全 文 ：HPLC法测定珍珠梅中槲皮素的含量
张乐华 1 ,董陆陆 1 ,尹春华 2 ,刘秉义 1 ,杨平传 3 ,董　明 3 ,于敬海 1
( 1. 哈尔滨医科大学药学院 ,黑龙江 哈尔滨　 150086;　 2. 哈尔滨医科大学附属第二医院 ,
黑龙江 哈尔滨　 150086;　 3. 哈药集团技术中心 ,黑龙江 哈尔滨　 150020)
　　珍珠梅 Sorbaria sorbifol ia ( L. ) A. Brow n又
名山高粱 ,为蔷薇科灌木 ,生于村边、山谷、溪旁 [1 ]。
民间用其活血祛瘀、消肿止痛 ,治骨折、跌打损伤 [2 ]。
有关珍珠梅的化学成分和临床应用报道较少 ,现代
研究报道珍珠梅中含有珍珠梅苷和黄酮类物质
等 [3 ]。黄酮类物质具有抗氧化、扩张血管、调血脂等
作用 ,因此 ,开发利用珍珠梅中黄酮类物质 ,在临床
中有广泛的应用前景。 研究发现珍珠梅中的黄酮类
物质具有极强的抗缺氧作用 ,可能成为治疗心血管
疾病的良药。 珍珠梅中槲皮素的含量可能影响其他
黄酮的含量且具有极强的抗缺氧作用。实验中采用
萃取法粗提得到珍珠梅中总黄酮 ,再用高效液相色
谱法测定了珍珠梅中槲皮素的含量。
1　实验材料
　　珍珠梅于 2000年秋采集于黑龙江省帽儿山地
区。L— 7200高效液相色谱仪 (日本日立公司 )。槲皮
素 (中国药品生物制品检定所 ) ;甲醇为色谱纯 ;其他
试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　珍珠梅总黄酮的提取 [4 ]: 称取干燥并切成细段
的珍珠梅 500 g ,用 6倍量 75%乙醇浸泡过夜 ,加热
回流 ,滤过 ,残渣再反复提取两次 ,合并滤液。用醋酸
乙酯萃取至无色 ,萃取液浓缩 ,得醋酸乙酯干燥提取
物 20. 5 g;醋酸乙酯萃取后的残液用正丁醇萃取 3
次 ,萃取液浓缩 ,得正丁醇干燥提取物 8. 94 g。
2. 2　色谱条件: 色谱柱选用 Micro so rb mv C18柱
( 250 mm× 3. 9 mm ); 流动相为甲醇 -0. 4%磷酸
( 1∶ 1) ; 流速 1. 0 mL /min; 进样量 10μL; 柱温
20℃。
2. 3　检测波长的选择:取槲皮素对照品适量 ,用流
动相溶解后作紫外扫描 ,测得最大吸收波长为 360
nm ,作为检测波长。
2. 4　标准曲线制作及线性关系:精密称取干燥至恒
重的槲皮素对照品 10 mg,用甲醇定容至 100 mL容
量瓶中 ,得到槲皮素对照品溶液。再分别准确吸取上
述溶液 1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0, 5. 0 mL,置于 10 mL容
量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,然后分别准确吸取 10
μL注入高效液相色谱仪中 ,记录色谱图。 以峰面积
值为纵坐标 ,浓度为横坐标进行线性回归 ,得回归方
程为 A= 40 356C+ 37 820, r= 0. 999 1。结果表明 ,
在 5. 10～ 51. 0μg /mL线性关系良好。
2. 5　精密度试验:取 100μg /mL的槲皮素对照品
溶液重复进样 5次 ,测得测量值的 RSD为 0. 43%
(n= 5)。
2. 6　稳定性试验:在相同色谱条件下 ,样品液每隔
30 min测定一次含量 ,结果 2. 5 h的相对含量为
99. 08% , RSD= 0. 406%。
2. 7　重现性试验:取同一样品 5份 ,制备样品液 ,取
样品液 10μL,在相同色谱条件下 ,测定其含量 ,结
果重现性良好 , RSD为 0. 412% (n= 5)。
2. 8　回收率试验:精密量取已知含量的醋酸乙酯干
燥提取物及正丁醇干燥提取物 ,加入一定量的槲皮
素对照品 ,甲醇定容 ,按样品测定方法进行测定 ,平
均回收率为 97. 36% , RSD= 1. 03% (n= 5)。
2. 9　珍珠梅中槲皮素含量测定:称取醋酸乙酯干燥
提取物 0. 22 g及正丁醇干燥提取物 0. 36 g ,各加入
20 m L 25%盐酸 ,水浴回流酸解 60 min,冷却后滤
过 ,滤液用甲醇溶解并定容至 50 mL量瓶中 ,摇匀
后用 0. 45 nm微孔滤膜滤过 ,分别吸取以上两种溶
液及对照品各 10μL进样 ,测定 ,结果醋酸乙酯干燥
提取物槲皮素含量为 1. 52% ;正丁醇干燥提取物槲
皮含量为 3. 67% ; 珍珠梅中槲皮素总含量为
0. 62%。 高效液相色谱图见图 1。
3　讨论
　　珍珠梅的化学成分比较复杂 ,直接测定某种物
质的含量时 ,都会受到其他成分的干扰 ,测定结果
·331·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 3期 2004年 3月
收稿日期: 2003-07-21基金项目:黑龙江省科技攻关项目的一部分 ( GB01C0703)作者简介:张乐华 ( 1964— ) ,女 ,哈尔滨医科大学药学院副教授 ,硕士研究生 ,研究方向为中草药药用有效成分的研究。
Tel: ( 0451) 86674718
* 通讯作者　 Tel: ( 0451) 86655935
　　图 1　槲皮素对照品 ( A)、醋酸乙酯提取物 (B)
和正丁醇提取物 ( C)的 HPLC图
Fig. 1　 HPLC chromatograms of quercetin reference
substances (A) , ethyl acetate extract ( B) , and
n-butanol extract (C)
也不准确。我们在研究中发现 ,珍珠梅中的黄酮类物
质有极强的抗氧化作用 ,槲皮素是黄酮类物质的一
种 ,它的含量多少影响着其他黄酮类物质的含量和
其抗缺氧作用。我们把萃取和 HPLC法联合起来测
定珍珠梅中槲皮素的含量 ,得到了较好的结果 ,珍珠
梅中槲皮素的含量为 0. 627%。 本实验采用萃取法
得到了总黄酮粗品 ,然后用高效液相色谱法测定总
黄酮粗品中的槲皮素含量 ,该方法干扰较少 ,操作简
便、易行 ,重现性和线性关系良好 ,回收率较高 ,是测
定黄酮类物质槲皮素的比较好的方法。
References:
[1 ]　 Jiangsu New Medical Col lege. Dictionary of Chinese Materia
Medica (中药大辞典 ) [M ]. Shanghai: Shanghai Scienti fic
and Technical Pu blish ers , 1986.
[2 ]　 Wu Y M. Normal Chinese Herbal Med icine of Northeast in
Ch ina (东北常用中草药 ) [M ] . Harbin: Hei long jiang Science
and Techn ology Pub li shing Hou se, 1984.
[3 ]　 Zai ts ev V C, Makarov a G V , Komis sarenk o N F. A n ew
f lav one g lycoside f rom Sorbi folia [ J ]. Khinm P rir Soed in ,
1969, 5( 6): 504-507.
[4 ]　 Zhang L H. Inf luence of s olven t concent ration to ext racting
total f lavonoids in Sorbaria [ J ]. J Harbin Med Univ (哈尔滨
医科大学学报 ) , 2000, 35( 5): 387.
HPLC法测定当归中阿魏酸的含量
闵凡新 1 ,李文玉 2 ,王彦为 1 ,胡彦武1 ,董艳辉1 ,吴　 1

( 1. 通化师范学院 ,吉林 通化　 134002;　 2. 通化市药品检验所 ,吉林 通化　 134001)
　　当归 Angel ica sinensis ( Oliv. ) Diels是伞形科
当归属一种多年生草本植物。干燥的贮藏根入药 ,是
一种常用中药材 ,有“十方九归”之称。有补血、和血、
调经止血、润肠通便之功效。当归的乙醇提取物中分
离出 6种化合物 ,阿魏酸是其中之一。当归的抑制血
小板聚集作用与阿魏酸有关。本实验以阿魏酸为测
定指标 ,采用 HPLC法对当归中阿魏酸的提取方法
进行优选 ,并测定其含量。
1　仪器与试剂
　　 Agi lent 1100高效液相色谱仪。甲醇为色谱纯 ,
水为重蒸馏水 ,冰醋酸为分析纯。阿魏酸对照品 (中
国药品生物制品检定所 ,批号为 0773-9607)。当归
购于通化市药材供应站。
2　实验方法
2. 1　色谱条件:色谱柱用十八烷基键合硅胶为填充
剂。甲醇-2%冰醋酸溶液 ( 20∶ 80)为流动相 ,检测波
长 320 nm,理论塔板数按阿魏酸峰计算应不低于
5 000。柱温 25℃。 HPLC色谱见图 1。
图 1　当归 ( A)和阿魏酸对照品 (B)HPLC色谱图
Fig. 1　 HPLC chromatograms of A. simensis
( A) and ferulic acid (B)
2 . 2　对照品溶液的制备: 精密称取阿魏酸对照品
5. 29 mg,置于 25 m L量瓶中 ,加甲醇 -2%冰醋酸溶
液 ( 20∶ 80)溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得 (含阿魏
酸 0. 211 8 mg /m L)。
2. 3　供试品溶液的制备:精密称取当归细粉 2. 0 g,
置于索氏提取器中 ,加入 100 m L乙醚 -甲醇溶液
( 20∶ 1)连续回流提取 4 h,回收提取液至干。 残渣
加适量甲醇 -2%冰醋酸溶液 ( 20∶ 80)温热使溶解 ,
·332· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 3期 2004年 3月
收稿日期: 2003-07-18