全 文 ：2. 2　吲哚硫苷降解物对小鼠免疫功能的影响: 给小
鼠右腋窝 sc S180癌细胞悬液 0. 2 mL,分组及给药方
法同 2. 1. 1,连续 6 d,第 7天开始给每只小鼠 im
PHA 6 mg /kg ,连续 3 d,第 10天由小鼠尾静脉取
血推片 ,瑞氏染色 ,显微镜下数 100个淋巴细胞 ,淋
巴母细胞及过渡态细胞数 ,计算淋巴细胞转化率 [4 ]。
结果表明 , 2号 50% INDL-GLN 和 1 号 25%
IN DL-GLN治疗组与生理盐水组相比 ,有极显著性
差异 (P < 0. 01) ,而 CTX组与生理盐水组比较 ,无
明显差异 ( P> 0. 05) ,见表 2。
表 2　吲哚硫苷降解物对 S180小鼠的
淋巴细胞转化率的影响 (x± s)
组别 动物数
(只 )
剂量
( mg /kg )
淋巴细胞转化率
(% )
1号 25% INDL-GLN 10 27 37. 00± 4. 80* *
1号 50% INDL-GLN 10 54 32. 40± 5. 10
2号 25% INDL-GLN 10 180 30. 10± 3. 70
2号 50% INDL-GLN 10 360 40. 50± 6. 20* *
CTX 10 20 9. 80± 2. 60
生理盐水 10 - 29. 00± 5. 30
　　与生理盐水组比较: * * P < 0. 01
3　讨论
油菜是白花菜目十字花科中我国种植面积最大
的油料作物 ,吲哚类硫苷是油菜籽硫苷中的重要组
成部分。自 1974年加拿大育出第一双低油菜品种 ,
世界各国油菜育种家致力于降低油菜籽中硫苷含量
研究 ,并选育出适于不同生态种植的双低油菜品种。
研究发现这些双低油菜品种降低的硫苷含量主要是
脂肪族硫苷 ,而吲哚类硫苷含量保持相对稳定。本研
究采用从双低油菜籽中提取的吲哚类硫苷进行试
验 ,结果 2号 50% 吲哚硫苷降解物治疗组抑瘤率
71% , 1号 25% 吲哚硫苷降解物治疗组抑瘤率
59% ,从组织形态学上观察 ,吲哚硫苷治疗组与生理
盐水空白组相比 ,有明显的抑瘤作用 ,同时能提高淋
巴细胞转化率 ,说明吲哚硫苷降解物能抑制移植性
肿瘤的生长 ,具有抗肿瘤的作用 [5 ] ,其机制可能是通
过增强机体免疫力来实现的 ,而两种不同提取法制
备的高、低浓度的吲哚硫苷其抗肿瘤作用不同 ,可能
与吲哚硫苷纯度所含杂质成分有关 ,有待进一步的
深入研究。
参考文献:
[1 ]　 Peiwu l , So ren M, Peter M , et al . M icel lar elect rokinetic
Capillary ch romatograph y as a fas t, cheep, and ef fi cient
HPCE Method for s eparation and quan tif ication of intact and
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[2 ]　李和根 ,陈秀华 ,姚玉龙 ,等 . 金复康治疗肝癌的实验研究 [ J ].
中草药 , 2000, 13( 7): 533-535.
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中国协和医科大学联合出版社 , 1992.
[4 ]　朱忠勇 .实用医学检验学 [M ]. 北京:人民军医出版社 , 1992.
[ 5 ]　 Yannai S, Bradlow H L. International Euro Food Tox Ⅲ .
[M ]. Olsz tyn Poland, 1994.
四逆汤有效成分不同组合抗心肌缺血再灌注损伤的作用研究
孙慧兰 ,吴伟康
(中山大学中西医结合研究所 ,广东 广州　 510080)
摘　要: 目的　考察四逆汤有效成分不同组合抗心肌缺血再灌注损伤的作用。方法　采用正交试验法 ,以超氧化物
歧化酶 ( SOD)、丙二醛 ( MDA) 以及乳酸为指标 ,考察附子生物碱 ( A)、干姜挥发油 ( B)、甘草酸粗品 ( C) 3个因
素。 结果　 3种有效成分最佳剂量为 A4B4C4 , 3因素对 SOD和 M DA影响大小顺序为 A> C> B,对乳酸影响大小
顺序为 A> B> C。结论　 3种有效成分临床极量组合的疗效最佳。附子生物碱是四逆汤有效成分组合中的关键因
素 ,干姜挥发油和甘草酸粗品也是组方中不可或缺的因素。
关键词: 四逆汤 ;有效成分 ;心肌缺血再灌注 ;正交设计
中图分类号: R286. 2　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 04 0333 04
·333·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 4期
收稿日期: 2000-10-11基金项目:中山大学“ 211工程”重点建设项目 ( 98176) ; 广东省中医药管理局科研基金项目 ( 100118)作者简介:孙惠兰 ( 1972-) ,女 ,山西太原人 , 1995年本科毕业于山西中医学院临床专业 , 1997年硕士毕业于湖南中医药研究院中医内科专业 , 1997～ 1999年在山西中医药研究院中心实验室从事中药新药的开发工作 ,现为中山大学中西医结合研究所在读博士生 ,导师吴伟康教授 ,主要从事中西医结合心血管病理生理学研究 , Tel: 020-87331624　 E-mail: h jjlosh l@ 263. com
Studies on protective effect of SINI TANG
*
comprising active components combined at
different dosage on myocardial ischemia reperfusion injury in mice
SUN Hui-lan, WU Wei-kang
( Institute of Integ r ated T raditional Chinese and Weste rn Medicine, Sun Ya t-sen Univ er sity ,
Guang zhou Guangdong 510080, China )
Abstract: Object　 To study the protectiv e effect o f SIN I T AN G comprising active components com-
bined at dif ferent do sage on myocardial i schemia reperfusion injury in mice. Methods　 In the studies, the
experiment w as perfo rmed by o rthogonal design, the lev els of SOD, MDA and lactate in cardiac muscle
w ere regarded as criterion for ev alua tion of the every composi tion, three active components w ere studied
including the alkaloid ( A) f rom Aconitum carmichael i Debx. , the volati le oi l ( B) f rom Zingiber of f icinale
Rosc. and crude glycy rrhizic acid ( C) f rom Glycy rrhiza uralensis Fisch. Results　 The optimal composition
comprised A at dose of 31. 2 mg /kg , B at dose o f 1. 84μL /kg and C at do se of 4. 68 mg /kg ( A4B4 C4 ) . The
ef fect of th ree activ e components on SOD and MDA was A> C> B and lactate w as A> B> C. Conclusion　
The optimal SIN I TANG composi tion comprises three activ e components combined at clinical maximal
dosage show ed the best therapeutic efficacy, o f which A is a key factor and B, C a re necessary facto rs fo r
the composition in SINI T ANG.
Key words: SIN I TAN G; activ e components; myocardial i schemia reperfusion; orthogonal design
*
SIN I TAN G is Chinese herbal decoction w ith the function o f recuperating depleted yang and rescuing
the pa tient f rom collapse.
　　四逆汤是汉代张仲景《伤寒杂病论》中用于治疗
少阴虚寒证的主方 ,由附子、干姜、甘草组成。具有温
中祛寒 ,回阳救逆之效。近年来发现四逆汤具有很好
的抗心肌缺血及再灌注损伤 ,保护心肌的作用 [1 ]。但
目前对这种疗效的化学物质基础尚不清楚。一般认
为四逆汤组成中与心血管系统相关的化学成分为附
子中的生物碱、干姜中的挥发性成分及甘草中的三
萜皂苷类 [2 ]。我们通过正交试验综合考察了这 3种
成分抗心肌缺血再灌注氧自由基损伤及无氧酵解的
作用。
1　材料
1. 1　药材:附子、干姜、甘草购自广州市药材公司。
1. 2　实验动物:昆明种小鼠 ( 23± 1) g ,雌雄各半 ,
由中山医科大学实验动物中心提供。
1. 3　主要试剂: 垂体后叶素 (批号 001226) ,上海
第一生化药业公司上海生物化学制药厂 ;硫代巴妥
酸 ( TBA) , Sigma公司。
1. 4　主要仪器: 内切式匀浆机 ,中山医科大学仪器
厂 ; R-100型低速冷冻离心机 ,日本 TOMY SEIKO
公司。
2　方法
2. 1　动物模型:垂体后叶素 ( Pi t )性心肌缺血动物
模型 ,小鼠 ip Pit ( 20 U /kg ) , 5 min后冠脉营养血
流量 ( NBF)已经有十分显著的下降 ,至 20 min时
降到最低点 ,然后逐步回升 ,至 80 min恢复到注药
前水平 ,而且伴随显著的自由基反应 [3 ]。最近发现小
鼠在 ip Pit后 80～ 100 min有心肌细胞凋亡的现
象 ,可能是缺血再灌注所致 [4 ]。因此 ,我们采用该缺
血再灌注模型。
2. 2　实验方法:四逆汤有效成分—— 附子生物碱
( A)、干姜挥发油 ( B)、甘草酸粗品 ( C)由本所制剂
室提取。综合参考《伤寒论》四逆汤原方剂量、临床用
量及有效成分提取极量确定实验水平数和小鼠每日
服用剂量 ,选用正交表 L16 ( 45 )安排实验 ,因素及水
平如表 1。
表 1　四逆汤有效成分 L16 ( 45 )正交设计因素水平表
水平
因　素
A
( mg /kg)
B
( mg /k g)
C
( mg /kg)
空白
( D)
空白
( E)
1 0 0 0
2 7. 8 0. 46 1. 17
3 15. 6 0. 92 2. 34
4 31. 2 1. 84 4. 68
　　昆明种小鼠随机分为 16组 ,每组 8只 ,雌雄各
半。实验前 3 d按上述正交表及相应药物 ig ( 0. 2
mL /10 g体重 ) ,每日 1次 ,第 3天 ig 30 min后 ip
Pit ( 20 U /kg )造模 , ip 80 min后取心肌测 SOD活
力、 MDA及乳酸含量。
2. 3　统计分析:用直观分析法和方差分析法对实验
结果进行分析。
3　实验结果
四逆汤有效成分正交实验结果:见表 2。
3. 1　用直观分析法分析试验结果
·334· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 4期
表 2　四逆汤有效成分正交试验结果
试验号 因素
A B C D E
SOD
(μ/ 100 mg)
MDA
( nmol /100 mg )
乳酸
(μmol /100 mg )
1 1 1 1 1 1 101. 4 69. 3 2. 41
2 1 2 2 2 2 100. 9 67. 6 2. 03
3 1 3 3 3 3 102. 6 68. 7 1. 87
4 1 4 4 4 4 110. 4 60. 1 1. 91
5 2 1 2 3 4 107. 2 63. 1 1. 83
6 2 2 1 4 3 105. 8 63. 0 1. 75
7 2 3 4 1 2 113. 4 56. 4 1. 75
8 2 4 3 2 1 112. 5 58. 6 1. 71
9 3 1 3 4 2 111. 2 57. 6 1. 71
10 3 2 4 3 1 117. 1 52. 2 1. 56
11 3 3 1 2 3 114. 3 55. 1 1. 32
12 3 4 2 1 4 114. 7 55. 9 1. 05
13 4 1 4 2 3 120. 1 47. 4 1. 40
14 4 2 3 1 4 115. 7 54. 1 1. 28
15 4 3 2 4 1 117. 7 50. 7 0. 91
16 4 4 1 3 2 118. 8 49. 3 0. 88
　 　K 1 415. 3 439. 9 440. 3 445. 2 448. 7
K 2 438. 9 439. 5 440. 5 447. 8 444. 3
SOD K 3 457. 3 448. 0 442. 0 445. 7 442. 8
K 4 472. 3 456. 4 461. 0 445. 1 448. 0
R 57. 0 16. 9 20. 7
K 1 265. 7 237. 4 236. 7 235. 7 230. 8
K 2 241. 4 236. 9 237. 3 228. 7 230. 9
MDAK 3 220. 8 230. 9 239. 0 233. 3 234. 2
K 4 201. 5 223. 9 216. 1 231. 4 233. 2
R 64. 2 13. 5 22. 9
K 1 8. 22 7. 35 6. 36 6. 49 6. 59
乳酸 K 2 7. 04 6. 62 5. 82 6. 46 6. 37
K 3 5. 64 5. 85 6. 57 6. 14 6. 34
K 4 4. 47 5. 55 6. 62 6. 28 6. 07
R 3. 75 1. 80 0. 80
3. 1. 1　比较极差大小排定因素影响顺序: A对氧
自由基指标 SOD和 MDA影响最大 ,其次是 C,最
后是 B; A对无氧代谢指标乳酸影响最大 ,其次是
B,最后是 C。
3. 1. 2　由综合平均值的大小选取各因素的最佳水
平组合: A4 B4 C4 (附子生物碱 31. 2 mg /kg ,干姜挥发
油 1. 84μL /kg ,甘草酸粗品 4. 68 mg /kg )。
3. 2　用方差分析法分析试验结果:见表 3～ 5。
表 3　 SOD方差分析表
方差来源 平方和 自由度 均方 F值 P值
A 　　 SSA= 451 3 150 150 < 0. 01
B 　　 SSB= 48 3 16 16 < 0. 01
C 　　 SSC= 76 3 25 25 < 0. 01
D SS误= SSD+ SSE= 7 6 1
表 4　MDA方差分析表
方差来源 平方和 自由度 均方 F值 P值
A 　　 SSA= 567 3 189 189 < 0. 01
B 　　 SSB= 30 3 10 10 < 0. 01
C 　　 SSC= 88 3 29 29 < 0. 01
D SS误= SSD+ SSE= 7 6 1
　　从表 4可知 ,各因素对 MDA影响主次顺序为
A> C> B,与直观分析所得结论一致。
表 5　乳酸方差分析表
方差来源 平方和 自由度 均方 F值 P值
A 　　 SSA= 1. 5 3 0. 50 71. 43 < 0. 01
B 　　 SSB= 0. 49 3 0. 16 22. 86 < 0. 01
C 　　 SSC= 0. 1 3 0. 03 4. 28 > 0. 05
D SS误= SSD+ SSE= 7 6 0. 07
　　从表 5可知 ,各因素对乳酸影响主次顺序为
A> B> C,与直观分析所得结论一致。C因素对于乳
酸无明显影响。
4　讨论
良好的血液循环是心肌组织细胞获得充足的氧
和营养物质供应并排出代谢产物的基本保证 ,各种
原因造成的心肌组织血液灌流量减少可使心肌细胞
发生缺血性损伤 ,尽早恢复其血液灌流是减轻缺血
性损伤的根本措施。 近年来 ,随着溶栓疗法、动脉搭
桥术、经皮腔内冠脉血管成形术 ( PTCA)、心脏外
科体外循环等方法的建立和推广 ,使缺血心肌重新
获得血液供应 ,明显减轻了心肌细胞损伤 ,提高了临
床疗效。但是在动物实验和临床观察中也发现 ,恢复
·335·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 4期
血液再灌注后 ,部分动物或患者心肌细胞功能代谢
障碍及结构破坏反而加重 ,发生了缺血再灌注损伤。
再灌注过程中氧自由基大量生成是造成这种损伤的
重要原因之一。另外 ,缺血及再灌注过程中无氧酵解
产物乳酸增加 ,造成的心肌组织细胞酸中毒也是导
致缺血再灌注损伤的原因。附子生物碱、干姜挥发油
及甘草酸粗品都可不同程度地提高心肌氧自由基清
除剂 SOD活性 ,降低心肌氧自由基反应产物 MDA
含量 ,并可减少心肌无氧酵解产物乳酸的生成。 3种
有效成分临床极量组合的疗效最佳。 无论对于心肌
氧自由基损伤还是无氧酵解的疗效 ,附子都是处方
中的关键因素。干姜挥发油对无氧酵解的疗效起较
重要作用而甘草酸粗品对氧自由基损伤的疗效起较
重要作用。说明附子生物碱是四逆汤有效成分组合
中的关键因素 ,干姜挥发油和甘草酸粗品也是组方
中不可或缺的因素。 这种有效成分的组合特性从另
一侧面体现了中药处方配伍的科学性以及治疗疾病
的多靶点的特性。通过四逆汤组成方药有效成分的
提取 ,可以减少其毒副作用 ,从而增加临床治疗的有
效剂量 ,并为将其制成缓释剂奠定基础。
参考文献:
[ 1 ]　吴伟康 ,苏建文 ,林曙光 ,等 . 四逆汤防治 P TCA术后再灌注
损伤的作用机制及中医辨证分型的临床研究 [ J ]. 中国中西医
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苑出版社 , 1998.
[3 ]　吴伟康 ,侯　灿 ,罗汉川 ,等 . 垂体后叶素性心肌缺血模型再探
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肌细胞凋亡 [ J] .中国心血管杂志 , 1999, 4( 3): 159-161.
调肝导浊中药对家兔实验性动脉粥样硬化脂质代谢的影响
金　华 ,陆一竹 ,陈　静 ,范英昌
(天津中医学院 ,天津　 300193)
摘　要: 目的　观察调肝导浊中药对家兔实验性动脉粥样硬化 ( AS)血 ApoB含量、动脉硬化指数 ( A I)及体外培
养大鼠肝细胞膜低密度脂蛋白 ( LDL )受体的影响 ,探讨调肝导浊中药防治 AS的作用机制。方法　高胆固醇饮食
饲喂家兔造成 AS模型 ,并体外培养大鼠肝细胞 ,原位杂交检测肝细胞膜 LDL受体 mRN A表达。 观察药物对
ApoB含量、 AI及 LDL受体的影响。结果　 ( 1)调肝导浊中药可有效降低血清 ApoB含量 ,降低 AI,与模型组比较
具有非常显著性差异 (P < 0. 01)。 ( 2)调肝导浊中药对 LDL受体途径具有良好调节作用。结论　调肝导浊中药对
于 AS的防治作用与其对脂蛋白及载脂蛋白的调节作用密不可分。
关键词: 调肝导浊 ,动脉硬化指数 ;载脂蛋白 ;动脉粥样硬化 ;低密度脂蛋白受体
中图分类号: R286. 1　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 04 0336 03
Effect of Chinese drug TIAOGAN DAOZHUO
*
on lipid metabolism of
experimental atherosclerosis in rabbit
JIN Hua, LU Yi-zhu, CHEN Jing, FAN Ying-chang
( Tianjin Co llege o f TCM , Tianjin 300193, China)
Key words: T IAOGAN DAOZHUO; a therogenic index; apolipopro tein; a therosclerosis; low densi ty
lipoprotein accepto r
*
TIAO GAN DAOZHUO is a Chinese herb prescription w ith the function of regulating the disorder of
qi and removing turbid qi .
　　高脂血症是动脉粥样硬化 ( AS)的原因已被确
认 ,其中血浆胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白
( LDL)过高均为 AS的危险因子 ,而高密度脂蛋白
( HDL)则对其具有防治作用。我们采用实验性 AS
家兔模型 ,观察调肝导浊中药对载脂蛋白 ( Apo) 含
量及动脉硬化指数 ( AI) 的影响 ;并体外培养大鼠
肝细胞 ,原位杂交检测肝细胞膜 LDL受体 mRNA
表达。
·336· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 4期
收稿日期: 2001-08-29基金项目:天津市自然科学基金资助课题 ( No. 003607911)