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Effects of glycosides of cistanche on focal cerebral ischemic rats

肉苁蓉总苷对大鼠局灶性脑缺血损伤的影响



全 文 :可能的作用机制是通过西红花酸的抗氧化作用, 而
发挥膜保护作用, 从而阻止LDH 外漏, 保护线粒体
膜, 提高线粒体膜电位和琥珀酸脱氢酶活力, 保证心
肌细胞的能量供应。
References:
[ 1 ] Ferrai R , A gno lett i L , Com in i L , et a l. O x idative stress
during m yocardial ischem ia and heart failu re [J ]1 E u r H eart
J , 1998, 19 (Supp l B) : B22B111
[ 2 ] W ang D Q , She W M , T ian Y P, et a l. Cell dam age in Ch i2
nese H am ster V 79 cells treated w ith hydrogen perox ide [J ]1
P rog B iochem B iop hy s (生物化学与生物物理进展) , 1995,
22 (3) : 27822811
[ 3 ] M aclellan W R , Schneider M D 1 P rogramm ed cell death in
cardiovascu lar b io logy and disease [J ]1 C ir R es, 1997, 81
(2) : 13721441
[ 4 ] Gao W Y, Zhu D Y1 A dvances in chem ical and pharm aco lo2
gical studies on C rocus (C rocus L. ) [J ]1 Ch in T rad it H erb
D rug s (中草药) , 1999, 30 (5) : 38923911 [ 5 ] Gong G Q , L iu T Z, L iL W , et a l. A n tiox idative activity ofcrocetin in v itro [J ]1 Ch ina P harm U niv (中国药科大学学报) , 2001, 32 (4) : 30623091[ 6 ] W ang B H , Po lya G M 1 Selective inh ib it ion of cyclic AM P2dependen t p ro tein k inase by amph iph ilic triterpeno ids and re2lated compounds [J ]1 P hy tochem istry , 1996, 41 (1) : 552631[ 7 ] Rao S Y, Q ian Z Y1 Cardiop ro tective effect of crocetinagainst low gluco se and hypox ia in ju ry in cu ltu red rat cardiacm yocytes [J ]1 Ch in T rad it H erb D rug s (中草药) , 2004, 35(4) : 42724291[ 8 ] M ak I T , W eglick i W B1 P ro tection by Β2b lock ing agen tsagainst free m ediated sarco lemm al lip id perox idation [J ]1C irc R es, 1988, 63 (1) : 26222661[ 9 ] Gao C X, D ing Z S, Kang W Y, et a l. T he study of dam a2ging effect of hydroxyl radicals on cu ltu red m yocardial cells[J ]1 J Z hej iang T rad it Ch in M ed Coll (浙江中医学院学报) ,2002, 26 (3) : 522541[ 10 ] Sureda F X, E scubedo E, Gabriel C, et a l. M itochondrialm em brane po ten tialm easurem en t in rat cerebellar neurons byflow cytom etry [J ]1 Cy tom etry , 1997, 28 (1) : 742801
肉苁蓉总苷对大鼠局灶性脑缺血损伤的影响
蒋晓燕, 王晓雯, 王雪飞, 刘凤霞, 孟新珍, 朱伟江Ξ
(新疆医科大学 药理教研室, 新疆 乌鲁木齐 830054)
摘 要: 目的 研究肉苁蓉总苷 (GC s) 对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用。方法 采用插线法阻塞大鼠大脑中
动脉 (M CAO ) 制造大鼠局灶性脑缺血模型, 采用 NBT 染色测定脑梗死范围, 用“重量求面积法”计算梗死组织占
对侧大脑质量的百分比作为对梗死范围的判定, 行为指标评分采用 11 分评分制, 并测定缺血脑组织的抗氧化酶活
性及丙二醛 (M DA ) 含量。结果 GC s 125, 250 m gökg 可明显缩小脑梗死范围, 改善神经症状, 脑组织超氧化物歧
化酶 (SOD )、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH 2Px) 的活性明显升高,M DA 含量显著下降。结论 GC s 对大鼠局灶性脑
缺血损伤具有神经保护作用, 此作用可能与 SOD , GSH 2Px 活性水平的升高有关。
关键词: 肉苁蓉总苷; 局灶性脑缺血; 抗氧化酶; 丙二醛
中图分类号: R 286110   文献标识码: A    文章编号: 0253 2670 (2004) 06 0660 03
Effects of glycosides of c istanche on foca l cerebra l ischem ic ra ts
J IAN G X iao2yan, W AN G X iao2w en, W AN G Xue2fei, L IU Feng2x ia,
M EN G X in2zhen, ZHU W ei2jiang
(D epartm ent of Pharm aco logy, X in jiang M edical U niversity, U rum qi 830054, Ch ina)
Abstract: Object To study the p ro tect ive effects of g lyco sides of cistanche (GC s) on focal cereb ra l
ischem ic ra ts. M ethods Focal cereb ra l ischem ia in ra ts w as induced by 24 h occlu sion of the m iddle cere2
b ral artery (M CAO ). T he infarct area w as m easu red by n it robenzene th iocyanate (NBT ) sta in ing tech2
n ique. T he con ten t of neu ro logica l deficits w as evaluated by 0—11 scales. T he act ivit ies of an t iox idases
and con ten ts of M DA in ischem ic b ra in t issue w ere analyzed. Results Sign if ican t decrease in infarct area
and imp rovem en t in neu ro logica l deficits w ere ob served by o ral adm in ist ra t ion of GC s 125, 250 m gökg, re2
spect ively. Sign if ican t increase in act ivit ies of SOD and GSH 2Px, and sign if ican t decrease in con ten ts of
M DA in rats w ere also ob served after 24 h M CAO. Conclusion GC s has a neu rop ro tect ive effect again st
focal cereb ra l ischem ia and the effect m ay be rela ted to the increase in act ivit ies of SOD and GSH 2Px.
Key words: g lyco sides of cistanche (GC s) ; focal cereb ra l ischem ia; an t iox idan t enzym e; M DA
·066· 中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
收稿日期: 2003210213
基金项目: 新疆维吾尔自治区自然科学基金资助项目 (200121112)
作者简介: 蒋晓燕 (1972—) , 女, 湖北省武汉市人。讲师, 硕士, 现于上海第二医科大学神经生物学实验室攻读博士学位, 研究方向为生化
药理。T el: (021) 638465902776577 E2m ail: w xfjxy22103@ho tm ail. com
  脑缺血是临床常见病, 其发病通常与氧自由基、
兴奋性氨基酸、钙离子等密切相关。肉苁蓉总苷
(g lyco sides of cistanche, GC s) 是从北疆产盐生肉
苁 蓉 C istanche sa lsa (C. A. M ey. ) Ben th. et
Hook. f. 中提取, 主要成分为苯乙醇苷类。本教研室
前期研究发现 GC s 为强抗氧化剂[1 ] , 具有抗心肌缺
血作用[2 ] , 但对脑缺血的作用尚未见报道。本实验采
用插线法阻塞大鼠大脑中动脉 (M CAO ) 制备局灶
性脑缺血模型, 观察 GC s 的抗局灶性脑缺血作用,
并初步探讨其机制。
1 材料
111 药品与试剂: GC s 由新疆医科大学药学院植
化教研室提供, 其中苯乙醇苷含量> 60% , 代表成分
是松果菊苷和麦角甾苷; 银杏叶片, 贵州信邦制药股
份有限公司产品, 国药准字 Z 20028023。硝基四氮
唑蓝 (NBT ) 为上海前进试剂厂产品; 超氧化物歧
化酶 (SOD ) 试剂盒由南京建成生物工程公司提
供; 1, 1, 3, 32四乙氧基丙烷 (1, 1, 3, 32tet raethoxy2
p ropane, T EP) 为 Sigm a 公司产品; 5, 5′2二硫代双
(22硝基苯甲酸) [ 5, 5′2dith io2b is ( 22n it robenzo ic
acid ) , D TNB ] 为 F luka 公司产品; 考马斯亮蓝
(Coom assle B rillian t B lue, CBB ) G250, 为 F luka
公司产品; 还原型谷胱甘肽, 中国科学院上海生物化
学研究所东风生物化学技术公司产品。其余试剂均
为市售分析纯。
112 动物:W istar 大鼠, 雄性, 体重 280~ 350 g, 由
新疆医科大学实验动物中心提供。
2 方法
211 局灶性脑缺血大鼠模型制备[3 ]: 大鼠以水合氯
醛 350 m gökg, ip 麻醉, 仰卧位固定, 颈正中切口,
依次暴露右侧颈总、颈外和颈内动脉, 结扎颈外动脉
及其分枝和翼腭突动脉以阻断颅外来源的侧副循环
血流。在颈总动脉上剪一小口, 将一端加热成圆珠状
(< 0. 3 mm ) 的尼龙线 (直径 0. 242 mm ) 插入小
口, 当进线约 18 mm 时可明显感到阻力, 同时可见
颈内动脉颅外段弯曲、紧张, 此时再插入约 2 mm ,
表明线的头端已穿过大脑中动脉起始部。然后将颈
总动脉残段用丝线结扎, 以防插线脱落。假手术组动
物除不插入尼龙线至颈内动脉外所有操作均同手术
组 (术中、术后室温严格控制在 24 ℃~ 25 ℃)。
212 分组及给药: 大鼠随机分为 5 组, 每组 8 只,
分别为: 假手术组、模型组 (于造模手术前 1 周 ig
生理盐水 20 mL ökg)、GC s 大、小剂量组 (分别于造
模手术前 1 周 ig GC s 250, 125 m gökg, 每天 1 次)、
阳性对照组 (于造模手术前 1 周 ig 银杏叶片 50
m gökg, 每日 1 次)。
213 行为指标评分[3 ]: 分别于大鼠手术后 12, 24 h
进行行为评分。标准如下: 提鼠尾离开地面约 30
cm , 左前肢表现为腕屈曲、肘屈曲、肩内旋或兼而有
之者, 计 1~ 4 分; 将动物置于光滑平面上, 轻推肩部
使其向对侧移动, 检查阻力情况, 降低者根据程度不
同计 1~ 3 分; 根据左前肢肌张力下降程度的差异,
计 1~ 3 分; 动物有向一侧不停转圈现象计 1 分。满
分为 11 分, 分数越高, 动物的行为障碍越严重。
214 脑梗死范围的测定[4 ]: 缺血 24 h 后大鼠断头
取脑, 去掉嗅球、小脑及低位脑干, 沿冠状面切成 5
片, 立即置于NBT 染液 (2 göL ) 中, 避光 37 ℃ 水
浴孵育 20 m in。取出脑片放入 10% 福尔马林中固
定。正常组织染成蓝色, 坏死组织呈白色。用“重量
求面积法”计算梗死脑组织质量占对侧大脑质量的
百分比作为对梗死范围的判定。
215 氧化酶活性及丙二醛 (M DA ) 含量测定: 大鼠
断头取脑, 去掉嗅球、小脑及低位脑干, 在冰上用冰
生理盐水制成 10% 组织匀浆, 经 10 000× g 于
4 ℃ 离心 20 m in, 取上清液待测。SOD 活性测定用
黄嘌呤氧化酶法; 谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH 2Px)
活性测定用 D TNB 直接法[5 ]; M DA 含量测定用
TBA 显色法[6 ]; 蛋白质定量测定用 CBB 2SSD 法[7 ]。
216 统计方法: 所用资料采用 SPSS 1010 软件处
理, 计量资料数据采用 x ±s 表示, 统计推断采用
ANOVA 检验。
3 结果
311 对大鼠局灶性脑缺血损伤的神经保护作用: 结
果见表 1。大鼠手术 12, 24 h 后, 所有动物均出现了
神经症状, 主要表现为提尾悬空时, 左肩内旋, 左前
肢内收, 肌力下降, 行走时向左侧环转, 缺血 24 h 时
尤为明显。脑组织出现明显的梗死灶。GC s 能显著
表 1 GCs 对脑缺血大鼠的神经保护作用 (x±s, n= 8)
Table 1 Protective effect of GCs on nerve system
in cerebra l ischem ia rats (x±s, n= 8)
组 别
剂 量ö(m g·kg- 1) 行为指标评分12 h 24 h 脑梗死范围ö%
假手术   - 0163±11193 3 0150±01933 3 0100±01003 3
模型   - 6170±1116 6160±0197 31142±6170
GC s   125 4125±11043 3 3150±11413 3 23134±71353
250 4178±11203 3 2167±11123 3 21106±71033 3
银杏叶片 50 3150±11193 3 3150±11203 3 19191±61443 3
  与模型组比较: 3 P < 0105 3 3 P < 0101
  3 P < 0105 3 3 P < 0101 vs model group
·166·中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
改善大鼠的神经功能缺损, 缩小脑梗死面积 (P <
0105, 0101) , GC s 具有神经保护作用。
312 对抗氧化酶活性及M DA 含量的影响: 结果见
表 2。大鼠手术 24 h 后, 脑组织 SOD 活性明显下
降,M DA 含量显著升高, 与假手术组比较差异显著
(P < 0101)。GC s 显著升高脑组织 SOD , GSH 2Px 活
性, 降低M DA 含量 (P < 0105, 0101)。
表 2 GCs 对脑缺血大鼠脑组织 SOD , GSH-Px
活性及MDA 含量的影响 (x±s, n= 8)
Table 2 Effect of GCs on activ ities of SOD and GSH-Px,
and con ten t of MDA in bra in tissue of cerebra l
ischem ia rats (x±s, n= 8)
组 别
剂 量ö(m g·kg- 1) SODö(U ·m g- 1) GSH 2Pxö(U ·m g- 1) M DAö(nmo l·m g- 1)
假手术   - 7184±01313 3 2102±0149 0139±01043 3
模型   - 6172±0174 1173±0151 0162±0110
GC s   125 8108±01433 3 2169±01943 0138±01093 3
250 7188±01453 3 3105±01723 3 0129±01123 3
银杏叶片 50 6199±0169 3108±01353 3 0147±01043 3
  与模型组比较: 3 P < 0105 3 3 P < 0101
  3 P < 0105 3 3 P < 0101 vs model group
4 讨论
  脑卒中患者以局部脑缺血为多见, 而人类缺血
性脑卒中的好发部位多在大脑中动脉及其分枝, 故
选择阻断大脑中动脉形成局灶性脑缺血的模型与人
类脑卒中最为相似。本实验采用插线法阻断大脑中
动脉造成脑缺血损伤模型, 研究 GC s 对脑缺血损伤
的影响。结果观察到大鼠手术后 12, 24 h 所有动物
均出现了神经症状, 脑组织出现明显的梗死灶, 缺血
24 h 时尤为明显, 说明模型制备成功。
氧自由基在脑缺血损伤中起着重要作用。正常
机体氧自由基产生与清除处于动态平衡, 脑缺血时,
防御系统受损, 氧自由基生成增加, 攻击生物膜, 发
生脂质过氧化, 多价不饱和脂肪酸被破坏, 生成毒性
中间产物 (如脂氢过氧化物) 及终末产物丙二醛
等。丙二醛可交联蛋白质和磷脂上的氨基, 降低膜流
动性, 致细胞变形, 功能受损, GC s 经证实有抗氧化
作用, 包括抗脂质过氧化、清除超氧阴离子、抑制并
清除羟自由基的作用[1 ]。本实验测定了大鼠脑缺血
状态下 SOD、GSH 2Px 活性的变化, 结果在脑缺血
24 h 时, 脑组织 SOD 的活性明显降低, GSH 2Px 变
化不大,M DA 含量显著升高。而 GC s 能显著改善
大鼠的神经症状, 缩小脑梗死范围, 提高 SOD、
GSH 2Px 活性, 并降低M DA 含量。表明 GC s 具有
神经保护作用, 可能是通过升高脑组织抗氧化酶活
性, 抑制脂质过氧化反应来保护脑组织免受缺血的
损伤。GC s 的这种抗氧化作用可能与其结构中含有
酚羟基有关, 具体机制有待进一步研究。
References:
[ 1 ] W ang X W , J iang X Y, W u L Y, et a l. Scavenging effects of
glyco sides of cistanche on free radicals and its p ro tection a2
gainst OH·induced DNA dam age in v itro [J ]1 Ch in P harm
J (中国药学杂志) , 2001, 36 (1) : 292311
[ 2 ] M ao X M , W ang X W , L i L L , et a l. T he p ro tective effect
of glyco sides of cistanche on m yocardial ischem ia in rats [J ]1
Ch in T rad it H erb D rug s (中草药) , 1999, 30 (2) : 11821191
[ 3 ] Xu S Y, B ian R L , Chen X1M ethod ology in P harm acolog ica l
E xp erim en t (药理实验方法学) [M ]1 Beijing: Peop le’sM ed2
ical Pub lish ing House, 20021
[ 4 ] W u H P, Zhu X G1 T he p ro tective effect of to tal g luco sides
of paeony on cerebral infraction in rats [J ]1 Ch in P harm acol
B u ll (中国药理学通报) , 2001, 17 (2) : 22322251
[ 5 ] X ia Y M , Zhu L Z1 T he determ ination of glu tath ione perox i2
dase in b lood and tissue2D TNB direct m ethod [J ]1 J H y g i
R es (卫生研究) , 1987, 16 (4) : 292321
[ 6 ] Chen S Z, J in Y Y1 Comparison of th ree m ethods in
co lo ration of lip id perox idation using TBA [J ]1 J C lin i L ab
S ci (临床检验杂志) , 1984, 2 (4) : 82101
[ 7 ] M acart M , Gerbau t L 1 A n imp rovem ent of the coom assive
b lue dye b inding m ethod allow ing an equal sensit ivity to vari2
ous p ro teins: app lication to cerebro sp inal flu id [J ]1 C lin
Chem A cta, 1982, 112 (1) : 9321011
丹酚酸 B 及欧芹素乙对溶血磷脂酰胆碱刺激
牛主动脉平滑肌细胞增殖的影响
王杰松1, 芮耀诚2, 倪震宇3, 刘昌叶1, 常 华1Ξ
(11 解放军第 306 医院, 北京 100101; 21 第二军医大学药学院, 上海 200433;
31 成都军区联勤部药品仪器检验所, 四川 成都 610003)
摘 要: 目的 研究溶血磷脂酰胆碱 (L PC) 对牛主动脉平滑肌细胞 (BA SM C) 增殖的影响及丹酚酸 B 和欧芹素
乙的抑制作用。方法 体外培养BA SM C, 用M T T 法测定细胞增殖。结果 L PC 在 215×10- 9~ 215×10- 6 göL 剂
·266· 中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
Ξ 收稿日期: 2003209226
作者简介: 王杰松 (1966—) , 男, 安徽怀宁人, 博士, 副主任药师, 主要从事心脑血管药理学研究。 T el: (010) 66356171