全 文 ：1-丹参素钠　 2-原儿茶醛
1-D (+ ) -β-( 3, 4-dih yd roph en yl ) -lactate s odium
2-protocatech uald eh yd e
图 1　丹参素钠的制备型 RP-HPLC色谱图
及中心切割示意图
Fig. 1　 Central incision of D (+ )-β-( 3, 4-dihydroph-
enyl)-lactate sodium by preparative RP-HPLC
3. 3　分析型 RP-HPLC条件转换至制备型 RP-
HPLC条件:分析型 HPLC条件向制备型 HPLC转
化时扩展因子 SF= ( rp ) 2× Lp /( ra ) 2× La= 105(式
中: p-制备型 HPLC, a-分析型 HPLC, r-色谱柱内
径 , L-色谱柱长度 )。
选择小的容量因子有利于分离时间的缩短和出
峰体积的缩小。高的分离度与制备型 HPLC可能出
现的过载相适应。
3. 4　分离参数 [5 ]:制备型 HPLC的效能取决于分
离速度、产品纯度和上样量 (制备量 )。为保证产品的
最终纯度 ,采用的方法是选择与分析型 HPLC粒度
相同的反相键合固定相、加快流动相的流速 ( 45
m L /min)和逐步加大上样量。
3. 5　洗脱程序优化:将分析型的填料直接应用于制
备型色谱 ,勿需对流动相作较大改动。为了提高色谱
的分离效率 ,扩大各组分的容量因子的差别 ,在分析
型 HPLC优化条件的基础上 ,选择梯度分离条件。
一次分离可在 30 min内完成 ,丹参素钠的纯度达
98. 3%。
3. 6　色谱柱的超载和色谱峰中心切割:为提高制备
HPLC的分离能力 ,由分析型 HPLC的分离规模和
扩展因子转化为制备型 HPLC分离时 ,逐步加大上
样样品的浓度 ,使色谱柱浓度超载。此时的分离为非
线性色谱 ,采用“中心切割”技术 (图 1)进行收集 ,有
效避免了丹参素钠色谱峰前后微量组分的污染。
3. 7　本实验以丹参干燥根为原料 ,采用预处理、稳
定化和 HPLC制备方法进行了丹参素钠的分离纯
化研究 ,得出如下结论:利用亲脂性吸附树脂和制备
型液相色谱组合分离技术 ,能较好地解决丹参素钠
在分离过程物理性质不稳定问题 ,初步筛选出批量
制备丹参素钠的工艺条件。分离所得丹参素钠产品 ,
经 LC-M S, IR, UV , HPLC和熔点鉴定以及与对照
品比较 ,纯度达到 98% 。
References:
[1 ]　 Liu Y L, Liu G T. Inhibi tion of h uman low -den sity lipop ro tein
oxidation by salvianolic acid A [J ]. Acta Pharm Sin (药学学
报 ) , 2002, 37( 2): 81-85.
[2 ]　 Zhang H J, Li L N. Salvianolic acid I: a new depside f rom
Salvia cavaler iei [ J] . P lanta Med , 1994, 60: 71-73.
[3 ]　 Zhang D C, Wu W L, Liu X J, et al . Studies on w ater soluble
act ive com ponen ts of Salvia mil tior rhiza Ⅱ . Th e s t ructure of
D (+ )-β-( 3, 4-dihydrophenyl ) -lactate [ J] . Acta Acad Med
Shanghai (上海第一医学院学报 ) , 1980, 7( 5): 384-385.
[4 ]　 Cheng Z X, Gu W H, Huang H Z, et al . Studies on w ater s ol-
uble phenolic acid of Salvia m ilt iorrhiza [ J] . Acta Pharm Sin
(药学通报 ) , 1981, 16( 9): 536-537.
[5 ]　 Atti la F, Georges G. Comparing th e opt imum performance of
the di fferen t modes of preparativ e liquid ch romatog raph y [ J].
J Chroma togr A , 1998, 796: 59-74.
高效液相色谱法和薄层色谱法测定重楼中薯蓣皂苷元的含量
李惠芬 1 ,平　渊 1* ,陈　刚 1 ,李军燕 2 ,何　 1
( 1. 天津医科大学药学院 ,天津　 300070; 2. 中国中医研究院广安门医院 ,北京　 100053)
摘　要: 目的　采用高效液相色谱和薄层色谱技术 ,分别测定重楼中薯蓣皂苷元的含量。 方法　采用 HPLC法 ,选
用 ODS柱 ,流动相:乙腈 -水 ( 90∶ 10) ,检测波长: 203 nm,柱温: 35℃ ; TLC法选用硅胶 G板 ,展开剂:环已烷 -乙酸
乙酯 ( 4∶ 1) ,测定波长: 610 nm,参比波长: 420 nm。结果　线性范围分别为 1. 2～ 7. 2μg (r= 0. 999 8) , 0. 2～ 1. 0
μg (r= 0. 995 7)。平均回收率分别为 102. 2% , RSD= 3. 39% (n= 6) ; 100. 9% , R SD= 2. 68% (n= 6)。结论　两种方
法均可用于重楼中薯蓣皂苷元的质量控制。
关键词: 重楼 ;薯蓣皂苷元 ;高效液相色谱 ;薄层色谱
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 12 0127 03
·127·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 2期 2003年 2月
收稿日期: 2002-04-28
* 现在贵州省、中国科学院天然产物化学重点实验室
Determination of diosgenin inRhizoma Paridis by HPLC and TLC
LI Hui-fen
1 , PIN G Yuan
1 , CHEN Gang
1 , L I Jun-yan
2 , HE Jun
1
( 1. Colleg e of Pha rmacy , Tianjin Univ er sity o f Medical Sciences, Tianjin 300070,
China; 2. Guanganmen Hospital, C A TCM , Beijing 100053, China )
Abstract: Object　 To determine the contents of dio sg enin in Rhizoma Paridis by HPLC and TLC.
Methods　ODS column was used in HPLC with mobile phase: acetoni t rile-w ater( 90∶ 10) , detection w ave-
leng th: 203 nm, co lumn temperature: 35℃ ; si lica g el plate w as used in T LC w ith developer: cy clohex-
ane-ethyl aceta te ( 4∶ 1) , scan w aveleng th: 610 nm, reference w aveleng th: 420 nm. Results　 The linea r
ranges of HPLC and TLC were 1. 2— 7. 2μg (r= 0. 999 8) , 0. 2— 1. 0μg (r= 0. 995 7) . The average re-
covery and RSD were 102. 2% , 3. 39% (n= 6) and 100. 9% , 2. 68% (n= 6) respectiv ely. Conclusion　
Both of tw o methods can be used fo r the quali ty cont rol o f diosgenin in Rhizoma Paridis .
Key words: Rhizoma Paridis; diosgenin; HPLC; TLC
　　重楼为百合科植物云南重楼 Paris polyphylla
Smith va r. yunnanensis ( Franch. ) Hand. -M azz.或
七叶一枝花 Paris polyphyl la Smith var. chinensis
( Franch. ) Hara的干燥根茎 [1 ]。 其药用历史悠久 ,
以蚤休之名始载于《神农本草经》 ,具有清热解毒、消
肿止痛、凉肝定惊之功效 [ 1]。含有多种甾体皂苷元 ,
其中薯蓣皂苷元的糖苷是重楼的主要活性成分。现
代药理研究发现 ,重楼活性成分具有抗肿瘤、消炎、
抑菌、镇静、镇痛、止血等作用 ,广泛用于临床治疗癌
症、子宫出血、慢性支气管炎和流行性腮腺炎 [ 2]。《中
华人民共和国药典》 2000年版一部中尚无含量测定
方法。 本实验采用反相高效液相色谱法 [3 ]和薄层色
谱法 [ 4 ]分别对重楼中薯蓣皂苷元进行测定 ,希望为
该药材的质量控制提供定量方法。
1　仪器和材料
Waters 515双泵型高效液相色谱仪 ,配有 2847
双通道紫外检测器 , Mi llennium32色谱管理系统 ;
CS-930型双波长薄层扫描仪 (日本岛津株式会社 ) ;
硅胶 G薄层板 (青岛海洋化工厂 , 110℃活化 30
min ) ,美国定量毛细管 ( 0. 5, 1. 0μL) ;微量注射器
( Hamil ton Co. ) ; BP210S电子天平 ( Sartorius公
司 ) ;薯蓣皂苷元对照品 (中国药品生物制品检定
所 ) ,重楼药材 (天津市中药饮片厂 ,经天津中医学院
第一附属医院尚英和药师鉴定为七叶一枝花 ) ;乙腈
(色谱纯 ,天津市康科德科技有限公司 ) ;重蒸水 ,其
他试剂均为分析纯。
2　方法和结果
2. 1　高效液相色谱条件:色谱柱: Prodig y O DS柱
( 4. 6 mm× 250 mm , 5μm);柱温: 35℃ ;流动相:乙
腈 -水 ( 90∶ 10) ;测定波长: 203 nm;流速: 1. 0 mL /
min;进样量: 20μL。
2. 2　薄层色谱与扫描条件:硅胶 G板 ( 10 cm× 10
cm ) ;上行展开 ;展距: 10 cm;展开剂: 环己烷 -乙酸
乙酯 ( 4∶ 1) ,预饱和 20 min;显色剂: 50%磷钼酸乙
醇溶液 , 110℃烘烤 5 min至蓝色清晰斑点出现 ;扫
描方式:双波长锯齿扫描 ;狭缝宽度: 1. 2 mm× 1. 2
mm;线性参数: SX= 3;λS= 610 nm,λR= 420 nm。
2. 3　样品溶液的制备: 取已干燥的重楼样品适量 ,
粉碎过 50目筛 ,精密称取 1. 000 g装滤纸包 ,置索
氏提取器中 ,加入甲醇 75 mL。提取至无色后 ,回收
甲醇至干 ,加 2 mol /L盐酸 20 mL,置沸水浴中水解
2 h ,冷却后用石油醚 ( 60℃～ 90℃ )萃取 3次 ,每次
20 mL,萃取时间依次为 45, 40, 30 min,合并萃取
液 ,水洗至中性 ,回收石油醚 ,残渣用甲醇溶解 ,定容
于 10 mL容量瓶中 ,作为供试品溶液。
2. 4　高效液相色谱法测定
2. 4. 1　标准曲线及线性范围:精密称取薯蓣皂苷元
对照品 10. 0 mg ,置 25 mL容量瓶中 ,加甲醇溶解并
稀释至刻度 ,摇匀 ,作为对照品溶液。精密吸取对照
品溶液 3, 6, 9, 12, 15, 18μL按上述色谱条件测定 ,
以峰面积为纵坐标 ,进样量为横坐标作标准曲线 ,得
回归方程 Y= 645 462X+ 44 709, r= 0. 999 8。结果
表明 ,进样量在 1. 2～ 7. 2μg峰面积与进样量呈良
好线性。
2. 4. 2　精密度试验:精密吸取对照品溶液分别进样
5次 ,每次 10μL,测得各次峰面积积分值 ,计算得
RSD= 0. 413% ,表明仪器精密度良好。
2. 4. 3　重现性试验: 精密移取供试品溶液 5份各
1. 5 mL置 5 mL容量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇
匀 ,测定 ,薯蓣皂苷元含量的 RSD为 2. 91%。
2. 4. 4　加样回收率试验: 精密称取样品粗粉
1. 000 g 12份 ,其中 6份精密加入对照品溶液 1
mL,按样品溶液制备方法提取 ,进样 ,测定 ,平均加
样回收率为 102. 2% , RSD= 3. 39% (n= 6)。
·128· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 2期 2003年 2月
2. 4. 5　样品测定: 依 HPLC法操作 ,测定结果见 表 1,色谱图见图 1。
* -薯蓣皂苷元
* -diosgenin
图 1　薯蓣皂苷元对照品 (A)和供试品 ( B)的 HPLC图谱
Fig. 1　 HPLC chromatograms of diosgenin ref erence substance (A) and sample ( B)
2. 5　薄层色谱法测定
2. 5. 1　标准曲线及线性范围:精密吸取对照品溶液
0. 5, 1. 0, 1. 5, 2. 0, 2. 5μL分别点于同一硅胶板上 ,
依法展开 ,显色 ,扫描。以斑点积分面积值为纵坐标 ,
点样量为横坐标 ,得回归方程为: Y = 90 822X+
5 030, r= 0. 995 7,结果表明点样量在 0. 2～ 1. 0μg
与斑点积分面积值呈良好线性关系。
2. 5. 2　精密度、重现性、稳定性试验:对同一对照品
溶液斑点连续扫描 5次 ,薯蓣皂苷元峰面积的
RSD= 0. 45% ,表明仪器精密度良好。取相同量的
供试品 5份 ,分别点于同一硅胶板上 ,展开 ,扫描 ,测
定 ,样品峰面积的 RSD= 2. 86% ,表明同板重现性
良好。按同板重现性操作方法点于同批不同板上 ,依
法扫描 ,测定 ,峰面积的 RSD= 3. 29% ,表明异板重
现性良好。取供试品溶液适量点于硅胶板上 ,展开 ,
显色 ,稳定后每隔 1 h测定 ,结果 8 h内稳定 ,峰面
积的 RSD= 0. 73% (n= 8)。
2. 5. 3　回收率试验:取 2. 4. 4项制备的回收溶液适
量依法点样 ,展开 ,扫描 ,测定 ,平均加样回收率为
100. 9% , RSD= 2. 68% (n= 6)。
2. 5. 4　样品含量测定: 精密吸取供试品溶液 0. 5
μL,对照品溶液 1μL交叉点于硅胶板上 ,展开 ,显
色 ,扫描 ,按外标两点法测定样品含量 ,结果见表 1。
表 1　重楼中薯蓣皂苷元的测定结果 (n= 5)
Table 1　 Determination of diosgenin
in Rhizoma Paridis (n= 5)
方　法 薯蓣皂苷元 /% RSD /%
HPLC 0. 955 2. 77
T LC 0. 940 3. 17
3　讨论
3. 1　高效液相色谱法是近年来中药材及中成药常
用的定量分析方法。 我们应用反相高效液相色谱技
术对重楼中薯蓣皂苷元的含量进行测定 ,并与薄层
扫描法比较 ,两种方法对重楼中薯蓣皂苷元的分离
均较好 ,测定结果无明显差异 ,均可用于重楼中薯蓣
皂苷元的测定。
3. 2　在 HPLC测定中 ,柱温高低直接影响分离结
果。我们先后选择了 25, 30, 35, 40℃柱温 ,发现柱温
升高 ,目标峰将与杂质峰部分重叠 ;降低柱温 ,目标
峰保留时间过长 ,故选用 35℃柱温。
3. 3　在优化色谱条件的过程中 ,乙腈与水的配比分
别试用过 75∶ 25, 80∶ 20, 85∶ 15, 90∶ 10 4种比
例。结果表明 ,乙腈 -水 ( 90∶ 10)时 ,薯蓣皂苷元色谱
峰保留时间比较适合 ,峰形也好 ,故采用了该配比的
流动相。
3. 4　在薄层色谱展开的过程中 ,我们曾试用过两种
体系的多种配比: 环已烷-乙酸乙酯 ( 3∶ 1, 4∶ 1,
5∶ 1) ,氯仿-甲醇 ( 100∶ 1, 100∶ 1. 2, 100∶ 0. 8)。结
果发现 ,环已烷 -乙酸乙酯 ( 4∶ 1)时 Rf值适当且斑
点集中、清晰。
References:
[1 ]　Ch P (中国药典 ) [S ]. 2000 ed. VolⅠ .
[2 ]　 Shi X F, Du D J. Surv ey of s tudies and application of pharma-
colog y of Rhizoma Paridis [ J] . In f Tradi t Ch in Med (中医药
信息 ) , 1991, 8( 4): 42-45.
[3 ]　 Da S L, Tang X Y, Da H N, et al . Determination of dios genin
in Dioscorea Zingiberensis by RP-HPLC [ J ]. Chin J Ch ro-
matog r (色谱 ) , 1992, 10( 2): 98-99.
[4 ]　 Wang Q, Yu X S, Pan R T. Determinat ion of s teroidal so-
pogenins in Ch onglou ( Rhizoma Paridis ) [ J] . Chin J Pharm
Anal (药物分析杂志 ) , 1991, 11( 2): 90-93.
·129·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 2期 2003年 2月