全 文 ：长超过 500 nm后 ,吸光度值急剧下降。为减小实验
误差和获得较高的灵敏度 ,选取 490 nm作为测定
波长。
3. 1. 2　显色剂用量的影响: 实验操作方法基本同
上 ,固定 5% NaNO2溶液和 4% NaOH溶液的体积
分别为 0. 40 mL和 4 mL,加入 10% Al ( NO3 ) 3溶
液的量分别为 0. 20, 0. 40, 0. 60, 0. 80, 1. 00, 1. 20
m L。结果表明 ,在其他条件相同的情况下 ,吸光度值
随 Al ( N O3 ) 3溶液加入量的增加而增大 ,但当
Al( NO3 ) 3溶液的加入量大于 0. 40 mL时 ,溶液中悬
浮物出现 , 影响测定 ,故本 实验条件下确定
Al( NO3 ) 3溶液的加入量为 0. 40 mL。
3. 1. 3　溶液酸碱度的影响: 实验操作方法基本同
上 ,固定 5% NaNO2溶液和 10% Al( NO3 ) 3溶液的
体积均为 0. 40 mL和 0. 40 mL,加入 4% NaOH溶
液的量分别为 1. 00, 2. 00, 3. 00, 4. 00, 5. 00 mL。结
果表明 , NaO H溶液的加入量在 3. 00～ 4. 00 mL
时 ,吸光度值较大且变化平缓 ,故本实验条件下采用
NaOH溶液的适宜加入量为 4 m L。
3. 1. 4　显色时间的选择:由吸光度对显色时间的关
系曲线可得 ,显色后溶液的吸光度值有下降趋势 ,在
50 min内 ,计算吸光度值的 RSD < 1% ,故规定测量
在 50 min内完成。
3. 2　标准曲线的制备: 取儿茶素对照品溶液 0. 00,
0. 10, 0. 20, 0. 30, 0. 40, 0. 50, 0. 60 mL,分别置 10
m L量瓶中 ,按 3. 1项下方法进行显色反应 ,以试剂
空白作参比 ,求得线性回归方程为 A= 32. 103 C+
0. 003 3, r= 0. 999 6,线性范围 0. 004 2～ 0. 025 2
mg /m L。
3. 3　重现性试验:取一份样品 ,进行 6次平行测定 ,
结果吸光度值的 RSD为 0. 91% 。
3. 4　回收率试验:采用加样回收法。 在茶多酚量为
0. 059 mg的样品溶液中加入儿茶素对照品 0. 119 6
(n= 3)、 0. 138 0 (n= 4)和 0. 156 4 mg ( n= 3) ,按
3. 2项下的方法进行。 结果平均回收率为 99. 95% ,
RSD为 0. 93% (n= 10)。
3. 5　样品分析:取 3个批号的注射剂 ,分别制备供
试品溶液 ,依法测定吸光度值 ,代入标准曲线的回归
方程 ,换算成以儿茶素计的样品中茶多酚含量。结果
见表 1。
表 1　茶多酚注射剂中茶多酚的含量测定结果 (n= 6)
Table 1　 Content of tea polyphenols in Tea
Polyphenols Injection (n= 6)
批　号 茶多酚 /( mg· mL- 1)
020805 13. 7
030308 11. 0
991223 2. 4
4　讨论
　　实验过程中发现 ,加入 NaOH溶液一方面是为
了调节 pH,使茶多酚和 Al3+ 的络合物在碱性条件
下进一步醌式化 ,产物显橙红色。 另一方面 ,为使络
合反应进行完全 ,还应加入适当过量的 Al3+ ,因为
Al
3+具有两性离子的特征 ,其碱性条件下水解产物
Al( O H) 3易干扰测定 ,为解决此问题 ,溶液中还应
保持适当过量 OH- ,使过量的 Al3+ 以无色透明的
[ Al ( OH) 4 ]
-存在。
　　 NaNO2存在下用 Al3+ 作为络合离子在碱性条
件下显色的方法目前主要用于以芦丁为代表的黄酮
类物质的含量测定。 本法产物最终形成五元螯环结
构 ,是邻二酚羟基的专属性反应。茶多酚的主体及主
要生理活性成分儿茶素类的 6种单体均具有邻二位
酚羟基 ,所以 ,用此法定量专属性好。而且 ,和基于酚
羟基还原性的高锰酸钾滴定法 [2 ]相比 ,本方法具有
更高的选择性。
References:
[1 ]　 GB 8317-87 [S ] . 1992.
[2 ]　 Yu T. Natural TP w ith great developed fu tu re [ J] . Guangx i
Ligh t Ind (广西轻工业 ) , 1996 (3) : 6-11.
HPLC法测定复方五味子软胶囊中五味子甲素的含量
陈光龙
(深圳市宝发区人民医院 ,广东 深圳　 518101)
　　复方五味子软胶囊是由五味子、远志、柏子仁等
经超临界流体萃取制成的制剂。 主要药味五味子具
有上敛肺气、下滋肾阴兼有补肾宁心之功效 ,对中枢
神经系统有双向调节作用 ,与远志、柏子仁等味药配
·529·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 5期 2004年 5月
收稿日期: 2003-10-12
伍 ,具有解表除烦 ,养心安神、镇静助眠的作用 ,用于
精神不安、失眠健忘、虚烦不眠、夜寝多梦等症。五味
子素类是复方五味子软胶囊中主要活性成分之一 ,
因此本实验采用 HPLC法对复方五味子软胶囊中
的五味子甲素进行测定 ,方法简便、快捷、准确 ,结果
满意。
1　仪器与试药
Waters高效液相色谱仪 , Wa ters 2487紫外检
测器 , 515泵 ,杭州英谱 HS色谱工作站。
五味子甲素对照品 (中国药品生物制品检定所
提供 ,归一化法测得纯度为 99. 5% ) ,甲醇为色谱
纯 ,水为二次重蒸水 ,复方五味子软胶囊 (自制 )。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱为 DiamonsilTM C18柱 ( 200
mm× 4. 6 mm , 5μm) ,流动相为甲醇 -水 ( 67∶ 33) ,
检测波长为 254 nm ,流速为 1 mL /min。
2. 2　对照品溶液的制备: 取五味子甲素对照品适
量 ,精密称定 ,加甲醇制成 0. 88 mg /mL的溶液 ,作
为对照品溶液。
2. 3　供试品溶液的制备:取复方五味子软胶囊一粒 ,
取内容物 ,精密称定 ,置 50 mL量瓶中 ,以甲醇充分
溶解 ,并稀释至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液备用。
2. 4　线性关系考察:精密量取五味子甲素对照品溶
液适量 ,用甲醇制成 8. 8, 17. 6, 24. 4, 35. 2, 44μg /
m L溶液 ,分别进样 10μL,各进样两次 ,测定峰面
积 ,求平均值 ,以进样量对峰面积作标准曲线 ,进行
线性回归 ,得回归方程 Y= 38 551 544. 43 X , r=
1. 000。 表明五味子甲素在 0. 088～ 0. 44μg与峰面
积呈良好线性关系。
2. 5　精密度试验: 对同一供试品溶液重复进样 6
次 ,每次 10μL,依法测定五味子甲素的峰面积 ,其
RSD为 0. 27% 。
2. 6　稳定性试验: 取同一供试品溶液 ,依法于 0, 4,
8, 12, 24 h各进样 10μL,测定五味子甲素的峰面
积 ,结果 RSD为 0. 49%。
2. 7　重现性试验:取批号为 20020813的样品 ,称取
6份 ,制备供试品溶液 ,依上述色谱条件 ,分别测定 ,
结果五味子甲素峰面积的 RSD为 0. 84%。
2. 8　加样回收率试验: 取含五味子甲素 0. 012 5
mg /mL的复方五味子软胶囊稀释液 ,精密量取 1
mL,置 5 mL量瓶中 ,分别精密加入一定量的五味
子甲素对照品 ,加甲醇溶解 ,并稀释至刻度 ,摇匀 ,各
取 10μL,进样 ,测定峰面积 ,计算回收率。结果平均
回收率为 100. 52% , RSD为 0. 98%。
2. 9　样品测定:取不同批号的复方五味子软胶囊 ,
制备供试品溶液 ,分别精密量取对照品溶液和供试
品溶液各 10μL,注入高效液相色谱仪 ,测定峰面
积 ,按外标法计算 ,结果见表 1和图 1。
表 1　复方五味子软胶囊中五味子甲素的
含量测定结果 (n= 3)
Table 1　 Content of schizandrin A in Compound　　
Wuweizi Sof t Capsules (n= 3)
批　号 五味子甲素 / ( mg· g- 1)
20020813 1. 35
20020814 1. 34
20020815 1. 42
* -五味子甲素
* -schizandrin A
图 1　五味子甲素对照品 (A)和复方五味子
软胶囊 (B)的 HPLC图
Fig. 1　 HPLC chromatograms of schizandrin A
reference substance (A) and Compound
Wuweizi Sof t Capsule (B)
3　讨论
3. 1　《中华人民共和国药典》2000年版一部中五味
子项下含量测定以五味子醇甲为对照品 ,选用甲醇-
水 ( 13∶ 7)为流动相 ,检测波长为 250 nm,而本实验
的选择结果较理想。
3. 2　样品测定时必须将软胶囊的内容物全部用甲
醇定量转移至量瓶中 ,且胶囊干燥后精密称定 ,否则
易造成较大误差。
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为了加快中药现代化的进程 ,交流中药指纹图谱研究的经验 ,讨论入世后我国中药产业面临的挑战和对策 ,本刊在 2002
年 10月底出版以“中药现代化”和“中药指纹图谱”为主要内容的增刊。欢迎广大读者直接向《中草药》杂志编辑部订阅。定价:
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本刊另有 1996— 2003年增刊 ,欢迎订阅。
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