全 文 ：RP-HPLC法测定珍珠露水草提取物中蜕皮激素的含量
惠玉虎 ,张　立 ,李　健
(西安天诚医药生物工程有限公司 ,陕西 西安　 710075)
　　珍珠露水草提取物是从鸭跖草科植物珍珠露水
草 Cyanotis arachnoides C. B. Cla rke全草中提取
的主要活性物质 ,国内主要用于促使桑蚕龄期缩短 ,
上簇整齐 ,促进吐丝结茧 ,国外用于化妆品中防皱。
蜕皮激素的测定用紫外分光光度法 ,误差较大。因此
本实验建立了蜕皮激素含量的 RP-HPLC测定
方法。
1　仪器与试药
美国 Waters 600型高效液相色谱仪 , Waters
486型紫外检测器 ,北京精瑞计算机技术公司色谱
工作站 ( GS2101型 ) , KQ-250型超声波清洗器。
蜕皮激素对照品由 Sigma公司提供 ,珍珠露水
草提取物为西安天诚医药生物工程有限公司生产 ,
水为二次重蒸馏水 ,其它试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件:色谱柱: Zo rbax SB C18 ( 4. 6 mm×
150 mm , 5μm) ,流动相: 乙腈-水 ( 15∶ 85) ,流速:
1. 0 mL /min,检测波长: 242 nm ,灵敏度: 0. 01
AU FS,柱温: 25℃。在上述色谱条件下 ,蜕皮激素
与杂质完全分离 ,见图 1。
* -蜕皮激素
图 1　蜕皮激素对照品 (A)和珍珠露
　 　水草提取物 ( B)的 HPLC图谱
2. 2　对照品溶液的制备:精密称取蜕皮激素对照品
5. 00 mg ,于 25 mL容量瓶中 ,加 95%乙醇溶解 ,定
容至刻度 ,即得对照品溶液。
2. 3　供试品溶液的制备:精密称取珍珠露水草提取
物样品适量于 25 m L容量瓶中 ,加入 95%乙醇约
20 m L,超声振荡 30 min,静置至室温 ,定容。用 0. 45
μm的微孔滤膜过滤 ,即得供试品溶液。
2. 4　线性关系:分别精密吸取蜕皮激素对照品溶液
2. 0, 4. 0, 6. 0, 8. 0, 10. 0μL,在上述色谱条件下进
样 ,测定峰面积 ,以峰面积为纵坐标 ,进样量为横坐
标 ,绘制标准曲线 ,线性回归方程为 Y= 13. 759X -
0. 589X , r = 0. 999 9。 由结果表明: 蜕皮激素在
0. 298～ 1. 488μg范围内具有良好的线性关系。
2. 5　精密度试验:精密吸取蜕皮激素对照品溶液分
别连续进样 5次 ,每次进样 10μL,测定峰面积 ,
RSD为 1. 73% (n= 5)。
2. 6　重复性试验: 精密称取珍珠露水草提取物适
量 ,按供试品处理方法测定 5份 ,结果平均含量为
25. 38% , RSD为 0. 69% 。
2. 7　稳定性试验:精密吸取蜕皮激素对照品溶液 ,
每隔 1 h进样测定 ,进样量 10μL,结果表明对照品
溶液 5 h内基本稳定 , RSD为 0. 81% 。
2. 8　回收率:精密称取已知含量的珍珠露水草提取
物 ,添加一定量的蜕皮激素对照品溶液 ,按供试品处
理方法测定 ,蜕皮激素平均回收率为 99. 3% , RSD
为 0. 91% (n= 4)。
2. 9　样品测定:精密称取珍珠露水草提取物 10批 ,
按供试品处理方法测定 ,结果平均含量为 25. 32% ,
RSD为 0. 66% 。
3　讨论
检测波长的选择:蜕皮激素对照品溶液在 190～
700 nm波长范围内 ,最大吸收波长为 242 nm,故本
实验选择 242 nm作为检测波长。
流动相比例的确定: 在上述色谱条件下 ,本实验
选择了不同比例的流动相: 甲醇 -水 ( 30∶ 70)、 ( 25∶
75)、 ( 40∶ 60)和乙腈 -水 ( 20∶ 80)、 ( 15∶ 85)进行试
验 ,结果乙腈-水 ( 15∶ 85)分离效果最好。
该方法简便易行、准确可靠 ,可以作为珍珠露水
草提取物中蜕皮激素含量测定的方法。
·426· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 5期
收稿日期: 2001-09-09