全 文 ：深入研究。
3. 3　根据实验结果 ,为提高君药青风藤中主要有效
成分青藤碱提取率 ,在制定本复方提取工艺路线时 ,
拟以青风藤与雷公藤共提 ,其他药味另行处置为好。
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HPLC法测定藤茶中双氢杨梅黄素和杨梅黄素的含量
李瑛琦 1 ,于治国 1 ,陆文超 2
( 1. 沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳　 110016; 2. 沈阳药科大学制药工程学院 ,辽宁 沈阳　 110016)
　　藤茶系葡萄科蛇葡萄属显齿蛇葡萄 Ampelopsis
grossedentata ( Hand. -M azz. ) W. T. Wang的嫩
茎叶经传统加工揉制、干燥而成 [1 ]。该植物主要分布
于湖南、湖北、广西、广东、云南、贵州、江西、福建等
省区 [2 ]。其主要成分为双氢杨梅黄素 ( DIH)和杨梅
黄素 ( MYR) [3 ]。DIH具有明显拮抗去甲肾上腺素和
高 K+ 所致的兔胸主动脉条收缩反应及钙拮抗作
用 ,且毒性很低 [ 4, 5] ,并有祛痰止咳 ,降血脂和保肝等
作用 [6 ]。 MYR有抗菌、抗癌、止咳、祛痰、利尿等作
用 [7 ]。目前已报道的该药材中黄酮醇类化合物含量
测定方法有薄层扫描法 [8 ]和分光光度法 [9 ]。 本实验
建立了一种同时测定药材中 DIH和 MYR的 HPLC
方法 ,并对不同产地的药材进行了含量测定 ,为今后
对藤茶的进一步研究及充分开发利用奠定了基础。
1　仪器、试剂与材料
岛津 LC— 10ATvp高效液相色谱仪 ,岛津
SPD— 10Avp紫外检测器 , AN ASTAR色谱工作
站 , DT— 100光电天平。 DIH和 MYR对照品自制 ,
经 HPLC归一化法检查纯度高于 99. 0% ;藤茶药材
经沈阳药科大学生药学教研室孙启时教授鉴定。甲
醇 ,乙腈为色谱纯 ,水为二次重蒸水 ,其他试剂为分
析纯。
2　方法与结果
2. 1　 色 谱 条 件: 色 谱 柱: Kromasi l ODS 柱
( 250 mm× 4. 6 mm , 5μm) ;流动相: 乙腈 -2%冰醋
酸 ( 23∶ 77) ;流速: 0. 8 mL /min;检测波长: 275 nm;
柱温:室温 ;进样量: 20μL。在此色谱条件下 ,对照品
与样品的色谱图见图 1。
2. 2　对照品溶液制备: 精密称取 DIH 50 mg和
1-双氢杨梅黄素　 2-杨梅黄素
1-dihydromy ricetin　 2-m yricetin
图 1　双氢杨梅黄素 (A)、杨梅黄素 (B)和
藤茶 (C)的 HPLC图谱
Fig. 1　 HPLC chromatograms of dihydromyricetin (A) ,
myricetin ( B) , and A. grossedentata ( C)
MYR 5 mg,分别置于 25 mL棕色量瓶中 ,用甲醇溶
解并稀释至刻度 ,摇匀 ,得到 2 mg /mL DIH储备液
和 0. 2 mg /mL MYR储备液。
精密称取 DIH 500 mg和 MYR 50 mg ,分别置
于 25 mL棕色量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,
摇匀 ,得到 20 mg /mL DIH储备液和 2 mg /mL
MYR储备液。
2. 3　供试品溶液的制备:精密称取 60℃干燥 4 h
的藤茶粉末 0. 5 g ,加水 25 m L煎煮 2 h,趁热抽滤 ,
滤渣加 95%乙醇 25 mL回流提取 2 h,趁热抽滤 ,合
并二次提取液 ,加 95%乙醇 50 mL放置过夜 ,抽滤 ,
减压回收溶剂 ,残渣用甲醇 25 mL溶解并稀释至刻
·1098· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
收稿日期: 2003-02-25作者简介:李瑛琦 ( 1977— ) ,女 ,吉林省吉林市人 ,沈阳药科大学英语药学专业毕业 ,现攻读药物分析专业硕士学位。
Tel: ( 024) 23843711-3366　 E-mail: 2000liyingqi@ sina. com. cn
度 ,精密吸取上清液 0. 5 mL,置于 10 mL棕色量瓶
中 ,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,微孔滤膜滤过 ,得供试
品溶液。
2. 4　线性范围考察: 分别精密吸取 2 mg /mL DIH
储备液 0. 5, 1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0, 5. 0 mL和 0. 2 mg /
m L MYR储备液 0. 5, 1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0, 5. 0 mL
用甲醇定量稀释至 10 mL,得到系列浓度的对照品
溶液 ,分别进样 20μL。 以对照品溶液浓度为横坐
标 ,对照品色谱峰面积为纵坐标进行线性回归 , DIH
和 MYR的回归方程分别为: Y= 23 435X+ 13 351
( r = 0. 999 9 )和 Y = 27 425X - 55 542 ( r =
0. 999 7)。DIH在 50～ 500μg /mL, MYR在 5～ 50
μg /mL与峰面积呈良好线性关系。
2. 5　精密度试验: 取同一供试品溶液 (产地江西 ) ,
按上述色谱条件重复进样 6次 , DIH和 MYR浓度
的 RSD分别为 1. 3% (n= 6)和 2. 0% (n= 6)。
2. 6　重现性考察: 平行制备 6份供试品溶液 (产地
江西 ) ,测定含量 , DIH和 MYR的平均含量 (按生药
计 )分别为 253. 5 mg /g ( RSD= 2. 5% )和 17. 0 mg /
g ( RSD= 3. 0% )。
2. 7　稳定性试验:取供试品溶液分别于 0, 2, 4, 8,
12, 24 h进样 20μL,结果表明 12 h内溶液基本稳
定 ,峰面积 RSD= 5. 4% 。
2. 8　回收率试验: 精密称取已知含量的藤茶样品
(产地江西 ) ,分别加入 20 mg /mL DIH和 2 mg /mL
MYR储备液适量 ,按供试品溶液的制备项下方法
操作 ,取 20μL进样 ,结果见表 1。
2. 9　样品测定结果: 制备供试品溶液 ,精密吸取 20
表 1　 DIH和 MYR的回收率
Table 1　 Recoveries of DIH and MYR
序号 DIH加入量 /mg 测得值 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD/%
MY R
加入量 /mg 测得值 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD/%
1 60 56. 2 93. 6
2 60 60. 0 99. 9
3 80 79. 6 99. 5
4 80 81. 2 101. 5
5 100 96. 3 96. 3
6 100 96. 2 96. 2
97. 83% 3. 01%
4 3. 7 92. 5
4 3. 9 97. 5
5 4. 8 96. 0
5 4. 7 94. 0
6 5. 7 95. 0
6 6. 0 100. 0
95. 83% 2. 77%
μL注入高效液相色谱仪 ,记录色谱峰面积 ,采用随
行工作曲线计算不同产地藤茶中 DIH和 MYR的
含量 ,结果见表 2。
表 2　不同产地藤茶中 DIH和 MYR含量 ( n= 6)
Table 2　 Contents of DIH and MYR
in A. grossedentata (n= 6)
DIH / ( mg· g- 1) MYR /( mg· g- 1 )
江西 255. 8 16. 7
广西 269. 8 29. 1
福建 288. 5 26. 2
湖南 243. 8 25. 5
3　讨论
3. 1　色谱条件的选择: 分别用甲醇 -水 ,甲醇 -水-冰
醋酸 ,甲醇 -水 -冰醋酸-四氢呋喃 ,乙腈-水 ,乙腈-水 -
冰醋酸以不同比例进行考察 ,结果表明乙腈 -水-冰
醋酸系统不仅使色谱峰峰形好 ,柱效高 ,达到理想的
分离度 ,而且使柱压很低 ; DIH的 λmax为 292 nm ,
MYR的λmax为 254 nm和 375 nm。 由于在 375 nm
处 DIH几乎无吸收 ,而在 292 nm处 MYR吸收较
小 ,经考察 ,用 275 nm作为检测波长 ,二者均有较
好并且相近的检测灵敏度 ,且峰形好。
3. 2　提取条件的确定:水煎煮 MYR提取较完全 ,
95%乙醇热回流提取 DIH收率最高 ,而超声效果不
佳 ,提取的 DIH较热回流少 ,并且基本检测不到
MYR。认为单纯用水或醇 ,以及用不同比例的醇作
为提取溶媒均不能使藤茶中的黄酮醇类化合物提取
完全 ,因此 ,水煎煮 2 h,然后用 95%乙醇热回流提
取 2 h ,保证两种活性成分均被充分提取出来。
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苦地丁提取物中原阿片碱和延胡索乙素的 HPLC分析
张经硕 ,周巧霞 ,徐丽华 ,顾振纶
(苏州中药研究所 ,江苏 苏州　 215007)
　　苦地丁为罂粟科植物紫堇 Corydal is bungeana
Turcz.的干燥全草 ,含有多种生物碱 ,其中原阿片碱
和延胡索乙素是主要有效成分 [1 ] ,具有抑制血小板
聚集 ,松弛平滑肌 ,抗心律失常 ,解痉止痛等药理作
用 [2 ]。原阿片碱和延胡索乙素的测定方法 ,文献报道
有薄层扫描法 [3 ]。 本实验建立了苦地丁提取物中原
阿片碱和延胡索乙素的 RP-HPLC法 ,结果较为
满意。
1　仪器与试剂
Waters 501高效液相色谱仪 ( WDL— 95色谱
工作站 , Waters 484紫外检测器 , Wa ters 7725i进样
阀 ) ; Sartorius BS110S电子天平 (万分之一 ) ;
JHN— 2A型超声清洗器 (上海杰恩普超声设备有限
公司 ) ; PHS— 3C型精密 pH计 (上海精密科学仪器
有限公司雷磁仪器厂 )。
重蒸水 ,冰醋酸、三乙胺、氨水均为分析纯 ,甲醇
为色谱纯。苦地丁药材购于安徽毫州药材市场 (产地
为江西 ) ,经本所鉴定 ;原阿片碱对照品和延胡索乙
素对照品为本所自制 (已经四谱鉴定 ,且纯度>
98% );苦地丁提取物为本所自行提取。
2　方法与结果
2. 1　对照品溶液制备:精密称取原阿片碱和延胡索
乙素对照品各约 5 mg ,置 25 mL量瓶中 ,加 2%醋
酸使溶解 ,并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得。
2. 2　供试品溶液制备: 精密称取苦地丁提取物约
12. 5 mg,置 25 mL量瓶中 ,加 2%醋酸使溶解 ,并稀
释至刻度 ,摇匀 ,即得。
2. 3　色谱条件的选择
2. 3. 1　 pH的影响: 分别配制 pH值为 2. 5, 3. 0,
3. 5, 4. 0, 4. 5, 5. 0, 5. 5, 6. 0, 6. 5, 7. 0, 7. 5, 8. 0 1%
氨水 -甲醇 ( 50∶ 50,冰醋酸调 pH值 )作为流动相 ,
分析供试品溶液。结果表明: p H在 6. 0～ 6. 5时原阿
片碱和延胡索乙素的峰形和分离度较好 ; pH降低 ,
峰形变窄、保留时间缩短 ,但原阿片碱和延胡索乙素
两峰部分重叠 ; p H升高 ,峰形变宽、保留时间延长。
故选择 pH为 6. 30左右。
2. 3. 2　氨水浓度的影响:分别配制含氨水 0. 2% ,
0. 4% , 0. 6% , 0. 8%的流动相 ,分析供试品溶液。 结
果表明:氨水由 0. 2%增加到 0. 4%时 ,峰形变窄、分
离度变好 ;由 0. 4%增加到 0. 6% 、 0. 8%时 ,峰形和
分离度无明显变化。 故选用氨水浓度为 0. 4% 。
2. 3. 3　三乙胺浓度的影响: 分别配制含三乙胺
0. 2% , 0. 4% , 0. 6% , 0. 8% , 1. 0%的流动相 ,分析供
试品溶液。结果表明:加入三乙胺后 ,峰形变窄、分离
度变大、保留时间缩短 ;三乙胺由 0. 2%增加到
0. 8%时 ,峰形、分离度和保留时间持续改善 ;由
0. 8%增加到 1. 0%时 ,峰形、分离度和保留时间无
明显变化。故选择三乙胺为 0. 8%。
2. 3. 4　甲醇浓度的影响:分别配制甲醇-水不同比
例的流动相 ,分析供试品溶液。结果表明:甲醇比例
增加 ,分离度变差 ,故选择甲醇 -水 ( 50∶ 50)。
2. 4　色谱条件: 色谱柱: Wa ters C18柱 (填料:
μBandapakTM ; 粒径: 10μm;规格: 300 mm× 3. 9
mm ); 流动相: 甲醇 -水 -三乙胺-氨水 ( 50∶ 50∶
0. 8∶ 0. 4,冰醋酸调 pH 6. 30左右 ) ;检测波长: 285
nm;流速: 0. 9 mL /min;灵敏度: 0. 100 AU FS;柱
温:室温 ( 25℃ )。
2. 5　标准曲线的制作:精密吸取不同浓度的原阿片
碱对照品溶液 ( 0. 015, 0. 03, 0. 06, 0. 12, 0. 24, 0. 48
mg /mL)和延胡索乙素对照品溶液 ( 0. 02, 0. 04,
0. 08, 0. 16, 0. 32, 0. 64 mg /mL) 5μL分别注入高效
液相色谱仪测定峰面积。以峰面积对浓度作图 ,求得
标准曲线回归方程。 原阿片碱: Y= 2. 876× 106X -
5 416. 559(r= 0. 999 9) ;延胡索乙素: Y= 1. 319×
·1100· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 12期 2003年 12月
收稿日期: 2003-03-08