全 文 ：女贞和小蜡果实中有效成分的动态分析与测定
浙江医科大学药学系 (杭州 3 1 0 0 3 1) 徐娟 华 ` 黄亦佳 稽宏亮 ` ’
摘 要 对女贞 及 g us tur m luc id u m Ai t .和小蜡 L . : i en ns 。 L uo r . 两植物的果实中多糖 、 酪醇 、 齐
墩果酸的含量进行动态分析 , 对其在果皮和种子中的含量进行 比较 ,对 日本女贞 L . 少aP on i cu m
T h u m b
. 也进行了上述 3 者的含量测定 ,结果发现 : a )小蜡果实中 3 者含量均 明显高于女贞子 ; b)
女贞果实多糖含量以外果皮最高 ,小蜡果皮与种子中两者相近 ; c )两种果实酪醇含量均以种子为
高 ; d) 小蜡中齐墩果酸含量果皮远高于种子 。
关键词 女贞 小蜡 日本女贞 多糖 酪醇 齐墩果酸 动态分析
女 贞子 为木 犀 科 女 贞 属 植 物 女 贞
iL g
u st ur m lu ic d
u m lA t
. 的干燥成熟果实 ,具
有滋补肝肾 , 明目乌发之功效 仁` , 2 〕 。 现代研究
表明有增强机体免疫功能 , 抑制肿瘤细胞逆
转录酶和 D N A 聚合酶的作用 。 其主要有效
成分为多糖 、 酪醇 、 齐墩果酸等 3[ 一 6〕 ,其中酪
醇即红景天贰元 ,具有较强的护体强健作用 ,
我们发现女贞子中酪醇含量较高川 ,这对于
女贞子的传统扶正 固本也很重要 。 为了更加
合理利用药用资源 ,对杭 州产不 同时期样品
进行了三者含量的动态分析 。
小蜡 L . 、 i n en s 。 L o 盯 . 也为木犀科女 贞
属植物 ,主要分布我国长江以南各省 ,浙江省
主要在 山区 、 半山区 , 资源也很丰富 , 依据植
物的亲缘关系 , 我们也进行了多糖 、 酪醇及齐
墩果酸的含量动态研究 , 以期寻找小蜡果实
资源开发利用的科学依据 。
同时还对上述两者果实的不 同部位 (女
贞 : 外果皮 , 内果皮 , 种子 ;小蜡 : 果皮 , 种子 )
和 日本女贞 ( L刁￡之户on icu m T h u m b . , 杭州市
植物园 )这 3 种成分进行了含量测定和 比较 。
1 多糖的含量测定 〔g , ’ 」(苯酚 一硫酸法 )
1
`
1 提取与精制 : 取过 20 目筛的女贞子粉
末 10 0 9 置圆底烧瓶中 , 加 95 % 乙醇回流 4
次 , 每次 2 0 0 m L , 一 s h 。 取残渣 , 加水 6 0 0
m L 煮 s h , 过滤 ,滤液加 95 % 乙醇至含醇量
为 5 。% ,静置过夜 ,郭心 ,沉淀用无水 乙醇洗
3 次 , 每次 1 0 m L ,再加少量水溶解 ,用活性
炭脱色 2 次 ,再加 乙醇至含醇为 50 % , 静置
过夜 , 离心 , 沉淀依次用无水 乙醇洗 5 次 ,丙
酮洗 5 次 , 得精制女贞多糖 , 于 60 ℃烘干备
用 。
同法制得精制小蜡多糖 。
.1 2 含量测定
1
.
2
.
1 材料 、 试剂和仪器 : 女贞果实 、 小蜡果
实和 日本女贞果实采 自杭州市和 德清县 , 由
第一作者鉴定 。
称取重蒸馏的苯酚 ( 1 8 2℃馏分 ) 10 9 ,加
水 1 50 m I J 混匀 , 使溶解 ,置棕色 瓶中于冰箱
中备用 。 乙醇等试剂为分析纯 。
D U
一
6 5 分光光度计 ( B E C K M A N 公司
制造 ) , Q Y 一 20 A 取液器 (北京青云航空仪表
公 司 ) , L X J 一 6 4一 01 离心 机 ( 北 京 医 疗仪 器
厂 ) 。
1
.
2
.
2 标准曲线 : 精密称取 10 5℃干燥至恒
重的标准葡萄糖 1 0 m g 置 1 0 m L 容量瓶
中 ,加水适量溶解 ,稀释至刻度 ,摇匀 。精密移
取 1 0 . 0 0 m L 于 1 0 0 m L 量瓶中 , 加 水至刻
度 , 即得浓度为 0 . 1 m g /m l一 的标准液 。
精取 。 . 10 、 。 . 20 … … 。 . 80 m I J , 各置 l()
,
A d d r e
s s :
X位 Ju a n h u a , D e p a : t r n e n t o f r h a : m a ` y , Z h e J l a n g M e d l e a l U I、 Iv e : c l t y , H a n g z h o u徐娟华 硕士研究生 ,副教授 ,专业研究方向为天然药物活性成分 ,现 阶段 主要工作为女 贞子等药 的护肝活性成分和 海藻类资源开发研究 。 近几年发表的有关论文为 : 女贞子中红景天俄元的分析和含量测定 〔现代应用药学 , 1 9 95 . 1 2 ( 4 ) : 2 。〕 、 女贞和小蜡中有效成分的分离与检测 〔中国现代应用药学 , 1 9 7 , 14 (4 ) : 14 〕 。
二 二 本校 96 届实习生 ,现在浙江省湖州市第三人民医院工作 。
《中草药》 1 9 98 年第 29 卷第 3 期 · 1 6 7 ·
m L 容量瓶中 ,加蒸馏水使成 2 . 0 m L ,再加
5 %苯酚试液 1 . 50 m I J , 摇匀 ,迅速滴加浓硫
酸 6 . 50 m I J ,迅速摇匀 ,放置 5 m in ,置沸水浴
中加热 15 m in , 取 出 ,迅速冷至 室温 ; 另以
2
.
o o m工J 蒸馏水同样操作 ,作为空白对照 ,按
分光光度法在 49 0 n m 处测定吸收度 。 绘制
标 准 曲线 , 求得 回 归方 程 : Y ( 拜g /m L ) 一
0
.
5 0 4 7 + 1 3
.
7 0 7 5 X
, r = 0
.
9 9 9 9 6
。
1
.
2
.
3 换算因子 : 精密称取 60 ℃干燥至恒
重的精制女 贞多糖 49 . 5 m g , 定容到 2 50
m I
J , 作贮备液 。 再同法得小蜡多糖的贮备液
( 50
·
4 m g / 2 5 0 m L )
。 分别精密吸取贮备液
0
.
4 0 m L
, 按标准 曲线的制备项下的方法测
定吸收度 ,代入标准 曲线 ,求得相 当多糖液的
葡萄糖浓度 ( 拜g /m L ) ,计算换算因子 ,女贞 多
糖 f 为 5 . 1 1 8 8 ,小蜡多糖 f 为 7 . 1 3 3 0 。
1
.
2
.
4 糖含量 : 精密称取 1 05 ℃干燥恒重的
女贞子粉 、 小蜡果粉 0 . 50 9 置烧瓶中分别加
8 5 % 乙醇 1 0 m l ,水浴回流 l h ,乘热过滤 ,
洗涤 残渣 , 挥去 乙醇 , 加蒸馏水 85 m l、 回流
1
.
s h
, 乘热过滤 , 再用热 的蒸馏 水洗涤残渣
数次 ,合并滤液于 2 5 0 m I J 容量瓶中定容 。 置
冰箱备用 。
表 1 3 种果实中多糖 、酪醉和齐
墩果酸的含量测定结果
植物
名称
测 定
部位
采集
地点
采集时 间 多糖( % ) 酪醇
齐墩果酸
(% ) (% )
女贡 一果实 杭州 1 9 95一 2 1 9 . 1 7 0 . 6 1 6 7 1· 7 1 11女贞 果实 杭州 19 95一 1 2 1 0 . 1 1 0 . 5 6 0 3女贞 果实 杭州 19 9 6一 0 1 1 2 . 8 3 0 · 5 2 5 3
女贞 果实 杭州 19 9 6一 0 2 1 2 . 8 2 0 . 4 2 4 8女贞 外果皮 杭州 1 9 9 6一 0 1 1 7 . 8 0 0 · 3 7 5 9
女贞 内果皮 杭州 1 9 9 6一 0 1 7 . 5 9 0 . 3 1 2 0女贞 种子 杭州 1 9 9 6一 0 1 1 2 . 8 9 0 . 5 5 4 5女贞 果实 德清 1 9 9 6一 0 2 6 . 5 1 0 . 9 3 9 5 2 . 1 1 7 7
日本女贞 果实 杭州 1 9 9 5一 1 2 1 3 . 3 2 0 . 5 6 9 7 2 . 4 6 1 1小蜡 果实 杭州 1 9 9 5一 a l 1 7 . 4 6 0 . 8 3 8 6 2 . 1 1 0 7
小蜡 果实 杭州 1 9 9 5一 1 2 2 5 . 3 4 1 . 0 1 1 2 1 . 5 8 5 0小蜡 果实 杭州 1 9 9 6一 0 1 2 3 . 0 0 1 . 0 0 7 3 1 . 2 1 4 1
小蜡 果实 杭州 19 9 6一 0 2 2 4 . 1 1 ( ) . 8 3 3 4 0 · 8 0 2 6小蜡 果皮 杭州 1 9 9 5一 1 2 2 0 . 2 6 0 . 57 9 0 2 . 8 1 7 3
~业攫乙二生乙` 远也.…. 尸 9 5一 1 2 20 , 7旦一 !卫呈2盛旦 i 塑卫
精密吸取各样品液 0 . 5() m L 于试管中 ,
分别加蒸馏水 1 . 50 m l一 , 按 “ 标准曲线 ” 项下
“ 加苯酚试剂 1 . 5() m l … … 在 4 9 0 n m 波长
处 ” 测定吸收度 。 计算各样品中多糖含量 。 见
表 1 。
·
1 6 8
-
1
.
2
.
5 回收率 : 精密吸取多糖样 品液 0 . 25
m L
,加相应的精制多糖贮备液 。 以未加贮备
液的样品液 为空 白 , 依上法测 定含量 , 计算
得 : 女 贞多 糖 回 收 率 为 9 . 6 % , R S D 一
1
.
4% ;小蜡多糖回收率为 1 02 . 0% , R S D -
2
.
6 %
。
2 酪醇的含量测定〔 , , “ 〕 (单波长薄层扫描法 )
2
.
1 试剂与仪器 : 酪醇对照品 , 其它所用试
剂均为分析纯 ; 层析展开剂为氯仿 一乙酸乙醋
( 6
: 1 )
, 展开 3 次 , 高效薄层硅胶板 , 以碘熏
定位 。
日本岛津 C S 一 93 0 双波长薄层扫 描仪 ,
扫描范围 2 0 0 一 3 7 0 n m , 入卿 一 2 9 0 n m , 反射
法锯齿扫描 , S x 一 。 ,狭缝 2 n m 又 4 n m 。
2
.
2 标准曲线 : 精密称取一定量的酪醇对照
品 , 用无水乙醇配制浓度为 0 . 1 68 m g / m I J 的
标准溶液 ,分别点 2 . 0 、 4 . 0 、 6 . 0 、 5 . 0 、 1 0 . 0 、
1 2
.
0 川 2 于同一薄层板上 , 上行展开 8 . 5 c m
展开 3 次 ,待展开剂挥尽后 ,碘熏显色 定位 ,
于波长 29 0 n m 处测 定斑点面积 值 , 得标准
曲线 , 回归方程为 : Y = 3 2 5 7 5 . 8 8 + 1 14 7 9 0 .
7 7 X
, r = 0
.
9 9 8 5
。
2
,
3 酪醇含量 : 精取各种干燥至恒重的女贞
子粉 、 小蜡粉约 1 . 0 9 于烧瓶中 , 加 1%的硫
酸加热回流水解 , 水解液调 p H 至 4 一 5 , 过
滤 , 滤液蒸干 , 再用 95 % 乙 醇 回流提取 , 过
滤 , 回收乙醇 , 定容至 10 m L 。 薄层板上点样 ,
展开 , 显色 ,定位 , 扫描 ,计算含量 。 结果见表
1
。
2
.
4 回收率 : 精密吸取酪醇对照 品液 2 . 50
m L
,各加 入一定量样 品 , 以未 加标准品的样
品液为对照 , 依上法操作 , 测得酪醇回收率
为 : 9 9 . 0 4 % , R S D = 1 . 0 4 % 。
3 齐墩果酸的含量测定〔10 」(双波长扫描法 )
3 1 试剂与仪器 : 齐墩果酸标准品 (中国药
品生物制品鉴定所 ) , 其它所用试剂均为分析
纯 ;展开剂为氯仿 一甲醇 ( 20 , 1 ) , 高效薄层
板 , 5 0 %硫酸显色 , 8 0 亡烘烤 2 0 tn i n 。
日本岛津 C S 一 9 30 双波长薄层扫描仪 ,弋
一 5 3 0 n m , 入R ~ 6 4 0 n m ,反射法锯齿扫描 , S x
~ 3
,狭缝 2 n m 火 2 n rn 。
3
.
2 标准曲线 :精密称取一定量的齐墩果酸
标准 品 , 用 95 % 乙醇配制浓 度为 1 . 20 m g /
m L 的标准溶液 , 分别点 2 、 4 、 6 、 8 、 1 0 、 12 爪 J
于同一薄层板上 ,上行展开 8 . 5 c m , 待展开
剂挥尽后 , 用 50 % 的硫酸显色 , 置 80 ` C 烘烤
20 m in
,取出后立即用一洁净的玻璃板盖上 ,
四周用胶布封牢 。稍冷后测定 ,得标准曲线回
归 方程 : Y = 2 9 3 5 1 . 8 7 + 1 9 4 9 9 . 6 5X , ,一
0
.
9 9 9 1
。
3
.
3 齐墩果酸含量 : 精密称取各种干燥恒重
的女 贞子粉 、 小蜡粉约 1 . 0 9 , 分别加蒸馏水
s m I
J , 浓盐酸 s m l J , 氯仿 Z o m I J , 于 8 5 C 水
浴回流提取 2 . s h , 分出氯仿 ,酸水液用氯仿
萃取 2 次 , 每次 20 m L , 合并氯仿 , 回收后氯
仿定容至 10 m I J 。 薄层板上点样 , 展开 ,显色 ,
扫描 ,计算含量 。 结果见表 1 。
3
.
4 回收率 : 精密量取齐墩果酸标准品液
(1
·
20 m g / m L )0
.
80 m L
,再分别加入一定量
的样品液为对照 , 于 2 m I J 容量瓶中 , 加氯仿
定容 。 点样 , 展开 , 显色 ,定位 ,扫描 ,计算 . 得
齐墩果酸回收率为 1 01 ` 5 % . R S D 一 o . 7’l % 。
3
.
5 稳定性 : 依上操作 , 每隔 l h 测定斑点
面积值 ,结果在 Z h 内稳定性良好 。
4 小结与讨论
4
.
1 由多糖含量测定可见 : a )小蜡 > 日本女
贞 > 女 贞 (杭 州 ) > 女 贞 ( 德清 ) ; b )女 贞 : 外
果皮 > 种子 > 内果皮 ,小蜡 : 果皮与种子两者
含 量 相 近 ; c ) 女 贞 : 1 9 9 5 一 1 < 1 9 9 5 , 1 2 <
1 9 9 6
一
0 1 < 1 9 9 6
一
0 2
, 小蜡 : 1 9 9 5一 1 1 > 1 9 9 5一 1 2
< 1 9 9 6
,
01 < 1 9 9 6 0 2
, 即 两者的多糖含量均
于果实成熟后期较高 。
4
.
2 由酪醇含量测定可见 : a) 小蜡 > 日本女
贞> 女 贞 (杭州 、 德清 ) ; b) 女 贞 : 种子 > 外果
皮 、 内果皮 ,小蜡 : 种子 > 果皮 ; c )女贞 : 1 9 9 5一
1 1 > 1 9 9 5
一
1 2 > 1 9 9 6
一
0 1 > 1 9 9 6
一
0 2
, 小 蜡 :
1 9 9 5
一
1 1 < 1 9 9 5
一
1 2
、
1 9 9 6
一
0 1 < 1 9 9 6
一
0 2
, 即两
者的酪醇含量均 以果实成熟前期较高 。
4
.
3 由齐墩果酸含量测定可见 : a) 小蜡 、 女
贞 (杭 州 ) < 女贞 (德清 ) < 日本女 贞 ; b ) 小
蜡 : 果皮 > 种子 ; C ) 小蜡 : 1 9 9 5一 1 1 > 1 9 9 5一 1 2
> 1 9 9 6
一
0 1 < 1 9 9 6
一
0 2
。 文献记载 , 女贞子的齐
墩果酸也以 n 月较高 纽` ’ 弓, 且 以外果皮 的含
量最高口 2 1 。
4
.
4 综合女贞 、 小蜡中多糖 、 酪醇 、 齐墩果酸
3 者含量动态情况可见 , 杭州 产小蜡果实中
这 3 种成分的含 一鬓均高于女 贞子 , 且女 贞以
n 月 、 小蜡以 1 2一月、采收较好 , 此时酪醇和齐
墩果酸的含量相对均较高 ,果实产量也大 。
4
.
5 实验中发现用双波长扫描法测齐墩果
酸时展开之前先饱和 (约 1 0 m in ) 、 喷显色剂
适量 、 80 ℃显色后立 即用玻板盖住并 四周用
胶布封牢对实验结果稳定都很重要 。
参 考 文 献
1 江苏新 医学院编 中药大辞典 . 上册 . 卜海 : 上海 人民
出版社 , 19 7 7 . 2 3 8
2 吴立军
3 石立夫 .
4 李 勇 .
5 王德仁 ,
6 In o u g e
1 2 6 9 9 3 )
7 徐娟华 .
8 王 强 ,
9 李满 飞 ,
l 。 徐娟华
1 亦鹤鸣
1 2 李曼玲
等 . 沈阳药学院学报 , 1 9 9 4 , 1 1 ( 3 ) : 2 15
等 . 药学通报 , 1 9 9 5 , 3 0 ( 1 2 ) : 9 3 5
等 . 中草药 . 2 9 9 4 , 2 5 ( 8 ) : 4 4 1
等 · `扫草药 , 1 9 9 3 , 2 4 ( l 、 : 4
11
, 尸 1 a l . T e t r a飞l e d r o n . 1 9 7 2 , 2 8 : 4 2 3 ; C A . 7 7 :
等 . 现代应用药学 , 1 9 9 5 , 12 ( 4 ) : 20
等 . 中草药 , 1 9 9 1 , 2 2 ( 2 ) : 6 7
等 . 中草药 , 29 9 0 , 2 1 ( I f) ) : 1 0
, 等 . 现代应用药学 , 1 9 9 7 · 1生( 4 “
, 等 中草药 , 19 9 5 , 2 6 “ ) : 2 5 7
, 等 . 中国中药杂志 , 1 9 9 5 , 2 ( J (斗卜 2 16
( 1 9 9 7
一
0 6
一
0 6 收稿 )
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