全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
［2］ 王承南，夏传格． 厚朴药理作用及综合利用研究进展
［J］．经济林研究，2003，21 (3) :80.
［3］ 孟超，吴丰，马林．厚朴类中药厚朴酚及和厚朴酚含量
测定［J］．天然产物研究与开发，2007，19(6) :1024.
［4］ 张启荣，丁立，赵训明．厚朴对兔离体胃肠平滑肌运动
的影响［J］．陕西医学杂志，2007，36 (6) :656.
［5］ 彭博，贺蓉，杨滨，等． 厚朴和凹叶厚朴对实验性胃肠
动力障碍的药效作用差异研究［J］． 中国中药杂志，
2010，35(19) :2624.
［6］ 余盛贤．基于水溶性成分分析的厚朴质量评价［D］．北
京:中国中医科学院，2011:6.
［7］ 张春霞，杨立新，余星，等．种源、产地及采收树龄对厚
朴药材质量的影响［J］． 中国中药杂志，2009，34
(19) :1695.
［8］ 余盛贤，晏仁义，张春霞，等． 厚朴干皮商品规格的探
讨［J］．中药材，2011，34(4) :522.
［责任编辑 顾雪竹］
［收稿日期］ 20140106(026)
［基金项目］ 国家“重大新药创制”科技重大专项(2011ZX09401-307) ;广东省科技厅项目(2012A080204003) ;广州市生物产业科技重大
专项(201300000060) ;广东高校产学研结合示范基地项目(cgzhzd0905)
［第一作者］ 樊化，硕士，从事天然药物质量控制研究，Tel:020-85220504，E-mail:fh225@ 163. com
［通讯作者］ * 王治平，博士，副研究员，硕士生导师，从事中药药效物质、新剂型及质量控制研究，Tel:020-85220908，E-mail:wzping_jshb
@ 126. com
HPLC同时测定虎贞痛风胶囊中大车前苷、
虎杖苷、特女贞苷、白藜芦醇的含量
樊化1，崔蕴慧2，利弈成1，王治平3*
( 1. 暨南大学 生物医药研究院，广州 510632; 2. 暨南大学 附属第一医院，广州 510632;
3. 广东药学院 药科学院，广州 510006)
［摘要］ 目的:建立同时测定虎贞痛风胶囊中大车前苷、虎杖苷、特女贞苷、白藜芦醇含量的 HPLC 方法。方法:采用高
效液相法测定，色谱条件为 Agilent SB-C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相乙腈-0. 1%甲酸溶液梯度洗脱，检测波长
280 nm，流速 1. 0 mL·min －1，柱温 30 ℃。结果:大车前苷、虎杖苷、特女贞苷、白藜芦醇分别在 0. 099 6 ～ 1. 992 (r = 0. 999 9) ，
0. 123 ～ 2. 46 (r = 0. 999 9) ，0. 145 ～ 2. 90 (r = 0. 999 9) ，0. 025 ～ 0. 50 μg(r = 0. 999 8)与峰面积呈良好的线性关系，平均回收
率分别为 99. 27%，99. 43%，98. 83%，98. 07%。结论:该方法快速简便，重复性好，专属性强，可作为虎贞痛风胶囊的质量控制
方法。
［关键词］ 虎贞痛风胶囊;大车前苷;虎杖苷;特女贞苷;白藜芦醇
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)22-0049-04
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfjx． 2014220049
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /11． 3495． Ｒ． 20141010． 0949． 003． html
［网络出版时间］ 2014-10-10 9:49
Simultaneous Determination of Plantamajoside，Polydatin，Specnuezhenide
and Ｒesveratrol in Huzhentongfeng Capsule with HPLC
FAN Hua1，CUI Yun-hui2，LI Yi-cheng1，WANG Zhi-ping3*
(1. Jinan University Institute of Bioiogical Medicine，Guangzhou 510632，China;
2. The First Hospital of Jinan University，Guangzhou 510632，China;
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 22
Nov．，2014
3. School of Pharmacy，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China)
［Abstract］ Objective:The aim of this study was to establish a HPLC method for simultaneous
determination of the contents of plantamajoside，polydatin，specnuezhenide and resveratrol in Huzhentongfeng
capsules． Method:HPLC was used to determine the contents． The analytical column was Agilent SB-C18 column
(4. 6 mm ×250 mm，5 μm)． The liquid phase was composed of acetonitrile and 0. 1% formic acid with gradient
elution． The detection wavelength was set at 280 nm，the flow rate was 1. 0 mL·min －1 and the column temperature
was maintained at 30 ℃ ． Ｒesult:The mass of plantamajoside，polydatin，specnuezhenide and resveratrol with
peak areas were within the concentration ranges of 0. 099 6-1. 992 μg (r =0. 999 9) ，0. 123-2. 46 μg (r =0. 999 9) ，
0. 145-2. 90 μg (r = 0. 999 9) ，0. 025-0. 50 μg (r = 0. 999 8) ，and the average recoveries were 99. 27%，
99. 43%，98. 83%，98. 07%，respectively． Conclusion:The method is rapid and simple，highly reproducible
and specific so that it could be used as one of the quality control methods of Huzhentongfeng capsules．
［Key words］ Huzhentongfeng capsule;plantamajoside;polydatin;specnuezhenide;resveratrol
虎贞痛风胶囊由广州暨南生物医药研究开发基
地有限公司研制，目前正在进行三期临床试验。该
方由虎杖、车前草、女贞子、蜂房 4 味中药组成，具有
清热利湿、化瘀利浊、滋补肝肾的功效，用于湿热蕴
结所致的原发性急性痛风性关节炎。本实验选择
的 4 种指标成分的依据主要体现在虎杖苷和白藜
芦醇为方中君药虎杖的主要活性成分之一，具有
抗炎镇痛、保护心血管等药理作用［1］;大车前苷是
方中臣药车前草特征成分，具有抗炎利尿、解痉平
喘等药理作用［2］;特女贞苷是女贞子药材中的专
属性成分，具有较强的生理活性和药理作用［3］。
虎杖苷、大车前苷、特女贞苷分别是《中国药典》
2010 年版一部中虎杖、车前草、女贞子含量测定的
指标成分。本实验以大车前苷、虎杖苷、特女贞
苷、白藜芦醇为指标成分，采用 HPLC 同时测定其
含量，为该制剂建立了一种快速同时测定多成分
含量的方法。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪(配备在线脱气机，
2487 四元泵，717 自动进样器，2487 检测器) ，BT25s
型分析天平(Sartorius) ，2510E-DTH 型超声波清洗
仪(Bransonic)。
虎杖苷(批号 111575-200301，纯度 100%)、特
女贞苷(批号 111926-201001，纯度 94. 4%)、大车前
苷(批号 111914-201102，纯度 85. 9%)、白藜芦醇
(批号 111535-200502，纯度 100%)对照品均购自中
国食品药品检定研究院，供含量测定用;虎贞痛风胶
囊 3 批(广东一力药业集团有限公司生产，批号
130310，130311，130312) ，乙腈为色谱纯，水为超纯
水，其余为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Angilent SB-C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ，柱温 30 ℃，流动相乙腈(A)-0. 1%
甲酸水溶液(B)洗脱梯度(0 ～ 25 min，16% ～ 30%
A) ，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 280 nm，进样量
5 μL，外标法定量。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 混合对照品溶液 取大车前苷、虎杖苷、特
女贞苷、白藜芦醇对照品各适量，精密称定，加甲醇
分别制成每 1 mL含大车前苷、虎杖苷、特女贞苷、白
藜芦醇分别为 0. 996，1. 23，1. 45，0. 25 mg 的对照品
储备溶液，精密吸取上述 4 个对照品储备溶液各
1 mL，置 10 mL 量瓶中，加起始流动相定容至刻度，
摇匀，即得。
2. 2. 2 供试品溶液 取虎贞痛风胶囊内容物
0. 4 g，精密称定，精密加入稀乙醇 25 mL，称定质量，
超声处理 30 min(100 W，42 kHz) ，放置至室温，再
称定质量，用稀乙醇补足减失的质量，摇匀，取上清
液，滤过，取续滤液，即得。
2. 2. 3 阴性对照溶液 按处方比例分别称取除虎
杖、车前草及女贞子外的其余药材，按制备工艺分别
制成缺虎杖、车前草及女贞子的阴性样品，按 2. 2. 2
项下方法制备，即得。
2. 3 系统适用性试验 分别取混合对照品溶液、供
试品溶液和阴性对照溶液，在上述色谱条件下进行
分析，理论板数按虎杖苷计算不低于 3 000。4 种成
分与相邻吸收峰的分离度均大于 1. 5。阴性对照无
干扰。结果见图 1。
2. 4 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液在
上述色谱条件下分别进样 1，2，5，8，10，20 μL，记录
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1. 大车前苷;2. 虎杖苷;3. 特女贞苷;4. 白藜芦醇;
A1，A2，A3，A4. 对照品;B．混合对照品;
C．供试品;D1. 缺车前草阴性样品;
D2. 缺虎杖阴性样品;D3. 缺女贞子阴性样品
图 1 虎贞痛风胶囊 HPLC
色谱峰面积。以峰面积 Y 为纵坐标、对照品进样质
量 X(μg)为横坐标，进行线性回归，绘制标准曲线，
得各成分的回归方程见表 1，结果表明 4 种成分在
各自的进样量范围内线性关系良好。
表 1 大车前苷、虎杖苷、特女贞苷、白藜芦醇的
回归方程、相关系数和线性范围
对照品 回归方程 r 线性范围 /μg
大车前苷 Y = 1. 58 × 106X － 4. 8 × 104 0. 999 9 0. 099 6 ～ 1. 992
虎杖苷 Y = 8. 01 × 106X － 2. 24 × 104 0. 999 9 0. 123 ～ 2. 460
特女贞苷 Y = 9. 22 × 105X － 2. 49 × 104 0. 999 9 0. 145 ～ 2. 900
白藜芦醇 Y = 9. 25 × 105X － 8. 71 × 104 0. 999 8 0. 025 ～ 0. 500
2. 5 精密度试验 取混合对照品溶液按上述色谱
条件重复进样 6 次，记录峰面积。大车前苷、虎杖
苷、特女贞苷、白藜芦醇峰面积的 ＲSD 分别为
1. 18%，0. 58%，0. 70%，1. 15%，表明仪器精密度
良好。
2. 6 稳定性试验 取同一供试品溶液(批号
130310) ，按上述色谱条件分别在 0，2，4，6，8，12，
24 h进样分析，记录峰面积。大车前苷、虎杖苷、特
女贞苷、白藜芦醇峰面积的 ＲSD 分别为 2. 24%，
1. 38%，1. 85%，1. 62%，表明供试品溶液室温放置
24 h内稳定性良好。
2. 7 重复性试验 取样品(批号为 130310)按
2. 2. 2 项下方法制备 6 份供试品溶液，在上述色谱
条件下进样分析，大车前苷、虎杖苷、特女贞苷、白藜
芦醇含量 ＲSD 分别为 1. 58%，1. 24%，1. 19%，
1. 87%，表明方法的重复性良好。
2. 8 加样回收率试验 称取已知含量的虎贞痛风
胶囊样品(批号 130310)6 份，每份 0. 2 g，精密称定，
准确加入与样品中含量等量的对照品溶液。按
2. 2. 2 项下方法制备，依法测定，计算回收率。结果
见表 2。试验表明本法有良好的准确性。
表 2 虎贞痛风胶囊中大车前苷、虎杖苷、
特女贞苷、白藜芦醇的加样回收率
成分
样品中
量 /μg
加入量
/μg
测得量
/μg
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
大车前苷 363. 85 368. 52 725. 49 98. 13 99. 27 1. 85
367. 08 368. 52 731. 55 98. 90
369. 74 368. 52 739. 63 100. 37
352. 83 368. 52 715. 77 98. 49
373. 92 368. 52 751. 28 102. 40
360. 24 368. 52 718. 90 97. 32
虎杖苷 2 432. 05 2 460. 00 4 915. 31 100. 95 99. 43 2. 50
2 453. 64 2 460. 00 4 954. 67 101. 67
2 471. 42 2 460. 00 4 882. 39 98. 01
2 358. 39 2 460. 00 4 871. 26 102. 15
2 499. 36 2 460. 00 4 863. 50 96. 10
2 407. 92 2 460. 00 4 810. 94 97. 68
特女贞苷 2 355. 45 2 320. 00 4 583. 69 96. 04 98. 83 1. 73
2 376. 36 2 320. 00 4 671. 72 98. 94
2 393. 58 2 320. 00 4 706. 24 99. 68
2 284. 11 2 320. 00 4 625. 43 100. 92
2 420. 64 2 320. 00 4 688. 56 97. 76
2 332. 08 2 320. 00 4 643. 61 99. 63
白藜芦醇 210. 65 212. 50 422. 60 99. 74 98. 07 2. 51
212. 52 212. 50 419. 47 97. 39
214. 06 212. 50 417. 28 95. 63
204. 27 212. 50 421. 53 102. 24
216. 48 212. 50 421. 39 96. 43
208. 56 212. 50 414. 71 97. 01
2. 9 样品测定 取 3 份样品(130310，130311，
130312) ，分别按 2. 2. 2 项下方法制备供试品溶液各
·15·
樊化，等:HPLC同时测定虎贞痛风胶囊中大车前苷、虎杖苷、特女贞苷、白藜芦醇的含量
2 份，同法测定，结果见表 3。
表 3 虎贞痛风胶囊中大车前苷、虎杖苷、
特女贞苷、白藜芦醇质量分数 %
批号 大车前苷 虎杖苷 特女贞苷 白藜芦醇
130310 0. 17 0. 95 1. 23 0. 11
130311 0. 22 1. 08 1. 31 0. 15
130312 0. 19 1. 12 1. 15 0. 12
3 讨论
白藜芦醇在 306 nm 及 215 nm 处有最大吸收，
《中国药典》2010 年版一部中虎杖苷的检测波长为
306 nm，大车前苷为 330 nm，特女贞苷为224 nm，综
合上述条件，试验中选取 250，280，300 nm波长检测
供试品。结果供试品中虎杖苷在波长 250 nm 的分
离度较差，而供试品中特女贞苷在 300 nm 无法检
出。供试品中 4 种成分在 280 nm均能有效检出，且
峰形较好，故选择 280 nm 为检测波长。结果见
图 2。
图 2 虎贞痛风胶囊供试品在 250，300 nm波长处 HPLC
在已确定色谱柱的情况下，考察乙腈-水、乙腈-
0. 1%甲酸溶液、乙腈-0. 1%磷酸溶液 3 种流动相系
统，结果乙腈-0. 1%甲酸洗脱时 4 种成分分离较佳、
峰形较好。用乙腈-0. 1%甲酸溶液(16∶ 84)等度洗
脱时，白藜芦醇 70 min 才出峰，检测时间过长。而
优化梯度洗脱条件，使 4 种成分 30 min 内全部出
峰，且分离度较佳。
有文献报道分别测定大车前苷、虎杖苷、特女贞
苷、白藜芦醇含量方法［4-5］，但同时测定上述 4 种成
分的含量的方法未见报道。本实验建立的 HPLC 方
法，可以在短时间内快速分离检测虎贞痛风胶囊中
大车前苷、虎杖苷、特女贞苷、白藜芦醇 4 种主要成
分，能有效简化该制剂测定这 4 种成分的含量的操
作步骤，缩短检测时间，减少有机溶剂的使用，提高
工作效率，该方法经过考察，准确、快速、重复性好，
可用于虎贞痛风胶囊的质量控制。
［参考文献］
［1］ Falchetti Ｒ，Fuggetta M P，Lanzilli G，et al． Effects of
resveratrol on human immune cell function［J］． Life Sci，
2001，70(1) :81.
［2］ 夏玲红，金冠钦，孙黎，等．车前草的化学成分与药理
作用研究进展［J］．中国药师，2013，16(2) :294.
［3］ 高素强，周舒君，曹纪亮，等．中药女贞子化学成分及
质量控制方法的研究进展［J］． 中南药学，2012，10
(11) :835.
［4］ 吴杰．虎贞痛风胶囊质量标准研究［D］．广州:暨南大
学，2012.
［5］ 孙虔，耿放，程雪梅，等．车前草中大车前苷的定性和
定量分析［J］．中国中药杂志，2010，35(16) :2095.
［责任编辑 顾雪竹］
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