全 文 ：称定质量, 用 2% 氢氧化钾溶液补足减失的质量, 摇
匀, 滤过, 取续滤液 2 mL , 置 10 mL 量瓶中, 加 4%
盐酸 2 mL , 40 ℃水浴静置 4 h, 再加 2% 氢氧化钾甲
醇溶液 4 mL , 用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 即得。
214　标准曲线制备: 精密量取 01200 4 m gömL 柴胡
皂苷 a 对照品溶液 015, 110, 210, 310, 410 mL , 置 10
mL 量瓶中, 加 2% 氢氧化钾甲醇溶液稀释至刻度。分
别精密量取上述溶液 210 mL , 置 10 mL 量瓶中, 加
4% 盐酸 2 mL , 40 ℃水浴静置 4 h, 再加 2% 氢氧化
钾甲醇溶液 4 mL , 用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 即得。
照高效液相色谱法 (《中华人民共和国药典》2000 版
一部附录Î D )试验, 分别吸取上述稀释液各 20 ΛL ,
注入液相色谱仪, 记录相应峰面积值。以峰面积值为
纵坐标, 柴胡皂苷 a 的浓度为横坐标, 绘制标准曲
线, 得回归方程A = 6 377 818175 C - 1 721152, r=
01999 7。结果表明, 柴胡皂苷 a 浓度在 01010 02～
01080 16 m gömL 与峰面积线性关系良好。
215　稳定性试验: 取本品 015 g, 制备供试品溶液,
于 0, 1, 2, 3, 4 h 测定峰面积值。结果柴胡皂苷 a 峰
面积的R SD = 018% , 表明在 3 h 内测定是稳定的。
216　精密度试验: 取柴胡皂苷 a 对照品溶液连续进
样 6 次, 测峰面积值。结果其R SD = 114% (n= 6)。
217　重现性试验: 取本品 015 g, 精密称取 5 份, 制
备供试品溶液, 进样测定, 结果柴胡皂苷 a 的含量为
01245% , R SD = 2102% (n= 5)。
218　回收率试验: 取本品 0125 g, 精密称定, 置具塞
锥形瓶中, 精密加入 2% 氢氧化钾甲醇溶液 2215
mL , 加 01200 4 m gömL 柴胡皂苷 a 对照品溶液 215
mL , 密塞, 称定质量, 加热回流 1 h, 放冷, 再称定质
量, 用 2% 氢氧化钾甲醇溶液补足减失的质量, 摇
匀, 滤过。取续滤液 2 mL , 置 10 mL 量瓶中, 加 4%
盐酸 2 mL , 40 ℃水浴静置 4 h, 再加 2% 氢氧化钾甲
醇溶液 4 mL , 用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 即得。计算
得平均回收率为 9910% , R SD = 1180% (n= 5)。
219　样品含量测定: 取柴胡药材, 按供试品溶液方
法处理, 进样测定, 色谱图见图 1。结果见表 1。3 2柴胡皂苷 a3 2saiko sapon in a
图 1　柴胡皂苷 a 对照品 (A)和柴胡 (B)的 HPLC 图谱
F ig. 1　HPLC chromatogram s of sa ikosapon in a refer-
ence substance (A) and Rad ix B up leur i (B)
表 1　柴胡中柴胡皂苷 a 的含量测定结果 (n= 3)
Table 1　Sa ikosapon in a in Rad ix B up leur i (n= 3)
批　号 柴胡皂苷 aö%
1 0. 245
2 0. 341
3 0. 214
3　讨论
　　文献报道的处理方法是强酸条件下 25 ℃放置
16 h, 操作不便, 经系统摸索, 改进为在 40 ℃放置 4
h, 易于操作, 易于重复。
　　本法精密度高, 重现性好, 不仅对柴胡药材中柴
胡皂苷 a 的含量测定可行, 而且可应用于柴胡单味
制剂和复方制剂, 值得推广。
海芋中海芋多糖的组成和含量测定
程　磊, 周秀佳Ξ
(上海中医药大学中药学院, 上海　201203)
　　海芋为天南星科植物海芋 A locasis od ora
(Roxb. ) K. Koch 的干燥根茎或大根芋A . m acr2 orrh iz a (L. ) Scho t t 的根茎[1 ]。具有清热解毒, 消肿散结的功效。现广泛用于治疗各种癌肿, 已成为上海
·446· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
Ξ 收稿日期: 2003209221
作者简介: 程　磊 (1976—) , 男, 江苏阜宁人, 上海中医药大学中药学院在读博士研究生, 已发表论文 16 篇, 主要从事生药学研究。
T el: (021) 50808727　E2m ail: m r. chenglei@ 163. com
地区中医抗癌的最有特色的常用药之一[2 ]。海芋提
取物也被用于治疗免疫抑制疾病[3 ]。近年来, 大量药
理及临床研究表明, 多糖类化合物是一种免疫调节
剂, 能激活免疫受体, 提高机体的免疫功能, 是很好
的抗癌辅助治疗药物[4 ]。有关海芋活性成分的文献
报道很少[5 ] , 未见有关于其多糖成分的研究。本实验
研究了海芋中海芋多糖的提取、分离、纯化方法及多
糖组份和含量测定。
1　材料、仪器和试剂
薄层色谱预制板硅胶 G (福山生化试剂厂) ,
H P8453E 紫外2可见光光谱仪, 透析袋 (德国, 滤过
相对分子质量为 12 000～ 14 000)。
海芋由上海群力草药店提供, 经本院周秀佳教
授鉴定为天南星科植物海芋A . od ora (Roxb. ) K.
Koch 的干燥根茎。重蒸酚 (华美生物工程公司) , 葡
萄糖 [ d 2(+ ) g luco se, 上海生工生物工程有限公
司 ], 木糖[d 2(+ ) xylo se ]、果糖 [D 2(—) fructo se ]购
自中国医药集团上海化学试剂公司, 半乳糖 [D
(+ ) 2galacto se, 上海恒信化学试剂有限公司 ], 鼠李
糖 [ L ( + ) 2rham no se ]、阿 拉 伯 糖 [ L ( + ) 2
arab ino se ]、甘露糖[D (+ ) 2m anno se ]为中国医药集
团上海化学试剂公司 F luka 进口分装, 其余试剂均
为国产分析纯。
2　方法和结果
211　多糖的提取和分离: 海芋根茎粉碎后以 95%
乙醇冷浸, 药渣挥尽乙醇, 沸水提取 3 次, 合并提取
液, 浓缩至小体积, 加 3 倍体积预冷 95% 乙醇, 抽滤
收集沉淀, 用 95% 乙醇清洗后得到粗多糖。粗多糖
经鞣酸液和三氯醋酸去蛋白, 透析, 得总多糖
(AO P )。乙醇分级沉淀, 50% 乙醇沉淀得多糖A
(AO P2A ) , 浓度提至 75% 得多糖B (AO P2B ) , 冷冻
干燥得到褐色冻干粉。
212　多糖的组成分析
21211　多糖的酸水解: 分别取AO P2A、AO P2B 各
10 m g, 加入 2 mo löL 硫酸 310 mL , 110 ℃烘箱中水
解 8 h。水解后, 加入固体碳酸钡中和, 4 000 röm in
离心, 取上清液适当浓缩, 进行 TL C 分析。
21212 　 TL C 分析: 称取 Glu, Xyl, M an, Gal,
F ru, R ha, A ra 各 25 m g, 分别溶于 115 mL 重蒸水
中, 待用。薄层色谱条件: 采用硅胶 G (20 cm ×10
cm )薄层色谱板, 展开剂正丁醇2丙酮2水 (4∶5∶1) ,
显色剂为 Α2萘酚2硫酸试剂[6 ] , 于 100 ℃烘 7 m in。结
果见表 1。初步确定海芋多糖由 3 种单糖: D 2葡萄
糖、D 2半乳糖和D 2甘露糖组成, 甘露糖的R f 值虽然
比多糖B 大了一点, 但仍有重叠区域。
表 1　海芋多糖水解产物和各种单糖的 TLC 色谱数据
Table 1　TLC data of d ifferen t monosacchr ides and poly-
sacchar ide hydrolysis products of A. odora
样　品 　　　　Rf 值 斑点颜色
　Xyl 　　　　0. 61 紫
　Gal 0. 45 玫瑰红
　Glu 0. 519 玫瑰红
　M an 0. 525 玫瑰红
　F ru 0. 47 蓝
　A ra 0. 53 蓝
　Rha 0. 71 橙
　AO P2A
　
0. 45
0. 519 淡玫瑰红
　AO P2B
　
0. 45
0. 519 淡玫瑰红
213　总多糖的含量测定
21311　标准曲线的制备: 精密称取 105 ℃干燥至恒
重的葡萄糖 50 m g, 加水溶解并加至 100 mL 量瓶刻
度, 即得葡萄糖对照品溶液。精密吸取对照品溶液
110, 210, 310, 410, 510, 610 mL , 分别置 50 mL 量瓶
中, 加水稀释至刻度、摇匀。精密吸取上述溶液各
210 mL 于具塞试管中, 加入 110 mL 5% 苯酚溶液,
再加入 510 浓硫酸, 静置 5 m in, 摇匀, 水浴 (100 ℃)
加热 10 m in, 30 ℃再显色 30 m in。冷却后在 490 nm
波长处测定吸光度, 空白对照以蒸馏水代替。以吸光
度为横坐标, 葡萄糖浓度为纵坐标, 绘制标准曲线,
得回归方程为 Y = 161641 X + 01003 4, r= 01999 4。
葡萄糖在 215～ 1510 ΛgömL 与吸光度线性良好。
21312　换算因子的测定: 精密称取 80 ℃干燥至恒
重的总多糖 1012 m g 加水溶解并加至 100 mL 量瓶
刻度, 取 2 mL 按标准曲线项下的方法测定吸光度,
从回归方程中求出多糖供试液中葡萄糖浓度, 按下
式计算换算因子[7, 8 ] , 测得 f = 21570 3。
　　f = W öCD
　　W : 多糖质量 (Λg) ; C: 多糖中葡萄糖的浓度 (ΛgömL ) ;
D : 多糖的稀释倍数。
21313　供试品溶液的制备: 精密称取海芋粗粉 012
g 置 250 mL 平底烧瓶中, 加 95% 乙醇 100 mL , 超
声提取两次, 每次 1 h。滤过、蒸干乙醇, 加水 40 mL
超声提取两次, 每次 40 m in。合并两次提取液, 加水
至 100 mL 量瓶刻度, 备用。
21314　回收率试验: 称取海芋粗粉 011 g, 加入总多
糖 10 m g, 按供试品溶液的制备方法操作, 最后将待
测液稀释 4 倍, 吸取 2 mL 按标准曲线项下方法测
定含量, 计算回收率。结果平均回收率为 98164% ,
R SD 为 3107% (n= 3)。
·546·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
21315　样品含量的测定: 样液稀释 4 倍后, 精密吸
取 2 mL , 按标准曲线项下的方法测定供试液中葡萄
糖含量, 按下式计算海芋中的多糖含量, 结果海芋中
多糖含量为 17129% , R SD = 1181% (n= 3)。
　　多糖含量= CDf öW ×100%
　　W : 样品质量 (Λg) ; C: 样品溶液中葡萄糖的浓度 (Λgö
mL ) ; D : 样品溶液多糖的稀释倍数; f : 稀释因子
3　讨论
　　大多数文献中的单糖 TL C 色谱显色往往采用
苯胺2邻苯二甲酸, 而本实验采用 Α2萘酚2硫酸显色,
因为苯胺2邻苯二甲酸无法显色已酮糖 (果糖) , 且其
显色区别较小, 而 Α萘酚2硫酸颜色区别较明显。在
本实验中, 阿拉伯糖、果糖都因其颜色不同而直接可
以排除。但有两点需注意: 一是显色时间要控制好,
时间过长会使整个薄层板变成黑色, 从第一个斑点
出现至所有斑点出现只在最后 1 m in 完成; 二是显
色结束后应立即记录颜色, 否则颜色会发生变化, 尤
其是紫色和蓝色, 会引起错误的结论。
　　董群等[9 ]提出对于由不同单糖构成的杂多糖,
应采用与杂多糖组成相同的混合单糖制作标准曲
线。但此法的前提是必须先获得单糖组成的物质的
量比, 这通常需要通过高效液相凝胶色谱来确定。本
实验采用的含量测定以葡萄糖代替各种单糖的改良
苯酚2硫酸法仍不失为一种简单易行的方法。
References:
[ 1 ]　Yang C L. P oisonous H erbs (毒药本草) [M ]1 Beijing: Ch ina
P ress of T radit ional Ch inese M edicine, 19931
[ 2 ]　T ian Y, Ke Y, Zhou X J , et a l. Common2used an ticancer
herbs“Sheliugu”in Shanghai [J ]1 J Ch in M ed M ater (中药
材) , 1999, 22 (9) : 43924411
[ 3 ]　Zhou J Y. P rescrip tion of A locasia used to treat imm uno2 sup2
p ression disease [J ]1 W orld P hy tom ed (国外医药·植物药分
册) , 2001, 16 (3) : 12921291
[ 4 ]　W ang J , Gong X G. A dvances in the studies on the an titumo r
activity and imm unomodulating action of po lysaccharides [J ]1
Ch in J B iochem P harm (中国生化药物杂志) , 2001, 22 (1) :
522541
[ 5 ]　Ke Y, Zhou X J, Bo Q M. Studies on the an titumour effect of
A locasia m acrorrh iz a [J ]1 J Ch in M ed M ater (中药材 ) ,
1999, 22 (5) : 25222531
[ 6 ]　Sun W J. E x traction , S ep ara tion and P rep ara tion of N a tu ra l
M ed icina l Comp onen ts (天然药物成分提取分离与制备) [M ]1
2nd ed. Beijing: Ch inese M edico2Pharm aceu tical Science and
T echno logy Pub lish ing House, 19991
[ 7 ]　L iu J R , J iang F S, D an J M , et a l. U ltrasound ex tract and
con ten t determ ination of po lysaccharides of E rem u rus ind erien2
sis [J ]1 Ch in T rad it H erb D rug s (中草药) , 2002, 33 ( 4) :
3222323 1
[ 8 ]　W ang D , L in L , Yuan C L , et a l. A nalysis on con ten t of
po lysaccharides of S em en P lan tag in is [J ]1 Ch in T rad it H erb
D rug s (中草药) , 2002, 33 (10) : 89628971
[ 9 ]　Dong Q , Zheng L Y, Fang J N. M odified pheno l2su lfu ric acid
m ethod fo r determ ination of the con ten t of o ligo2and po lysac2
charides [J ]1 Ch in P harm J (中国药学杂志) , 1996, 31 (9) :
55025531
HPLC 法测定清肺抑火片中黄芩苷的含量
张义友, 傅　红3 , 包淑英, 王振中, 刘洪利, 黄振宇Ξ
(天津市医药教育中心, 天津　300400)
　　清肺抑火片由《中华人民共和国药典》2000 年
版一部清肺抑火丸处方化裁而来, 由黄芩、栀子、知
母、浙贝、黄柏、苦参、桔梗、前胡 8 味中药组成。具有
清热止咳、化痰通便的功效。用于肺热咳嗽、痰黄黏
稠、口干咽痛、大便干燥等疾病。黄芩在处方中为君
药, 黄芩的主要成分为黄芩苷, 测定黄芩苷的含量能
够反映和控制该片剂的内在质量。本实验采用R P2
H PL C 测定其中黄芩苷的含量, 为控制清肺抑火片
的质量提供依据。
1　仪器与试剂
岛津L C—10A T 高效液相色谱仪, SPD—10A
紫外分析仪, CTO —10A S 柱温箱,D GU —12A 脱气
机。浙大N 2000 双通道色谱分析系统, KQ —2500E
数据超声波清洗器。
　　黄芩苷对照品购自中国药品生物制品检定所,
批号: 7152200111; 甲醇、四氢呋喃为色谱纯, 磷酸为
分析纯, 水为二次蒸馏水。
　　各药材由天津市医药教育中心标本室提供, 经
本校王振中药师鉴定。清肺抑火片由天津市中药制
药厂提供。
2　方法与结果
211　色谱条件: Sh im 2pack V P2OD S (150 mm ×
·646· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
Ξ 收稿日期: 2003211218
作者简介: 张义友 (1967—) , 男, 天津市人, 讲师, 1989 年毕业于天津师范大学, 2001 年北京大学研究生课程进修班药学专业结业, 主要
从事药物研究及物理化学、有机化学教学工作。3 通讯作者　T el: (022) 26650800