
4　讨论
4. 1　附子属乌头类中药 ,现代药理研究证明 [3 ] ,乌
头类中药具有镇静、镇痛、强心、抗炎、抗肿瘤等作
用 ,由于其主要活性成分乌头碱为剧毒的双酯型生
物碱 ,而且治疗量与中毒量接近 ,临床上为保证用药
安全 ,常采用炮制、久煎等方法以降低其毒性 ,但随
着毒性降低 ,其疗效也随之减弱。
·515·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 6期 2003年 6月
1-内标　 2-大黄素　 3-大黄酚　 4-大黄素甲醚　 5-大黄酸
1-internal s tandard 2-emodin 3-ch rysophanol 4-ph yscion 5-rhein
图 2　温脾汤中大黄游离蒽醌的 HPCE图谱
Fig. 2　HPCE chromatogram of free anthraquinone in WPD
4. 2　试验结果表明 ,附子先煎 15～ 60 min后 ,再经
复方煎煮 ,其乌头碱含量已远低于《中华人民共和国
药典》 2000年版一部乌头碱限量规定 ,日服汤剂中
乌头碱的总量也低于口服乌头碱的中毒限量 [ 4]。综
合考虑 ,认为附子以先煎 30 min为宜 ,能保证临床
用药的安全有效。
4. 3　比较了附子单煎与混煎对乌头碱含量的影响 ,
结果表明混煎液中乌头碱含量明显低于单煎液 ,说
明在复方煎煮过程中有可能发生化学反应 ,导致乌
头碱含量降低 ,从而为附子与干姜、甘草共煎可降低
其毒性的理论提供了试验依据。
4. 4　温脾汤复方中大黄的后下试验结果与单味大
黄煎煮的结果基本一致 [5 ] ,表明大黄无论是单味煎
煮 ,还是在复方后下 ,煎煮时间都不宜过长。 考虑到
大黄若不经浸泡 ,直接投入煮沸的水中 ,容易产生
“寒热隔 ”的效应 [6 ] ,因此在本试验中大黄均浸泡
30 min后再入汤剂。
4. 5　内标物选择对氨基苯磺酸 ,是由于其在水中的
溶解度较大 ,且在 254 nm处有较大吸收 ,对各待测
成分峰不产生干扰 ,重现性好。
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甘草皂苷生物转化的研究
吴少杰 1 ,杨志娟 1 ,朱丽华 1 ,金风燮 2
( 1. 华北煤炭医学院 ,河北 唐山　 063000; 2. 大连轻工业学院 ,辽宁 大连　 114001)
摘　要: 目的　对甘草皂苷糖链进行有选择的部分水解 ,以得到单葡萄糖醛酸基甘草皂苷元。方法　生物酶水解法
和液体发酵转化法。 结果　利用试验菌最佳产酶条件所产的酶水解甘草皂苷 ,获得产物的产率为 23. 7%。 在液体
发酵法中 ,产物的产率约为 10%。 产物可用 85% 乙醇从 HP20树脂柱上洗脱下来 ,同时未转化的甘草皂苷可用
50% 乙醇洗脱而循环利用。 结论　该方法简洁方便 ,提高了甘草皂苷的转化率。
关键词: 甘草皂苷 ;甘草皂苷元 ;单葡萄糖醛酸基甘草皂苷元 ;生物转化
中图分类号: R282. 15; R286. 02　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 06 0516 03
Study on biotransformation of glycyrrhizin
WU Shao-jie, YAN G Zhi-juan, ZHU Li-hua, JIN Feng-xie
( 1. No rth China Coal Medical Co llege , Tang shan 063000, China; 2. Dalian Co lleg e of Light Indust ry , Dalian 114001, China)
Key words: gly cy rrhizin; g lycyrrhetinic acid; monog lucuronyl-glycy rrhetinic acid ( MGGA); bio t rans-
forma tion
·516· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 6期 2003年 6月
收稿日期: 2002-07-19