全 文 ：述的研究证明 EB 病毒在 PNC 发生中起着病因的
作用。因此,降低 EB病毒在人群中的感染有可能预
防和降低 PNC的发病率。刘宗潮等[ 4]报道,鼻咽清
毒剂能抑制 EB病毒 EA 的表达。刘宗潮等[ 5]又报
道,茶多酚与亚硒酸钠联合使用能强烈抑制 Raji细
胞 EB病毒 EA 和 B95-8细胞 EB病毒 VCA 的表达。
寻找出无毒或低毒的抗 EB病毒的药物是预防和降
低 PNC 发病率的有效途径。
AEVL 是一种纯中药制剂,成分复杂。按中药
分类属于扶正祛邪、清热解毒药物,且有抗菌及抗病
毒作用。本实验证明 AEVL 在无毒浓度下能抑制
Raji 细胞 EB 病毒 EA 的表达,亦能抑制 B95- 8细胞
EB病毒 VCA 的表达,表明 AEVL 对 EB病毒有
杀伤作用,从作用强度来看,优于鼻咽清毒剂。
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复方鳖甲片预防肺纤维化大鼠细胞外基质过度形成的实验研究
张东伟, 王继峰X ,牛建昭,李　健, 杨美娟,金　焕,高宝华
(北京中医药大学 细胞与生化实验室, 北京　100029)
摘　要:目的　研究复方鳖甲片预防盐酸博莱霉素致大鼠肺纤维化细胞外基质过度沉积的作用。方法　SD 雄性大
鼠气管滴注盐酸博莱霉素造模,第 2 天 ig 复方鳖甲片 1. 4, 0. 7, 0. 35 g/ kg, 每周连续给药 6 d,给药4 周,观察第28
天时大鼠肺组织羟脯氨酸和血清中Ë型胶原 (Ë-C)、Ì型胶原 (Ì-C)及层黏连蛋白( LN )和透明质酸( HA)的含
量, 同时取肺组织行HE、Masson 染色。结果　复方鳖甲片可降低肺纤维化大鼠血清Ë-C、Ì-C, LN 及 HA 的含量,
降低肺组织纤维性增生。结论　复方鳖甲片可能是通过降低肺纤维化大鼠细胞外基质含量而发挥治疗作用。
关键词:复方鳖甲片;肺纤维化;Ë型胶原;Ì型胶原;层黏连蛋白;透明质酸
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670(2004)04 0545 04
Exper imental study on protection of Compound Biej ia Tablet on exaggerated
extracellular matr ix accumulation of pulmonar y fibrosis rat s
ZHANG Dong-wei, WANG Ji-feng, NIU Jian-zhao, LI Jian,
YANG Mei-juan, JIN Huan, GAO Bao-hua
(Laboratory of Cell and Biochemist ry, Beijing Universit y of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029, China)
Key words: Compound Biejia T ablet ; pulmonary fibrosis; Ë-collagen (Ë-C) ;Ì-collagen (Ì-C) ;
laminin (LN) ; hyaluronic acid (HA)
　　肺组织的细胞外基质与肺纤维化关系最为密
切[ 1]。肺纤维化可由多种疾病引起,致病因素首先造
成肺组织损伤,在修复过程中,细胞外基质成分首先
填补损伤肺组织, 当其过度沉积时,可形成肺间质纤
维化。此病理过程导致肺组织重建, 肺结构破坏,肺
泡膜增厚,换气面积减少,最终发生呼吸衰竭。细胞
外基质与炎症也有密切关系[ 2]。因此研究细胞外基
质形成对于认识上述疾病的发病机制及对该病诊
断、防治均具有重要意义。复方鳖甲片由鳖甲、当归、
三七、冬虫夏草、黄芪、板蓝根、连翘等中药组成, 本
实验室研究表明该方对肝纤维化有较好的疗效。为
探讨其对肺纤维化的作用,本实验以博莱霉素 A5
·545·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 35 卷第 5 期 2004年 5月
X 收稿日期: 2003-08-03基金项目:国家自然科学基金重点项目 ( 30130220) ;教育部首批非典科技攻关项目 ( 15)作者简介:张东伟( 1974—) ,男,河南洛阳人,北京中医药大学 2001级博士研究生,研究方向为中药作用的生化机制。
E-mail: zhdw1006@163. com
* 通讯作者　Tel: ( 010) 64286995　E-mail : wangjifengb eijin@163. com
诱导大鼠肺纤维化模型,研究该方对肺纤维化大鼠
细胞外基质的影响,以期为临床应用提供基础。
1　材料
1. 1　动物: SD 大鼠,雄性,体重 ( 206±16) g。实验
动物和饲料购自北京维通利华实验动物技术有限公
司。动物饲养在洁净级动物房。
1. 2　药物:复方鳖甲片原料粉, 即复方鳖甲软肝片
[国药准字 Z-( 1999) Z-102号]不含赋形剂原料粉,
由内蒙古福瑞制药有限公司提供, 批号 20020501。
醋酸强的松, 广东华南制药厂生产,批号 011201。注
射用盐酸博莱霉素, 日本化药株式会社制造, 批号
X12100。
1. 3　主要仪器: GC—911 C-放射免疫计数器 (中国
科技大学实业总公司) , MD—100 半自动生化分析
仪 (华士信医疗设备集团公司)。
2　方法
2. 1　大鼠肺纤维化模型制备:参考陈佰仪等[ 3]方法
并加以改进。取 SD 大鼠 70只, 1. 5%戊巴比妥钠 ip
麻醉 ( 0. 25 mL/ 100 g) 后将大鼠固定, 颈部消毒,
切开颈部皮肤, 逐层剥离, 暴露气管,然后向气管内
注入 0. 3 mL 博莱霉素生理盐水溶液 ( 1 mg/ 200
g) ,继续注入 0. 3 mL 空气,注后立即将动物直立并
旋转,使药液在肺内均匀分布。其中假手术组大鼠注
入等体积的生理盐水, 正常组大鼠不做任何处理。
2. 2　分组与给药:大鼠造模后第 2天, 各组大鼠 ig
给药。正常组、假手术组、模型组大鼠分别 ig生理盐
水 14 mL/ kg, 阳性药物组 ig 醋酸强的松混悬液
0. 56 mg/ kg。复方鳖甲片高、中、低剂量组分别 ig
1. 4, 0. 7, 0. 35 g/ kg 复方鳖甲片原料粉混悬液。每
周连续给药 6 d,给药 4 周。到第 28天时, 1. 5%戊
巴比妥钠 ip 麻醉 ( 2. 5 mL/ kg) 大鼠, 固定,腹主动
脉取血,分离血清。同时取肺脏做相应检测。
2. 3　血清学指标测定:将取出的血液以室温 3 000
r/ min离心 15min, 取其上清液即为血清。采用放免
法测血清中Ë型胶原(Ë-C)、Ì型胶原(Ì-C)及层
黏连蛋白( LN)和透明质酸(HA)的含量。
2. 4　肺组织羟脯氨酸测定:取适量肺组织放入冰冷
生理盐水中漂洗除去血液, 滤纸拭干称其湿质量,适
度剪碎后匀浆,按杨陟华等[ 4]方法进行测定。
2. 5　肺组织病理学检查:将所取肺组织抽真空后用
15%甲醛固定,一周后进行包埋、切片。病理切片按
常规方法进行 HE 染色,按文献[ 5]方法进行Masson
染色。按 Szapiel[ 6]等方法确定肺泡炎( - ～+ + +
级)及肺纤维化( - ～+ + + 级)的程度,并参照张东
伟等[ 7]提供标准将肺泡炎和肺纤维化分级。
2. 6　数据统计: 数据用 x ± s 表示, 均 采用
SPSS10. 0 统计软件进行单因素方差分析。
3　结果
3. 1　大鼠体重变化情况:实验时分别在第 1, 14, 28
天称大鼠体重,结果见表 1。结果显示:与正常组及
假手术组比较,在第 14天时, 模型组,阳性药物组,
复方鳖甲片高、中、低剂量组大鼠体重呈下降趋势,
差异显著 (P < 0. 05)。第28天时, 模型组,阳性药物
组,复方鳖甲片高、中、低剂量组大鼠体重明显升高,
但同正常组及假手术组相比有一定的差异。
表 1　各组大鼠体重变化 (x±s, n= 10)
Table 1　Change of body weight of r ats in dif f erent
groups ( x±s, n= 10)
组　别 剂　量
/ ( mg·kg- 1)
体　重/ g
第 1 天 第 14 天 第 28天
正常 　- 207. 10±9. 04 311. 80±27. 19 367. 40±28. 53
假手术 　- 201. 10±7. 53 298. 10±30. 62 383. 00±24. 50
模型 　- 201. 20±9. 99 214. 70±36. 46* * △△ 308. 40±34. 41* △△
阳性药物 0. 56 206. 30±8. 74 220. 60±35. 56* * △△ 313. 60±36. 56* △△
复方鳖甲片 1 400 203. 30±9. 86 226. 40±44. 38* * △△ 341. 20±31. 25▲
700 203. 50±9. 69 229. 60±26. 80* * △ 334. 40±31. 59△
350 205. 74±9. 74 245. 80±34. 74* * 337. 00±32. 00△
　　与正常组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01; 与假手术组比较:
△P < 0. 05　△△P < 0. 01; 与模型组比较: ▲P < 0. 05　▲▲P < 0. 01;
与阳性药物组比较: # P < 0. 05　# # P < 0. 01
　　* P < 0. 05　* * P < 0. 01 vs nor mal gr ou p; △P < 0. 05　△△P <
0. 01 vs Sham gr oup; ▲ P < 0. 05　▲▲P < 0. 01 vs model group;
# P < 0. 05　# # P < 0. 01 vs pos it ive med icine grou p
3. 2　大鼠血清中Ë-C,Ì-C, LN 和 HA 的含量测
定:结果见表 2。与正常组及假手术组比较, 第 28天
时模型组大鼠血清中Ë-C,Ì-C, LN 和 HA 的含量
明显升高 (P < 0. 01)。复方鳖甲片高、中、低剂量组
均可降低肺纤维化大鼠Ë-C,Ì-C, LN 和 HA 的含
量,尤以中剂量组效果显著 (P< 0. 05, 0. 01)。
3. 3　肺组织匀浆羟脯氨酸含量测定:结果见表 3。
与正常组及假手术组比较,第 28天时肺纤维化模型
大鼠肺组织羟脯氨酸含量显著升高 (P < 0. 01) ;与
模型组比较,阳性药物组,复方鳖甲片高、中、低剂量
组大鼠肺组织羟脯氨酸含量均下降 (P < 0. 01)。正
常组与假手术组比较差异不显著。
3. 4　病理组织学检查:各组大鼠肺组织病理学检查
结果见表 4。解剖后肉眼观察,模型组大鼠肺脏质地
坚实,颜色暗红,表面粗糙不平,质地较硬,触之有橡
胶感,有囊肿、灰白色纤维素条和瘢痕, 仔细观察双
肺可发现有板块状病变灶, 浅黄褐色病灶大小为
0. 3mm×0. 3mm, 每只大鼠肺部大约有5～6处;
·546· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 35 卷第 5 期 2004年 5月
表 2　各组大鼠血清中Ë-C, Ì-C, LN 和 HA 含量 (x±s, n= 10)
Table 2　Levels of Ë-C, Ì-C, LN , and HA in serum of ra ts in dif fer ent groups ( x±s, n= 10)
组别 剂　量/ ( mg·kg- 1) Ë-C/ ( ng·mL - 1) Ì-C/ ( ng·mL - 1) LN/ ( ng·mL- 1) HA/ (n g·mL- 1)
正常 　- 126. 65±16. 80 93. 84±11. 76 70. 92± 9. 23 55. 10± 4. 62
假手术 　- 128. 88±17. 85 95. 48±12. 74 71. 28±10. 09 55. 90± 4. 90
模型 　- 204. 30±26. 00* * △△ 149. 53±23. 39* * △△ 95. 86±13. 91* * △△ 91. 50±12. 39* * △△
阳性药物 0. 56 178. 92±21. 63* * △△ 130. 14±22. 42* * △△▲ 81. 83±11. 42* △▲ 73. 20± 9. 58* * △△▲▲
复方鳖甲片 1 400 185. 48±25. 12* * △△ 142. 43±24. 55* * △△ 88. 28±10. 70* * △△ 81. 50±11. 70* * △△▲#
700 173. 89±22. 21* * △△▲▲ 117. 03±20. 98* * △△▲▲ 82. 96± 9. 41* * △△▲ 60. 90± 7. 34▲▲# #
350 178. 86±22. 51* * △△▲ 131. 23±20. 13* * △△▲ 87. 20±10. 14* * △▲ 73. 70±10. 02* * △△
　　　表注同表 1
　　　Notes are same to T able 1
表 3　各组大鼠肺组织匀浆羟脯氨酸含量 (x±s, n= 10)
Table 3　Content of hydroxyproline in lung homogenates
of r ats in diff er ent groups (x±s, n= 10)
组　别 剂　量/ (mg·kg- 1) 羟脯氨酸/ ( mg·g- 1)
正常 　- 1. 09±0. 09
假手术 　- 1. 11±0. 09
模型 　- 3. 05±0. 27* * △△
阳性药物 0. 56 1. 89±0. 17* * △△▲▲
复方鳖甲片 1 400 2. 75±0. 27* * △△▲▲# #
700 1. 92±0. 16* * △△▲▲
350 2. 35±0. 21* * △△▲▲# #
　　表注同表 1
　　Notes are same to T able 1
正常组和假手术组双肺色泽正常, 表面光滑弹性好;
阳性药物组,复方鳖甲片高、中、低剂量组肺表面颜
色略暗,粗糙程度明显低于模型组,斑块状病灶数量
明显减少,每只大鼠肺部仅见 1～2 处,触之肺弹性
接近于正常组, 说明复方鳖甲片有明显改善盐酸博
莱霉素所致肺组织结构改变的功能。显微镜下观察
可见:正常组大鼠的肺支气管、终末性细支气管结构
正常。终末性细支气管上皮为单层柱状上皮, 大部分
上皮可见纤毛, 固有膜外有完整的环形平滑肌。呼吸
性细支气管可见单层柱状或立方状上皮,管壁可见
少许肺泡开口, 肺泡隔末端成球形膨胀, 肺泡壁上
表 4　各组大鼠肺泡炎和肺间质纤维化病理学分级结果 (n= 10)
Table 4　Pathological gr ading/ scor ing of alveolitis and inter stitial fibrosis in dif f er ent groups (n= 10)
组　别 剂　量
/ ( mg·kg- 1)
肺　泡　炎
- + + + + + +
肺　间　质　纤　维　化
- + + + + + +
正常 　- 10 0 0 0 10 0 0 0
假手术 　- 9 1 0 0 10 0 0 0
模型 　- 0 1 5 4 0 1 6 3
阳性药物 0. 56 1 7 2 0 2 4 4 0
复方鳖甲片 1 400 1 4 3 2 1 4 4 1
700 2 6 2 0 2 7 1 0
350 1 4 4 1 1 5 4 0
É、Ê型肺泡细胞数量和结构正常。第 28天时模型
组大鼠仍有一定数量的炎性细胞浸润(如巨噬细胞、
淋巴细胞、嗜酸粒细胞等) , 肺泡结构破坏, 肺泡间隔
显著增厚,部分肺泡腔扩张呈囊状,肺泡壁断裂,部
分肺泡腔萎陷,腔内可见渗出物淤积,沿终末性细支
气管、细支气管周边可见局灶性炎性病灶, 大量纤维
增生; Masson 染色下胶原纤维增多,有明显的间质
纤维化。阳性药物组及复方鳖甲片各剂量组炎症及
纤维化均较轻, 其中阳性药物组、复方鳖甲片中、低
剂量组病变程度接近于正常组, 假手术组和正常组
无明显差异。表明复方鳖甲片有明显减弱纤维积聚,
抗纤维化作用。
4　讨论
　　肺纤维化 ( IPF) 是多种肺疾病发展到晚期的
共同病理变化,目前临床尚无理想治疗方法。中医学
将本病归入“肺痿”、“喘证”等范畴,虚、痰、瘀、喘为
其主要病机特点, 其中肺阴不足、痰阻肺络、瘀血阻
滞、内闭喘脱又为临床多见的病变类型。鳖甲能软坚
散结、滋阴潜阳,黄芪能补肺气虚固表, 冬虫夏草能
补肺益阴化痰, 当归、三七活血化瘀定喘,板蓝根、连
翘清热解毒,诸药合用,具有补肺益阴、软坚散结、活
血通络、清热解毒等功效。该方扶正祛邪,标本兼顾
体现了补益气阴、养肺活血定喘的指导思想。
肺内的细胞外基质成分主要有 4种:胶原蛋白、
弹性蛋白、蛋白多糖及糖黏连蛋白。这些成分相互混
合交织, 使组织成为一个整体并具有一定的硬度和
韧性, 藉以完成相应的生理功能[ 1]。基底膜主要由
Ì-C、LN、纤黏连蛋白、肝素硫酸软骨素蛋白多糖等
构成。基底膜成分的聚积可刺激炎症细胞的吸附和
活化[ 8]。基底膜的裂解在肺纤维化的病理中也尤为
·547·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 35 卷第 5 期 2004年 5月
重要[ 9]。Ë-C分布于肺间质,Ì-C分布于基底膜和
肺间质。而胶原蛋白是由 3条不同或相同的肽链构
成的三螺旋结构, 富含脯氨酸、羟脯氨酸、甘氨酸、丙
氨酸, 因此测定肺组织羟脯氨酸含量可以反映肺组
织胶原蛋白及细胞外基质的含量[ 10]。HA 是间质中
的一种主要的糖胺聚糖,也是细胞外基质的一种主
要成分。肺泡间质中 HA 积累提示 HA 很可能在肺
纤维化早期肺泡炎阶段的肺间质水肿中起重要作
用。也有人认为早期的 HA 积聚是增生的炎性细胞
和成纤维细胞必需的基质,因而有助于纤维组织的
形成[ 11]。实验研究表明在应用博莱霉素后肺内间质
性胶原的含量是增高的,肺纤维化大鼠血清中Ë-C,
Ì-C, LN , HA 明显升高,说明肺内细胞外基质的合
成明显增加, 而且还有炎症存在。肺纤维化大鼠给予
复方鳖甲片后细胞外基质各成分的含量可明显降
低,中、低剂量效果较为明显, 这可能是因为高剂量
的药物 ig 时吸收度不好而不能发挥较好的疗效。本
研究提示复方鳖甲片通过影响细胞外基质的合成起
到治疗肺纤维化的作用。
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御风胶囊对脑缺血-再灌注损伤大鼠的预防性神经保护作用
赵　瑛,张　季, 金　成X
(哈尔滨商业大学,黑龙江 哈尔滨　150076)
摘　要:目的　探讨御风胶囊对脑缺血-再灌注损伤的神经保护作用及其机制。方法　实验分为模型组、假手术组、
御风胶囊高、低剂量组和阳性药对照组。线栓法制备大鼠脑缺血-再灌注模型, 分别观察脑缺血 2 h 再灌注 1 h 及
24 h 神经细胞凋亡、凋亡相关基因 p53、bcl-2、C-fos 表达及脑组织丙二醛 (MDA) 含量、超氧化物歧化酶 (SOD)、
过氧化氢酶 (CAT) 活性变化。结果　御风胶囊能显著抑制脑缺血-再灌注所致的神经细胞凋亡、抑制脑缺血-再灌
注后 p53 的表达并诱导 bcl-2 表达,与模型组比较差异显著 ( P< 0. 05) ;显著抑制脑缺血-再灌注后MDA 的产生,
提高 SOD 活性 (P < 0. 05) ;并对 CAT 活性呈现一定的保护作用。结论　御风胶囊对缺血-再灌注脑组织具有一定
的神经保护作用, 其机制与其抑制脑缺血-再灌注后神经细胞凋亡,调节凋亡相关基因表达及抗脂质过氧化有关。
关键词:御风胶囊; 缺血-再灌注; 脑; 凋亡; 凋亡相关基因; 脂质过氧化
中图分类号: R286. 1　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670(2004)05 0548 04
Neural pr otect ion of Yufeng Capsule on cerebral ischemia-reperfusion damage in rats
ZHAO Ying, ZHANG Ji, JIN Cheng
(Harbin U niver sity of Commerce, Harbin 150076, China)
Key words: Yufeng Capsule; ischemia-reperfusion; cerebrum; apoptosis; related gene of apoptosis;
lipid peroxidat ion
·548· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 35 卷第 5 期 2004年 5月
收稿日期: 2003-09-05作者简介:赵　瑛( 1960—) ,女,吉林怀德人,现为哈尔滨商业大学药学院教授,医学博士,主要研究方向为中医药防治心脑血管疾病。
T el: ( 0451) 82195000