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枇杷叶抗炎和止咳作用研究
王立为1, 刘新民1, 余世春2, 肖培根1, 杨峻山1Ξ
(11 中国医学科学院 中国协和医科大学药用植物研究所, 北京　100094;
21 安徽省安泰医药生物技术有限责任公司, 安徽 合肥　230088)
摘　要: 目的　研究枇杷叶抗炎和止咳作用的有效成分, 为制定枇杷叶的质量标准提供科学可靠的实验依据。方法
采用二甲苯致小鼠耳肿胀法、二氧化硫引起小鼠咳嗽和枸橼酸喷雾致豚鼠咳嗽模型, 观察枇杷叶不同分离部分及
单体成分的抗炎及止咳作用。结果　P2 和 P3 部分对小鼠耳肿胀法所致的炎症具有较好的对抗作用, 且 P2 部分具
有明显的止咳作用。P2 部分中的枇杷苷É , P3 部分中的总三萜酸和熊果酸均具有良好的抗炎、止咳效果。结论　枇
杷苷É、熊果酸和总三萜酸是枇杷叶抗炎、止咳作用的主要成分, 可作为制定枇杷叶质量标准的定量指标。
关键词: 枇杷叶; 抗炎; 止咳; 枇杷苷É
中图分类号: R 28515　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 02 0174 03
An ti- inf lamma tory and an titussive effects of E r iobotrya j ap on ica
W AN G L i2w ei1, L IU X in2m in1, YU Sh i2chun2, X IAO Pei2gen1, YAN G Jun2shan1
(11 Inst itu te of M edicinal P lan t D evelopm ent, Ch inese A cadem y of M edical Science and Pek ing U nion of M edical Co llege,
Beijing 100094, Ch ina; 2. A nhui A n2tech M edicine & B io logical T echno logy Co. L td. , H efei 230088, Ch ina)
Abstract: Object　To research the act ive componen ts from leaves of E riobotry a jap on ica T hunb. on
an t i2inf lamm ato ry and an t itu ssive effect fo r con tro lling its quality. M ethods　 Inflamm ato ry model induced
by dim ethyl benzene of ear edem a in m ice; tu ssive models induced by SO 2 in m ice, and cough model in2
duced by cit ric acid in gu inea p igs w ere u sed to ob serve the an t i2inf lamm ato ry and an t itu ssive effects of d if2
feren t part from the leaves of E. jap on ica. Results　F ive fract ion s from raw m ateria ls of E. jap on ica w ere
tested on an t i2inf lamm ato ry and an t itu ssive effects w ith m ice and gu inea p igs. T he resu lts show ed that the
ear edem a induced by dim ethyl benzene cou ld be obviou sly reduced w hen ig P2 and P3 105 m gökg in m ice;
T he EJA (eriobo tro side É ) iso la ted from P2, EJB (u rso lic acid) and EJC ( to ta l t riterpen ic acid) iso la ted
from P3 w ere m ain componen ts on an t i2inf lamm ato ry effect. P2 and P3 75 m gökg cou ld reduce the ep isodes
of cough and p ro long the la tency of cough induced in m ice by SO 2. A fter 1 h ig P2 105 m gökg show ed the
relief effects to cough induced by cit ric acid in gu inea p igs, and fu rther experim en ta l resu lts a lso show ed
the EJA , EJB , and EJC are an tagon ist componen ts to cough. Conclusion　T he EJA , EJB , and EJC iso la t2
ed from the leaves of E. jap on ica are m ain an t i2inf lamm ato ry and an t itu ssive componen ts. T he p resen t ex2
perim en ta l resu lts f irst ly p rovide st rong evidence to con tro l quality of E. jap on ica.
Key words: the leaves of E riobotry a jap on ica T hunb. ; an t i2inf lamm ation, an t itu ssive; eriobo tro sid I
·471· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
收稿日期: 2003206212
基金项目:“九五”国家攻关课题 (962903202102)
　　枇杷叶为蔷薇科枇杷属植物枇杷 E riobotry a
J ap on ica (T hunb. ) L indl. 的干燥叶, 具清肺止咳、
降逆止呕之功效[1 ]。药理研究表明枇杷叶具较好的
抗炎和止咳作用[2, 3 ]。临床常用于治疗急、慢性呼吸
道疾病。但长期以来其抗炎、止咳作用的物质基础不
甚清楚。为此, 本实验利用经典的炎症和咳嗽动物模
型, 从枇杷叶粗提物开始, 对其抗炎和止咳作用进行
研究, 以期找到枇杷叶抗炎和止咳作用的有效成分,
为制定枇杷叶的质量标准提供科学可靠的实验依据。
1　材料
111　药材及提取物制备: 枇杷叶 E riobotry a jap on2
ica (T hunb. ) L indl. , 1996 年 12 月购自安徽亳州
中药材市场, 由安徽中医学院中药系周建理教授鉴
定, 药材样本保留于本所生药标本馆。枇杷叶干燥、
粉碎后乙醇提取, 浸膏用硅胶搅拌均匀, 装柱, 硅胶
柱分别用石油醚、二氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇和蒸
馏水顺序洗脱, 先后分离得到 P1, P2, P3, P4 和 P5
共 5 个部分。从 P2 部分分离得到枇杷苷É (eri2
obo tro side É , 纯度≥95% ) ; P3 部分分离得到熊果
酸 (u rso lic acid, 经 H PL C 检测, 其纯度为 9812% )
和总三萜酸 ( to ta l t riterpen ic acid, 经 H PL C 检测,
总三萜酸中含熊果酸、齐墩果酸、2Α2羟基熊果酸、
2Α2羟基齐墩果酸、坡模酸和蔷薇酸 6 个单体, 三萜
酸总量达 8614% )。各样品临用前均用生理盐水
配制。
112　药品: 二甲苯、枸橼酸、二氧化硫等化学试剂均
为市售。阿司匹林肠溶片, 北京双桥制药公司生产,
25 m gö片, 批号 011002; 磷酸可待因片, 青海制药厂
生产, 30 m gö片, 批号 010615; 磷酸苯丙哌林缓释
片, 广东昌益制药有限公司生产, 5217 m gö片, 批号
011101。
113　动物: 清洁级昆明种小鼠, 雄性, 体重 (22±3)
g, 合格证号 (医动字) SCXK110020006; 豚鼠, 体重
(220±20) g, 雌雄兼用, 均由中国医学科学院实验
动物研究所提供。
2　方法与结果
211　枇杷叶的抗炎作用 (鼠耳肿胀法) [4 ]: 选取健
康雄性小鼠, 随机分组, 每组各 10 只。枇杷叶各组
分别 ig 枇杷叶各部位或成分的生理盐水溶液, 对照
组 ig 等体积的生理盐水, 阳性对照组 ig 阿司匹林
生理盐水溶液, 每天 1 次, 连续 3 d, 各组末次给药
后 45 m in, 用涂有二甲苯的棉球接触小鼠右耳 5 s,
15 m in 后脱颈椎处死小鼠。以直径 8 mm 打孔器将
小鼠双耳同部位切下, 精密天平称质量。以左耳与右
耳的质量差为肿胀度, 并计算抑肿率作为抗炎指标,
各组数据进行统计处理。结果见表 1。
　　抑肿率= (对照组肿胀度- 给药组肿胀度) ö对照组肿
胀度×100%
表 1　枇杷叶各部分对小鼠耳肿胀
的抑制作用 (x±s, n= 10)
Table 1　Inh ibition of d ifferen t parts from leaves
of E. j ap on ica on ear edema induced
by dimethyl benzene in m ice (x±s, n= 10)
组　别 剂量ö(m g·kg- 1) 肿胀度öm g 抑肿率ö%
对照 - 　　1212±3178 　　　-
P1 280 1311±4110 　　- 714
P2 105 713±11923 4012
P3 105 812±21083 3218
P4 700 1110±3114 918
P5 210 1218±3145 - 419
对照 - 20180±2149 　　　-
枇杷苷É 40 12190±51323 3 3 37198
20 16170±21983 3 19171
熊果酸 240 10135±31563 3 3 53130
120 9178±51823 3 3 55180
60 12198±81143 3 41140
总三萜酸 400 12199±71383 3 41130
200 14105±61153 36160
100 17117±6159 22150
阿司匹林 150 12124±61013 3 3 44170
　　与对照组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101　3 3 3 P < 01001
　　3 P < 0105　3 3 P < 0101　3 3 3 P < 01001 vs con tro l group
　　实验结果表明 P2 和 P3 部分 ig 给药对二甲苯
所致小鼠耳肿胀有明显抑制作用, 以 P2 部分作用
最强。但 P1、P4 和 P5 部分无明显的抗炎作用。P2
部分分离出的枇杷苷É、P3 部分分离出的总三萜酸
和熊果酸对二甲苯所致小鼠耳肿胀也有明显抑制
作用。
212　枇杷叶的止咳作用
21211　二氧化硫刺激法[5 ]: 取雄性昆明种小鼠, 随
机分组, 每组各 10 只。枇杷叶各组分别 ig 相应的各
部分溶液, 对照组 ig 等体积生理盐水。1 h 后将小鼠
放入通以 8 mL 二氧化硫气体的测试箱内引咳, 以
小鼠出现明显的张口喘息为咳嗽指标, 记录小鼠放
入测试箱内到咳嗽发生的潜伏期并计算止咳率。结
果见表 2。结果表明 P2 和 P3 部分 ig 给药 1 h 后能
明显延长二氧化硫气体所引起小鼠咳嗽的潜伏期
(P < 0105) , 而其他部分则无明显作用。
止咳率= 给药组咳嗽潜伏期对照组咳嗽潜伏期×100%
21212　枸橼酸喷雾引咳法[5 ]: 选取健康豚鼠, 雌雄
各半。豚鼠放入实验测试箱内, 用超声波医用雾化器
喷入1 7 15 % 枸橼酸溶液的雾化气体4 0 s , 计算5
·571·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 2 期 2004 年 2 月
表 2　枇杷叶各部分对二氧化硫所致小鼠
咳嗽的影响 (x±s, n= 10)
Table 2　Effects of d ifferen t parts from leaves
of E. j ap on ica on cough induced
by SO 2 in m ice (x±s, n= 10)
组别 剂量ö(m g·kg- 1) 咳嗽潜伏期ös 止咳率ö%
对照 - 　　4118±1016 　　　-
P1 200 4217±1413 　　10212
P2 75 6514±13113 3 15615
P3 75 5414±13183 13011
P4 500 4913±1216 11719
P5 150 4416±1713 10617
　　与对照组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101
　　3 P < 0105　3 3 P < 0101 vs con tro l group
m in 内豚鼠咳嗽次数, 选取 5 m in 内咳嗽次数超过
10 次的豚鼠为待试动物, 休息 2 d 后用于正式实
验。豚鼠随机分组, 每组 6 只。各组分别 ig 枇杷叶
各部分的生理盐水溶液, 对照组 ig 同体积生理盐
水, 可待因组 ip 可待因生理盐水溶液作阳性对照。
各组给药 1 h ( ip 可待因 015 h) 后, 豚鼠放入实验
测试箱内, 同上法引咳, 喷雾 60 s。记录 5 m in 内豚
鼠的咳嗽潜伏期及咳嗽次数。实验结果见表 3。
表 3　枇杷叶各部分对枸橼酸致豚鼠
咳嗽的作用 (x±s, n= 6)
Table 3　Effects of d ifferen t parts from leaves
of E. j ap on ica on cough induced by
c itr ic ac id in guinea p igs (x±s, n= 6)
组　别
剂量ö(m g·kg- 1) 咳嗽潜伏期ös 咳嗽次数ö(次·5 m in- 1)
对照 - 　 6218± 5112 　 3410±13198
P2 105 16314±117163 1514±101383
P3 105 8416± 3314 2314± 8105
P4 700 5318± 3218 2916± 7153
P5 210 7912± 6216 2910±2018
可待因 15 13416± 48193 1712±10173
对照 - 3615± 33109 28116± 8121
枇杷苷É 30 8610± 56148 12100± 91123 3
60 8810± 331823 11100± 51593 3
可待因 15 12412± 521733 3 5167± 31833 3 3
　　与对照组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101　3 3 3 P < 01001
　　3 P < 0105　3 3 P < 0101　3 3 3 P < 01001 vs con tro l group
　　另取健康豚鼠按枸橼酸引咳法选取待试动物
后, 随机分 9 组, 每组 8 只, 分别 ig 熊果酸和总三萜
酸各剂量的生理盐水溶液, 阳性对照组分别 ig 可待
因和磷酸苯丙哌林生理盐水溶液, 对照组 ig 等体积
生理盐水。各组 ig 给药 1 h 后, 按枸橼酸引咳法测
试, 结果见表 4。
表 4　枇杷叶中熊果酸, 总三萜酸对枸橼酸致
豚鼠咳嗽的作用 (x±s, n= 8)
Table 4　Effects of EJB, EJC from leaves of E.
j ap on ica on cough induced by c itr ic
ac id in guinea p igs (x±s, n= 8)
组　别
剂量ö(m g·kg- 1) 咳嗽潜伏期ös 咳嗽次数ö(次·5 m in- 1)
对照 - 　 42175±19115 　 26100± 5187
可待因 30 107175±211893 3 3 12150± 61613 3
磷酸苯丙哌林 20 95150±471953 13125± 71043 3
熊果酸 240 79175±251453 13175± 51443 3
120 46100±22136 17150± 51413
60 42125±20119 23150±10189
总三萜酸 400 73100±301683 14125± 61753 3
200 70100±311323 17175± 61773
100 64125±35101 21175±10116
　　与对照组比较: 3 P < 0105　3 3 P < 0101　3 3 3 P < 01001
　　3 P < 0105　3 3 P < 0101　3 3 3 P < 01001 vs con tro l group
　　表 3 结果表明 P2 部分 105 m gökg ig 给药 1 h
后能明显延长枸橼酸喷雾引咳法所引起豚鼠咳嗽的
潜伏期, 减少咳嗽次数 (P < 0105) , 而其他部分的作
用不明显。表 3, 4 结果表明 P2 部分中的枇杷苷É
(30, 60 m gökg)、P3 部分中的熊果酸 (120, 240 m gö
kg) 和总三萜酸 (200, 400 m gökg) ig 给药 1 h 后也
能明显延长枸橼酸喷雾所致豚鼠咳嗽的潜伏期、减
少咳嗽次数。
3　讨论
　　本实验结果表明在枇杷叶提取分离的 5 个部
分中, P2 和 P3 部分对鼠耳肿胀法所致炎症和二氧
化硫刺激法所致小鼠咳嗽具有较好的对抗作用, P2
部分对枸橼酸喷雾所致的豚鼠咳嗽也具有明显的止
咳效果。进一步的实验表明 P2 部分中的枇杷苷É、
P3 部分中的熊果酸和总三萜酸是枇杷叶中主要的
抗炎和止咳作用成分。
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