全 文 ：冬凌草甲素的提取工艺研究
王　宁 1 ,谢国祥 2 ,史晓浩 1 ,倪力军 2 ,赵　军 1 ,凌　峰 1
( 1. 上海雷允上药业有限公司 ,上海 200001; 2. 华东理工大学化学与制药学院 ,上海 200237)
摘　要:目的　采用近红外光谱 ( N IR)技术对冬凌草中冬凌草甲素的提取工艺进行研究。 方法　采用柱色谱法分
离冬凌草甲素 ,应用 N IR技术寻找最佳工艺条件。 结果　此工艺所得冬凌草甲素纯度较高 ,且样品与对照品的
HPLC峰保留时间相同 , NMR和 IR图谱相同。 结论　本法洗脱速度快 ,安全、成本低、方便 ,并且重现性好。
关键词: 冬凌草 ;冬凌草甲素 ;柱色谱法 ;近红外光谱
中图分类号: R284. 2　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 10 0901 02
Study on method for extracting and separating oridonin inRabdos ia rubescens
W ANG Ning
1
, XIE Guo-xiang
2
, S HI Xiao-hao
1
, N I Li-jun
2
, ZHAO Jun
1
, L IN G Feng
1
( 1. Shanghai Leiyunshang Pharmaceutica l Co. , Ltd, Shanghai 200001, China; 2. Schoo l o f Chemistr y and Pharmaceutica l,
East China Univ er sity o f Science and Technolog y, Shanghai 200237, China)
Abstract: Object　 To study the most sui table conditions of the ex t raction-separation process o f the
o ridonin in Rabdosia rubescens ( Hemsl. ) Ha ra w ith NIR. Methods　 The oridonin was chromato g raphed on
a silica column and found the optimum condi tions wi th N IR. Results　 The oridonin ex t racted by this
method had higher puri ty. The retention time of the sample w as the same as tha t o f the reference sub-
stance. The spect ra o f NMR and IR are the same. Conclusion　 This method is proved to be fast , safe,
low er co st , simple and has good reproducibili ty.
Key words: Rabdosia rubescens ( Hemsl. ) Hara; oridonin; column ch romatog raphy; N IR
　　冬凌草 Rabdosia rubescens ( Hemsl. ) Hara系
唇形科香茶菜属植物 ,广泛分布于黄河流域及其以
南广大地区 ,冬凌草中的主要成分为萜类化合物 ,其
中含量较高的为二萜和三萜类化合和物 ,二萜中的
主要有效成分为冬凌草甲素和冬凌草乙素 ,三萜中
的主要有效成分是齐墩果酸和熊果酸。冬凌草甲素
( oridonin)具有较强的抗肿瘤活性 ,对体外培养的
Hela细胞、人体食管癌 109细胞及肝癌 BEL-7402
细胞有明显的细胞毒作用 ,对多种移植性动物肿瘤
如 ECA, S180 , P388 , L1210肝癌及 AKS有明显的抑制
作用 ,并且对食管上皮增生有轻度抑制作用 [1～ 3 ]。
冬凌草甲素的提取分离法目前主要有乙醚提取
法、乙醇提取法及中压柱色谱法等 ,但这些提取工艺
得到的冬凌草甲素的含量很低。 而冬凌草甲素对于
肿瘤的确切疗效已经很明确 ,为了适应中药制剂的
需要 ,纯度应该尽可能的提高 ,为此本实验对冬凌草
中冬凌草甲素的提取分离工艺进行研究 ,以提高冬
凌草甲素的纯度。
1　仪器与试剂
R201旋转蒸发仪 (上海申科机械研究所 ) ;
ZF— 2型三用紫外仪 (上海市安亭电子仪器厂 ) ;近
红外光谱仪 ( AV A TAR 360N ,美国尼高力公司 ) ;
Agilent 1100高效液相色谱仪 ( HP公司 )。
冬凌草购自河南济源 ,由美国国际医疗研究所
Sophie Chen博士鉴定。 冬凌草甲素对照品 (含量
98. 01% )由美国癌症基金会提供。 柱色谱用硅胶
( 100～ 200目 ,上海五四化学试剂有限公司 ) ;薄层
色谱硅胶玻璃板 ( HSGF254,上海市科信化工公
司 )。 其他溶剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　工艺流程: 取冬凌草叶用 95%乙醇提取 ,滤
过 ,滤液浓缩至膏状 ,加 3倍量水溶解 ,滤过 ,弃去固
体 ,水溶液用复合溶剂萃取。 取上清液浓缩至干 ,硅
胶柱色谱分离 ,以氯仿 -丙酮洗脱 ,洗脱液经浓缩得
白色粉末 ,用甲醇 -丙酮重结晶 ,得到白色针状结晶。
在上述工艺流程中 ,重点研究了提取和柱色谱过程。
2. 1. 1　提取: 在提取过程中 ,采用近红外光谱仪
N IR检测不同时间下的提取液 ,结果见图 1。对图 1
·901·中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月
收稿日期: 2002-12-31基金项目: “十五”国家科技攻关计划项目 ( 2001BA701A04)作者简介:王　宁 ( 1951— ) ,男 ,上海雷允上药业有限公司高级工程师 ,研究方向为植物化学。 Tel: ( 021) 64253694
中的 5个图谱进行主成分分析 ( PCA) ,前两个主成
分的累积贡献率为 77% ,分别以第一、第二主成分
为横、纵坐标作图 ,结果见图 2。由图 2可见:不同时
间下冬凌草提取液中主成分差异很大 ,这表明在不
同的时间下 ,物质的组成发生了极大的变化。这一变
化的原因可能是: 物质溶解度的不同 ;物质处于细胞
位置的不同 ;有效成分在药材中扩散速度的不同。本
实验一律提取 6 h后进入下一步骤。具体提取时间
的变化对所要提取有效成分得率与质量的影响有待
进一步研究。
图 1　不同时间下冬凌草提取液 NIR光谱图
Fig. 1　 NIR spectra of extracting solution
of R . rubescens at diff erent times
图 2　 5个不同提取时间下冬凌草提取液的 NIR
主成分分析结果
Fig. 2　 PCA results of NIR of extracting solution
of R . rubescens at f ive diff erent times
2. 1. 2　柱色谱分离:将工艺中进行萃取后的上清液
浓缩至干的粉末 10 g与适量硅胶拌匀 ,将相当于粉
末 5倍量的硅胶装柱 ,用氯仿 -丙酮 ( 9∶ 1) [ 4]以 5
m L /min的流速进行洗脱 ,按每份 100 mL进行收
集 ,薄层色谱分析 ,并与对照品对照。 可见从第 6份
以后为纯的冬凌草甲素。减压浓缩 ,用甲醇进行重结
晶 ,减压过滤后 ,用少量丙酮洗至白色 ,干燥得白色
结晶。
2. 2　薄层色谱分析:将冬凌草甲素对照品和供试品
用甲醇溶解后 ,在同一硅胶薄层板上点样 ,以氯仿-
甲醇 ( 9∶ 1)展开 ,取出 ,晾干 ,在紫外灯下观察 ,供试
品和对照品具有相同的 Rf值 ,并呈现同样的亮黄色
斑点 ,在冬凌草甲素的供试品中无杂质斑。
2. 3　 HPLC分析: 分得的冬凌草甲素供试品经
HPLC面积归一化法得纯度为 99. 85% 。并且样品
与对照品峰保留时间相同 ,大致可认定为同一化
合物。
2. 4　核磁共振 ( N MR)和红外光谱 ( IR)分析: 冬凌
草甲素供试品的 NM R和 IR图谱 ,与文献对照 ,基
本相同 [5 ]。 所以供试品可以确定为冬凌草甲素。
3　讨论
3. 1　此实验在柱色谱分离过程中供试品为粉末状
粗品 ,节省了硅胶的用量。
3. 2　减少了溶剂洗脱系统 ,这里仅用一套洗脱系
统 ,节省了洗脱时间。
3. 3　采用 N IR技术定性判定出不同提取时间下药
材中各组份溶出率不同。
3. 4　 HPLC, NMR, IR测试结果表明提取最终产物
为冬凌草甲素。
References:
[1 ]　 Research Team of An titumou r and Pharmacology, Medical
and Scien tif ic Insti tute of Henan. Research of anticancer and
pharmacolog y of Rabdosia rubescens [ J ]. J Henan Med Col l
(河南医学院学报 ) , 1975, 10( 2): 9.
[2 ]　 Col laborat ion Team of Rabdosia rubescens s Research of
Henan. 68 cases of clinical and medical observ ation of cu ring
oesophagus cancer and cardia cancer wi th Rabdosia rubescens
[ J ]. J Henan Med Coll (河南医学院学报 ) , 1976, 11( 5): 21.
[3 ]　 Wang M Y, Zhang T M. Probing of M-period function mecha-
nism to s everal tumour cel ls of oridonin [ J] . Chin J Can cer
(癌症 ) , 1984, 3( 2): 84.
[4 ]　 Fuji ta E, Fuji ta T, Katayama H, et a l. Terpenoids Part XV.
St ructure and absolute conf iguration of oridonin is olated f rom
Isodom japonicus and Isodon trichocarp us [ J] . J Chem Soc C ,
1970, 12, 1677.
[5 ]　 Team of Pharmacolog y and Pharmaceutical Chemist ry, Medi-
cal and Scien tif ic Ins titute of Henan. Research of ch emical and
pharmaceutical theory of Rabdosia rubescens [ J] . Ch in Tradi t
Herb Drugs (中草药 ) , 1977, 18( 10): 6-7.
·902· 中草药　 Chinese T raditional and Herba l D rugs　第 34卷第 10期 2003年 10月