全 文 ：复生康胶囊质量标准的研究
黄瑞松 1 ,叶云峰 2 ,苏　青 1 ,胡秋萍 3 ,丘记珍 3 ,黄永灵 3
( 1. 广西民族医药研究所 ,广西 南宁　 530001; 2. 广西兽药监察所 ,广西 南宁　 530001; 3. 广西中医学院 ,广西 南宁　
530001)
摘　要: 目的　建立复生康胶囊质量控制方法。 方法　采用薄层色谱法对蒲葵子、喜树果和莪术进行定性鉴别 ,采
用 HPLC法测定喜树碱的含量。 色谱条件为: Dikma Diamonsil C18柱 ( 250 mm× 4. 6 mm, 5μm) ;流动相: 甲醇 -水
( 55∶ 45);流速: 0. 8 m L /min;检测波长: 254 nm。结果　薄层色谱斑点清晰集中 ,喜树碱在 0. 050 6～ 0. 253 0μg具
有良好线性关系 ,平均回收率为 96. 90% , R SD= 1. 74% , (n= 6)。结论　方法灵敏、准确、重现性好、专属性强 ,可作
为复生康胶囊的质量控制标准。
关键词: 复生康胶囊 ;质量标准 ;薄层色谱 ;喜树碱 ;高效液相色谱
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 08 0698 04
Studies on quality standard of Fushengkang Capsule
HUANG Rui-song
1 , YE Yun-feng
2 , SU Qing
1 , HU Qiu-ping
3 , QIU Ji-zhen
3 , HU ANG Yong-ling
3
( 1. Guangxi Institute o f Mino rity Nationality Medicine and Pharmacolog y, Nanning 530001, China; 2. Guangxi Institute
o f Veterina ry Drug Contr ol, Nanning 530001, China; 3. Guangx i Co lleg e of TCM , Nanning 530001, China)
Abstract: Object　 To establish the method for quali ty control o f Fushengkang Capsule. Methods　
Semen Liv istonae Chinensis , Fructus Camptothecae Acuminatae and Rhizoma Curcumae in this capsule w ere
identi fied by TLC. The content of campto thecine w as determined by HPLC. Condition o f HPLC was: Dik-
ma Diamonsil C18 column ( 250 mm× 4. 6 mm, 5μm) the mobile phase w as a mix ture of methanol-w ater
( 55∶ 45) , the flow ra te w as 0. 8 mL /min, and detection w aveleng th at 254 nm. Results　 The spo ts of
T LC were clear and concentrativ e. There was a good linear relationship fo r camptothecine wi thin the range
o f 0. 050 6— 0. 253 0μg. The average recovery w as 96. 90% , RSD= 1. 74% (n= 6) . Conclusion　 This
method is sensi tiv e, accurate, reproducible and exclusiv e. It can be used fo r quali ty cont rol of
Fushengkang Capsule
Key words: Fushengkang Capsule; quality standard; TLC; campto thecine; HPLC
　　复生康胶囊为广西民族药制剂 ,主要由蒲葵子、
喜树果和莪术等民族药和中药组成 ,具有活血化瘀、
健脾消积的功效 ,用于增强胃癌、肝癌放疗、化疗的
疗效 ,改善肝癌患者的临床症状。 为控制该药的质
量 ,本研究对蒲葵子、喜树果和莪术 3味药进行了薄
层鉴别 ,并采用 HPLC法测定该药中的喜树碱
含量。
1　仪器与试药
2695型 HPLC系统 (带自动进样器 ) , 2487紫
外检测器 , 2996型二极管阵列检测器 , Millenium32
数据处理系统 (均为美国 Waters公司 ) ; UV-
2401PC(日本岛津公司 ) ; AE-240型 1 /105电子分
析天平 (瑞士梅特勒公司 ) ; SB2200超声波清洗器
(上海必能信超声有限公司 ) ;薄层板自动涂布器 (重
庆贝尔德仪器技术公司 ) ;定量毛细管 (美国 Dru-
mond Scietific Co. )。
复生康胶囊及各被检药材的阴性制剂 ,由广西
昌弘制药有限公司提供 ;喜树碱对照品由中国科学
院上海药物研究所提供 ;蒲葵子、喜树果、莪术对照
药材由广西民族医药研究所提供 ,经广西中医学院
刘寿养副教授鉴定 ,蒲葵子为 Liv istona chinensis R.
Br.的果实 ,喜树果为 Camptotheca acum inata Dec-
ne.的果实 ,莪术为 Curcuma kwangsiensis S. G.
Lee et C. F. Liang的根茎。甲醇为色谱纯 (天津市
四友生物医学技术有限公司 ) ,水为重蒸馏水 ,硅胶
G、 H为化学纯 (青岛海洋化工厂 ) ,其他化学试剂均
为分析纯。
2　方法与结果
·698· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 8期 2003年 8月
收稿日期: 2002-11-26作者简介:黄瑞松 ,男 ,广西贵港人 ,副主任药师 ,药学部主任 ,从事中草药分析和中药新药研究开发工作。
Tel: ( 0771) 3130064　 E-mail: gxh rs@ hotmail. com
2. 1　薄层色谱定性鉴别
2. 1. 1　蒲葵子: 取本品内容物 1 g ,加甲醇 2 mL,超
声处理 15 min,静置 40 min,吸取上清液滤过 ,滤液
作为供试品溶液。 另取缺蒲葵子的阴性制剂内容物
1 g ,同法制成阴性对照溶液 ;取蒲葵子对照药材粉
末 2 g ,加水 20 mL煎煮 30 min,趁热滤过 ,取滤液
浓缩至 3 mL,加乙醇 6 mL,搅匀 ,密闭 ,静置 4 h,滤
过 ,取滤液蒸干 ,残渣加甲醇 0. 5 mL溶解 ,作为对
照药材溶液 ;吸取上述 3种溶液 8～ 10μL,分别点
于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 G薄层
板上 ,以氯仿 -甲醇-甲酸 ( 5∶ 0. 8∶ 0. 2)为展开剂 ,
展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 1. 5%硫酸铁铵溶液 ,热风吹
至斑点显色清晰。供试品色谱中 ,在与对照药材色谱
相应的位置上 ,显相同的褐色主斑点 ,阴性对照色谱
则无此斑点。 见图 1-A。
2. 1. 2　喜树果:按 2. 1. 1项下方法制备供试品溶
液 ;另取缺喜树果的阴性制剂内容物 1 g ,同 2. 1. 1
项下方法制成阴性对照溶液 ;取喜树碱对照品 ,加氯
仿 -乙醇 ( 1∶ 1)制成 1 mg /mL的溶液 ,作为对照品
溶液。 吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液、对照品
溶液各 1μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘
合剂的硅胶 H薄层板上 ,以氯仿 -丙酮 ( 7∶ 3)为展
开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,置紫外光灯 ( 365 nm )下检
视。供试品色谱中 ,在与对照品色谱相应的位置上 ,
显相同的亮蓝色荧光斑点 ,阴性对照色谱则无此荧
光斑点。见图 1-B。
2. 1. 3　莪术: 取本品内容物 5 g ,加乙醚 10 mL,超
声提取 15 min,静置 30 min,吸取上清液作为供试
品溶液 ;另取缺莪术的阴性制剂内容物 5 g ,同法制
成阴性对照溶液。取莪术对照药材粉末 1 g,加乙醚
5 mL,同法制成对照药材溶液。 吸取上述 3种溶液
各 10～ 15μL,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为
粘合剂的硅胶 H薄层板上 ,以石油醚 ( 60℃～ 90
℃ ) -醋酸乙酯 ( 9∶ 1)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷
以香草醛试液。供试品色谱中 ,在与对照药材色谱相
应的位置上 ,显相同的樱红色主斑点 ,阴性对照溶液
则无此主斑点。见图 1-C。
2. 2　含量测定
2. 2. 1　色谱条件: 色谱柱: Dikma Diamonsi l C18柱
( 250 mm× 4. 6 mm , 5μm);流动相:甲醇 -水 ( 55∶
45) ;流速: 0. 8 mL /min;波长: 254 nm;柱温: 室温。
2. 2. 2　喜树碱对照品纯度检查:归一化法检查:精
密称取喜树碱对照品 10. 05 mg ,置 10 mL量瓶内 ,
加氯仿 -乙醇 ( 1∶ 1)至刻度 ,摇匀 ,作为喜树碱对照
1-供试品　 2-蒲葵子对照药材　 3-缺蒲葵子阴性对照
4-喜树果对照药材　 5-喜树碱对照品　 6-缺喜树果阴性对照
7-莪术对照药材　 8-缺莪术阴性对照
1-sample　 2-Semen Livistonae Chinensis　 3-sample wi thout Se-
men Livistonae Chinensis　 4-Fructus Camptotheca Acumina tae
5-camptoth ecine　 6-sample wi th out Fructus Camptothecae
Acuminatae　 7-Rhizom a Curcumae　 8-sample w ithou t Rh izoma
Curcumae
图 1　蒲葵子 (A)、喜树果 (B)和莪术 ( C)的 TLC图谱
Fig. 1　 TLC chromatograms of Fructus Liv istonae
Chinensis (A) Fructus Camptothecae
Acuminatae (B) andRhizoma Curcumae (C)
品溶液 ;另取氯仿 -乙醇 ( 1∶ 1)作为溶剂对照溶液。
吸取上述对照品溶液和溶剂对照溶液各 10μL,分
别注入高效液相色谱仪 ,按上述色谱条件 ,采用归一
化法进行测定。结果表明:喜树碱对照品溶液色谱中
喜树碱吸收峰的峰面积积分值的相对百分含量为
98. 69% (n= 3) ,扣除溶剂对照溶液吸收峰的峰面
积 ,喜树碱吸收峰的峰面积相对百分含量> 98%。说
明试验所用喜树碱对照品的纯度符合含量测定用的
要求。色谱峰纯度检测:应用二极管阵列检测器对对
照品中的喜树碱色谱峰进行纯度分析。 结果纯度角
小于纯度域值 ,表明色谱分离良好 ,色谱峰纯度高。
2. 2. 3　对照品溶液的制备:精密称取喜树碱对照品
10. 12 mg ,置 200 mL量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,
再精密吸取 1 mL置 10 mL量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,
摇匀 ,即得。
2. 2. 4　供试品溶液的制备:取本品内容物 0. 3 g ,置
50 mL具塞锥形瓶中 ,加入甲醇 25 mL,密塞 ,称定
质量 ,超声处理 60 min,放冷 ,用甲醇补足减失的质
量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,即得。
2. 2. 5　阴性对照溶液的制备:取缺喜树果的阴性制
剂内容物 0. 3 g,按 2. 2. 4项下方法制备 ,即得。
2. 2. 6　系统适用性试验:分别精密吸取上述对照品
溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各 20μL,注入高
效液相色谱仪 ,按上述色谱条件试验。 结果表明 ,供
试品溶液色谱图中均有与喜树碱保留时间相同的吸
收峰 ,且喜树碱峰与相邻杂质峰分离度大于 1. 5,可
·699·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 8期 2003年 8月
达到基线分离。理论板数按喜树碱峰计算不低于
2 000。阴性对照溶液的色谱图则无此吸收峰。见图 2。
* -喜树碱
* -camptoth ecine
图 2　喜树碱 (A)、复生康胶囊供试品 ( B)和
缺喜树果阴性对照 (C)的 HPLC色谱图
Fig. 2　 HPLC chromatograms of camptothecine (A) ,
Fushengkang Capsule (B) and sample
withoutFructus Camptothecae Acum inatae (C)
2. 2. 7　线性关系的考察: 精密称取喜树碱对照品
10. 12 mg ,置 200 m L量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀。
分别精密吸取 0. 5, 1. 0, 1. 5, 2. 0, 2. 5 m L置 10 mL
量瓶中 ,各加甲醇至刻度 ,摇匀。 分别吸取 20μL注
入高效液相色谱仪 ,测定。以峰面积积分值为纵坐
标 ,进样量为横坐标 ,绘制标准曲线 ,得回归方程为
Y= 6× 106X - 1 954. 2, r= 0. 999 9。喜树碱含量在
0. 050 6～ 0. 253 0μg与峰面积呈良好线性关系。
2. 2. 8　精密度考察:精密吸取同一供试品 ( 000809)
溶液 20μL,重复进样 5次 ,测定 ,喜树碱含量相差
不大 ,RSD= 0. 58%。
2. 2. 9　重现性试验: 精密吸取同一批号制剂
( 000809)制备的 6个供试品平行溶液 ,各进样 20
μL,测定 ,计算喜树碱含量。 结果表明 ,喜树碱含量
RSD= 1. 4% 。说明本方法重现性好。
2. 2. 10　稳定性试验: 精密吸取同一供试品溶液
( 000809) 20μL,每隔 2 h进样一次 ,共进样测定 5
次 ,计算各次喜树碱含量 ,结果 8 h内喜树碱含量的
RSD= 1. 37% 。说明供试品溶液中喜树碱在 8 h之
内是稳定的。
2. 2. 11　回收率试验: 采用加样回收法。称取已测得
含量的同一批号制剂 ( 000809) 0. 3 g共 6份 ,分别精
密称定 ,置 50 mL锥形瓶中 ,各加入喜树碱对照品
甲醇溶液 ( 4. 08μg /mL) 25 mL,按 2. 2. 4项下方法
制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液 20μL进样 ,
测定。结果喜树碱平均回收率为 96. 90% , RSD=
1. 74% 。
2. 2. 12　样品测定:取本品 10批 ,按上述方法测定
喜树碱含量。 结果 10批样品的喜树碱在 0. 136～
0. 163 mg /粒 ,定含量为 0. 148 mg /粒。见表 1。
表 1　复生康胶囊中喜树碱含量测定结果 ( n= 3)
Table 1　 Contents of camptothecine
in Fushengkang Capsule (n= 3)
批号 喜树碱含量 /( mg· 粒 - 1) R SD /%
000809 0. 142 1. 77
000810 0. 144 1. 06
010319 0. 149 0. 39
010927 0. 152 2. 01
011008 0. 163 0. 94
011012 0. 153 1. 00
020108 0. 136 0. 85
020310 0. 145 1. 73
020316 0. 147 1. 04
020319 0. 148 1. 40
3　讨论
3. 1　薄层鉴别试验中 ,样品和阴性对照均采用平行
试验。结果表明 ,样品均可检出蒲葵子、喜树果和莪
术 ,且各检出成分不受该药内容物中其他成分的干
扰 ,说明上述各鉴别方法重现性好 ,专属性强。
3. 2　喜树果主要活性成分为喜树碱 ,喜树碱既是抗
肿瘤有效成分 ,又是有毒成分 [1, 2 ]。 故选择喜树碱含
量进行测定 ,对于控制该药临床用药的安全有效具
有重要意义。喜树碱的含量测定方法有紫外分光光
度法和 HPLC法 [3, 4 ] ,本实验选择 HPLC法进行喜
树碱的含量测定。
3. 3　曾分析选择甲醇、 80%乙醇、氯仿、氯仿 -乙醇
( 1∶ 1)作为提取溶剂 ,分别采用 50℃水浴温浸和超
声处理 60 min提取。结果 80%乙醇、氯仿、氯仿 -乙
醇 ( 1∶ 1)无论温浸或超声提取 ,供试品 HPLC色谱
分离效果均较差 ,杂质峰对喜树碱峰均有一定干扰 ;
以甲醇作溶剂温浸提取时 HPLC色谱图中杂质峰
与喜树碱峰亦未能达到基线分离 ;只有以甲醇作为
溶剂超声提取的供试品溶液 HPLC色谱分离效果
较好 ,喜树碱与相邻杂质峰的分离度大于 1. 5,且可
达到基线分离。 故供试品溶液的制备采用甲醇超声
提取的方法。在超声时间方面 ,曾试验以同一批号样
品 ( 000809)分别以甲醇超声提取 15, 30, 45和 60
min。 结果喜树碱含量分别为 0. 114 5, 0. 128 0,
0. 136 3和 0. 141 6 mg /粒 ,与超声时间成正比。 故
采用超声处理时间为 60 min。
3. 4　在 200～ 400 nm波长测试喜树碱甲醇溶液
( 5. 06μg /mL)的吸收光谱。 结果在 254 nm波长处
有最大吸收峰 ,故选择 254 nm作为 HPLC的检测
波长。曾以甲醇 -水 ( 60∶ 40)作为流动相进行试验 ,
·700· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 8期 2003年 8月
结果样品杂质峰对喜树碱峰有干扰。经改用甲醇-水
( 55∶ 45)、流速为 0. 8 mL /min后 ,样品的分离效果
较好。 经对 3批样品 ( 000809、 011008、 011012)进行
试验 ,喜树碱峰与相邻杂质峰的分离度分别为 1. 9,
1. 8和 2. 4,均大于 1. 5,且峰形对称尖锐。 说明甲
醇 -水 ( 55∶ 45)作为流动相适用于该药喜树碱的测
定。以 2. 2. 1项下色谱条件对 3批样品 (批号同上 )
进行测定 ,结果理论塔板数按喜树碱峰计算 ,分别为
3 242, 3 227, 4 100。考虑到用不同品牌和规格的色
谱柱测定可能有偏差 ,故暂定理论塔板数按喜树碱
峰计算应不低于 2 000。
References:
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大孔树脂富集三裂叶蟛蜞菊倍半萜内酯 A和 B的研究
黄雪松 1 ,黄荣春 2
( 1. 暨南大学理学院 食品科学与工程系 ,广东 广州　 510632; 2. 香港中文大学 生物系 ,香港 沙田 )
摘　要:目的　大量富集三裂叶蟛蜞菊倍半萜内酯 A, B( WT A, W TB)。 方法　采用气相色谱法测定 W TA和
WTB,并以 W TA和 W TB的含量、洗脱率、精制度为考察指标 ,研究 D101大孔树脂吸附 W TA和 WTB的工艺条件
及参数。结果　通过大孔树脂吸附后 , W TA和 W TB的洗脱率达 90% , 50%乙醇洗脱部分中 W TA和 W TB的含量
为总固物的 4. 01% ～ 4. 09%。 结论　可以采用大孔树脂富集 W TA和 WTB。
关键词: 三裂叶蟛蜞菊 ;三裂叶蟛蜞菊倍半萜内酯 A, B;大孔吸附树脂 ;气相色谱
中图分类号: R284. 2; R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 08 0701 04
Studies on enriched yield of wedeliatrilolactone A and B
inWedelia trilobata by macroporous resin
HUANG Xue-song
1 , V IN CEN T E. C. Ooi
2
( 1. Depar tment of Food Science and Engineering , Jinan Univ ersity , Guang zh ou 510632, China;
2. Depar tment of Bio lo gy , Chinese Univ ersity of Hong Kong , Shatin, China )
Abstract: Object　 To enrich the yield o f w edeliat rilolactone A and B (W TA and W TB) f rom Wedelia
trilobata ( L. ) Hi tchc. Methods　W TA and W TB were determined by gas chroma tog raphy and thei r elut-
ing ra tio and puri ties were analysed by determining thei r contents in dif ferent f ractions eluted f rom D101
macropo rous resin. Results　 The eluting ra tio of WT A and W TB was increased up to 90% and thei r con-
tents w ere 4. 01%～ 4. 09% in 50% alcoho l f raction. Conclusion　W TA and W TB can be sepa ra ted by
D101 macropo rous resin.
Key words: Wedelia trilobata ( L. ) Hi tchc. ; w edeliat ri lolactone A and B ( WTA and WTB) ; macrop-
o rous resisn; GC
　　三裂叶蟛蜞菊为菊科植物三裂叶蟛蜞菊
Wedelia trilobata ( L. ) Hi tchc.的干燥地上部分 ,在
香港、深圳、广州等地广泛用作花园、路边、池塘等地
的观赏植物。除叶子三裂外 ,其根、茎、花等植物学特
征与我国民间常用的蟛蜞菊 W . chinensis ( Osb. )
M err.类似。因此 ,当地常将其视为蟛蜞菊使用。文
献报道三裂叶蟛蜞菊中含有倍半萜内酯 [1, 2 ]。倍半萜
内酯类物质具有抗肿瘤、细胞毒、刺激组织胺释放、
·701·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 8期 2003年 8月
收稿日期: 2002-09-29作者简介:黄雪松 ( 1957— ) ,男 ,山东汶上人 ,教授 ,博士 ,曾两次赴香港中文大学生物系研修 ,主要从事食品化学、食品功能因子及食品加工工艺方面的研究。
Tel: ( 020) 85226630-6635　 E-mai l: xsh uang@ sdau. edu. cn