全 文 ：25. 6 mg/ mL 两组 MDA 含量变化不显著 ( P >
0. 05) , 但 6. 4 mg / mL 组 MDA含量增加。
表 1　LBP 对离体蟾蜍腓肠肌收缩持续时间的影响( x-±s)
LBP
( mg/ mL)
例
数
t0. 5(s )
对照组 给药组
抑制率
( % )
t0. 1( s)
对照组 给药组
抑制率
( % )
6. 4 7 415±44 323±61* * 22. 2 1 009±265 656±118* 35. 0
10. 0 5 361±46 266±58* * 35. 7 769±30 583±90* * 26. 8
14. 7 6 370±30 199±56* * 48. 1 965±95 465±88* * 51. 8
25. 6 7 330±17 191±28* * 42. 1 1 082±298 362±74* * 66. 5
　　与对照组相比较: * P > 0. 05　* * P < 0. 01
表 2　LBP 对蟾蜍腓肠肌标本肌乳酸及肌 MDA
含量的影响( x-±s)
LBP
( mg/ mL)
例数
肌乳酸( mmol/ g 组织)
对照组 给药组
MDA (nmol/ g组织)
对照组 给药组
6. 4 7 28. 40±3. 44 22. 53±2. 19* * 5. 27±1. 51 7. 88±1. 46* *
14. 7 6 31. 81±1. 03 25. 67±4. 49* 5. 16±2. 32 6. 12±2. 72*
25. 6 7 29. 59±2. 45 24. 17±4. 72* * 5. 45±2. 80 5. 94±1. 03*
　　与对照组相比较: * P > 0. 05　* * P < 0. 05
4　讨论
研究表明, LBP 在浓度 6. 4～25. 6 mg/ mL 范
围内对离体蟾蜍腓肠肌标本在电刺激条件下引发的
收缩疲劳有促进作用, 表现为给药组肌肉标本收缩
持续时间短于对照组( P< 0. 01)。
现代医学认为, 自由基损伤是肌肉疲劳的重要
原因之一[ 7] , 且损伤程度与运动强度有关 [ 10] , 而多
种天然抗氧化物质具有抗疲劳的作用[ 1, 2]。文献报
道, LBP 可降低体外氧化体系中大鼠线粒体膜
MDA 水平[ 9] ,对小鼠耗竭性运动的恢复有利 [ 5]。但
从本实验结果看, 对于离体肌肉标本一次性衰竭收
缩运动所产生的疲劳,在所有的浓度范围内 LBP 无
对抗作用,与在体实验的结果有差别。
文献报道[ 3, 5] ,在体实验条件下, LBP 可增加血
液和肌肉中的 SOD水平,对小鼠耗竭运动的恢复有
利, LBP 有潜在的抗疲劳作用。本文 LBP 对离体肌
肉的收缩能力有抑制作用, 使肌肉收缩的疲劳产生
加快,提示 LBP 对电刺激条件下引发的肌肉收缩有
抑制作用。肌乳酸含量降低( P< 0. 05) ,可能与无氧
供能减少有关。其与在体实验结果不同的原因有待
进一步研究。
参 考 文 献
1　郑荣梁,等 . 中国应用生理学杂志, 1991, 7( 3) : 285
2　郑荣梁,等 . 中国药理学报, 1993, 14(增刊) : 47
3　戴寿芝,等 . 老年学杂志, 1987, 7( 1) : 45
4　黎雪茹,等 . 中华微生物学和免疫学杂志, 1984, 4( 6) : 395
5　高天顺,等 . 宁夏医学院学报, 1994, 16( 2) : 101
6　Suar ez-Kurtz G. Am J Phys iol, 1981, 241: 98
7　莫　简 . 医用自由基生物学导论 . 北京:人民卫生出版社,
1989: 59
8　杨奎生,等 . 中国运动医学杂志, 1983, 2( 2) : 40
9　黄元庆,等 . 自由基生命科学进展( vol 2) . 北京: 原子能出版
社, 1994: 97
10　Lovin R. Eu r J Appl Phys iol, 1987, 56: 313
( 1999-06-24 收稿)
穿心草 酮抗氧化作用初探
中山大学生命科学学院药学系(广州 510275)　　杨东梅
　唐孝礼* * 　张奕强　许实波
摘　要　以正常大鼠组织匀浆、线粒体为材料研究穿心草 酮 ( 1, 6-二羟基-3, 5-二甲氧基 酮, Cansco ra
Xant hon, CX )抗脂质过氧化作用。以丙二醛( MDA )为指标, 观察 CX 对组织匀浆、线粒体体外脂质过氧化产
物 MDA 生成量的影响。以吸光度( A )值为指标,观察 CX对邻苯三酚自氧化产生的O÷2 及Cu2+ -Vit C 自由基
产生系统产生的·OH 的清除作用。结果 CX 抑制正常大鼠脑、肝、心、肾匀浆的体外过氧化脂质生成,抑制
Vit C 和 FeSO 4激发的线粒体膨胀。提示 CX能清除 O÷2 ,·OH。
关键词　穿心草 酮　丙二醛　脂质过氧化　O÷2　·OH
　　穿心草 Canscor a lucidissima( Lev l. et Vant . )
Hand. -M azz. 分布于广东、广西等地,资源丰富。民
间全草常用来治疗肝炎、黄疸、胃痛等疾患 [ 1]。穿心
草中含有多种活性成分,其药理作用极少见报道。穿
心草口山酮是中山大学化工学院天然有机室从穿心
草全草中分离出来的口山酮化合物(属黄酮类)。本文
首次报道穿心草口山酮( 1, 6-二羟基-3, 5-二甲氧基口山
酮, 简称 CX)的体外抗氧化实验研究。其结构式如
·358· 中草药　Chinese T raditional and Herbal Drug s　2000 年第 31卷第 5期

Address : Yang Dongmei, Department of Pharm acy, Col lgeg of L ife S ciences, Sun Yat-sen Un iversity, Guan gzhou杨东梅　女, 1997年毕业于中山大学生命科学学院药学系,获硕士学位,曾在广东省医学实验动物中心负责技术工作。现在广东药学院工作。
* * 现在中山医科大学药理室读博士后
图 1。
1　材料
图 1　穿心草 酮(CX)
的化学结构
SD 大鼠, 体重 ( 200
±20) g , 雌雄均有,由广
东省医学实验动物中心
提供; CX 从穿心草中提
取分离得到, 以含 0. 1%
二甲基亚砜和 0. 1%吐
温-80的双蒸水悬溶;邻苯三酚( pyrog allol) ,广州化
学试剂厂; 三羟甲基氨基甲烷( t risainol, Tris) , 上
海生化试剂厂( AR) ; 细胞色素 C, 徐州生物化学制
药厂; 硫代巴比妥酸 ( thiobarbituric acid, T BA ) ,
Sigma 产品;三氯乙酸( t richloroacet ic acid, T CA) ,
上海试剂三厂。
2　方法
2. 1　脂质过氧化与丙二醛( MDA)的测定
2. 1. 1　正常组织匀浆自氧化中 MDA 的测定: 参考
文献[ 2]法, 取正常 SD系大鼠, 脱臼处死, 迅速取出
内脏组织: 心、肝、脑、肾, 用冷生理盐水( 4 ℃)洗净
血液,冷生理盐水中剪碎,加冷生理盐水作 5%组织
匀浆,取匀浆 1 mL,加不同浓度的 CX或 Vit E 100

L,空白对照加同体积的溶媒, 置 37 ℃水浴中温孵
1. 5 h, 取出加 10%三氯乙酸 1 mL 终止反应, 加
0. 67%硫代巴比妥酸 1 mL, 沸水浴 15 m in, 冷却后
1 000 g 离心 10 m in, 取上清液测吸光度( A 532 nm) ,
根据 MDA 的消光系数
= 1. 56×10- 2 cm 2/ mol计
算匀浆脂质过氧化产物 MDA 的生成量,以 nmo l/ g
组织为计量单位。
2. 1. 2　半胱氨酸-硫酸亚铁自由基发生系统激发的
正常组织匀浆脂质过氧化中 MDA 的测定:方法同
实验 2. 1. 1, 但反应体系中加半胱氨酸( 0. 01 mol/
L ) 10
L、FeSO4·7H 2O( 0. 001 mol/ L) 20
L [ 2]。
2. 2　对大鼠肝脏线粒体膨胀的影响:线粒体的分离
参照文献[ 3] , 以分级沉淀差速离心法分离。其方法是
( 200±20) g SD系大鼠, 禁食过夜, 断椎处死,迅速
剖腹,剪开心脏,用注射器吸 4 ℃生理盐水 20 mL
自门静脉灌洗肝脏, 取肝称重, 冰浴下以 0. 25 mol/
L 蔗糖作 10%匀浆, 冰浴条件下, 以双层尼龙织物
过滤,收集匀浆放入离心管, 1 000 g 10 min( 4 ℃)
离心, 去质膜及细胞碎片, 上清液再以3 300 g 20
min 离心, 其沉淀即为线粒体, 以 20 mmol / L T ris-
HCl缓冲液(含 0. 125 mo l/ L KCl, pH 7. 4)重悬,经
两次洗涤后, 配制含蛋白 1 mg / mL 的线粒体悬液。
蛋白定量采用 Coomassie 亮蓝法[ 4]。大鼠肝脏线粒
体分离如上所述。取线粒体蛋白质 0. 5 mg, 分别加
不同浓度药物 10
L, 对照组以线粒体分离液代替,
再加 1 mmol/ L FeSO 4·7H2O, 1 mmo l/ L Vit C 各
20
L, 37℃温育 1 h, 721型分光光度计测A 520 nm变
化, A 520 nm降低表示线粒体发生肿胀, 设正常对照
组,其线粒体悬液不加 FeSO4 / Vit C。
2. 3　CX 对 O÷2 的清除作用: 邻苯三酚自氧化
法[ 5, 6] :邻苯三酚在碱性条件下( pH8. 2)发生自氧
化, 生成有色中间产物和 O÷2 , 而 O÷2 对自氧化有催
化作用,据自氧化速率( A 变化)估算 O÷2 的清除率。
具体操作是: 2. 4 mL T ris-HCl缓冲液( pH 8. 2) , 加
0. 1 mL 不同浓度的 CX, 混匀后加入 7 mmol / L 的
邻苯酚 0. 3 mL,混匀后在第 4 分钟时以 10 mol/ L
的 HCl 1滴中止反应, 测 A 325 nm值。
2. 4　CX 对·OH 的清除作用: 此实验中的自由基
发生系统( f ree radical g enerat ion system , FRGS)
的基本原理[ 7]是:
a sco rbate
C u2+ Cu+
H2O2
Cu2+ Cu + ·OH+ OH-
·OH+ Cyt·C(Ⅱ) OH- + Cyt·C(Ⅲ)
还原型细胞色素 C[ Cyt·C(Ⅱ) ]转变为氧化
型细胞色素 C[ Cyt·C(Ⅲ) ]的过程中, 其颜色由浅
红转变为浅黄, 据此采用比色法分析·OH 的生成
量。其具体操作是, 反应介质为 PBS ( pH= 7. 4) 2
mL,含 V it C 100
mo l/ L , CuSO 4 100
mol/ L , Cyt
·C (Ⅱ) 100
mol/ L。另含不同 CX浓度或 5. 8×
10
- 5
mol/ L Vit E(作阳性对照)。空白对照组则只含
上述反应介质, 而不含 CX、VitE。加入 Cyt·C(Ⅱ)
之后,混匀, 25 ℃水浴 90 min 后, 7550型分光光度
计测 A 550 nm,据细胞色素 C 的
= 0. 21 cm 2/ mol, 计
算·OH生成量。
3　结果
3. 1　CX 对正常大鼠脏器组织匀浆脂质过氧化的
影响: CX 对大鼠正常组织匀浆体外生成过氧化物
的自氧化作用有极显著的抑制作用。且其作用在
10
- 6～10- 4 mo l/ L 浓度范围内随剂量增加作用增强
(表 1)。CX极显著地抑制半胱氨酸-硫酸亚铁自由
基发生系统激发的过氧化脂质的生成, 并随剂量增
加作用增强(表 2)。
3. 2　对大鼠肝脏线粒体膨胀的影响: CX 可抑制
Vit C和 FeSO 4 激发的线粒体膨胀。线粒体肿胀与
脂质过氧化有关。脂质过氧化导致线粒体膜脂质及
蛋白质组分改变,进一步改变膜的屏障功能, 引起线
粒体呼吸状态的改变,使线粒体悬液A 520 nm下降。
·359·中草药　Chinese T raditional and Herbal Drug s　2000 年第 31卷第 5期
CX具有抑制脂质过氧化,保护线粒体结构的作用
(表 3)。
3. 3　对氧自由基( O÷2 )的清除作用: CX具有显著的
O
÷
2 清除作用(表 4)。
3. 4　对羟自由基的清除作用: CX 具有显著的
·OH的清除作用(表 5)。
表 1　对大鼠体外组织匀浆过氧化脂质生成的影响( x-±s, n= 3)
组别 浓度
( mol/ L)
丙二醛( nm ol / g)
　　心脏 　　肝 　　脑 　　肾
NS - 259. 36±13. 31 278. 42±15. 52 282. 11±34. 96 229. 84±11. 29
CX 1. 9×10- 4 28. 60±0. 99* * * 90. 36±7. 33* * * 93. 50±9. 76* * * 58. 06±4. 84* * *
　　( 88. 97) 　　( 67. 55) 　　( 66. 85) 　　( 74. 74)
6. 3×10- 5 44. 87±2. 96* * * 100. 57±6. 25* * * 124. 39±3. 25* * 73. 39±8. 06* * *
　　( 82. 70) 　　( 63. 88) 　　( 55. 91) 　　( 68. 07)
2. 1×10- 5 81. 36±2. 96* * * 143. 38±4. 96* * * 153. 66±6. 50* * 135. 48±6. 45* * *
　　( 68. 63) 　　( 48. 50) 　　( 45. 53) 　　( 41. 05)
Vit E 5. 8×10- 5 178. 50±1. 97* * * 161. 62±3. 77* * * 181. 30±7. 32* * 164. 52±13. 71* * *
　　( 31. 17) 　　( 41. 95) 　　( 35. 73) 　　( 28. 42)
　　　与 NS比较: * * P< 0. 01;　* * * P < 0. 001;　　(　)内数字为抑制率( % )
表 2　对半胱氨酸和硫酸亚铁激发正常大鼠脏器过氧化脂质生成的影响( x-±s, n= 3)
组别 终浓度
( m ol / L)
丙二醛( nmol /g )
　　心 　　肝 　　脑 　　肾
溶媒对照 - 259. 36±13. 31 278. 42±15. 52 282. 42±15. 52 229. 84±11. 29
Fe2+ -Cys 激发 - 606. 50±28. 11 1 326. 36±27. 5 1 122. 5±35. 83 770. 83±30. 83
CX+ Fe2+ + Cys 1. 89×10- 4 91. 72±3. 45* * 98. 90±20. 44* * * 435. 83±14. 17* * * 109. 17±8. 33* * *
　( 84. 88) 　( 92. 60) 　( 61. 17) 　( 85. 84)
6. 30×10- 5 246. 55±15. 29* * * 287. 55±15. 66* * * 695. 83±51. 67* * * 321. 67±8. 33* * *
　( 59. 35) 　( 78. 36) 　( 38. 01) 　( 158. 27)
2. 10×10- 5 421. 10±2. 47* * * 445. 48±27. 54* * * 898. 33±21. 67* * 355. 75±5. 00* * *
　( 30. 57) 　( 66. 44) 　( 19. 97) 　( 38. 27)
Vit E+ Fe2+ + Cys 5. 80×10- 5 509. 37±2. 47* * 1 120. 00±8. 33* * * 1 006. 67±10. 00* * 612. 50±12. 50* *
　( 16. 01) 　( 15. 56) 　( 10. 32) 　( 20. 54)
　　与 Fe2+ -Cys 激发组比较: * * P < 0. 01　* * * P< 0. 001;　(　)内数字为抑制率( % )
表 3　对硫酸亚铁-Vit C自由基激发系统致大鼠线粒体膨胀的保护作用( x-±s, n= 3)
组别 CX/Vit E浓度
( mol/ L )
A520 nm
　0 m in 　5 min 　10 min 　15 min 20 min 　30 min
正常 - 0. 557±0. 022 0. 508±0. 017 0. 501±0. 020 0. 491±0. 017 0. 486±0. 017 0. 470±0. 023
Fe2+ + Vit C损伤 - 0. 569±0. 011 0. 485±0. 012 0. 411±0. 034* * * 0. 351±0. 016* * * 0. 330±0. 019* * * 0. 317±0. 015* * *
CX+ Vit C+ Fe2+ 3. 79×10- 5 0. 561±0. 039 0. 493±0. 024 0. 480±0. 031 0. 464±0. 025* 0. 447±0. 013* * 0. 424±0. 005* * *
1. 89×10- 5 0. 558±0. 002 0. 484±0. 004 0. 457±0. 006 0. 432±0. 012* * * 0. 409±0. 013* * 0. 388±0. 013* *
9. 40×10- 6 0. 560±0. 017 0. 481±0. 003 0. 438±0. 005 0. 407±0. 010* 0. 387±0. 017* 0. 368±0. 012*
Fe2+ + V it C+ Vit E 5. 50×10- 5 0. 561±0. 014 0. 488±0. 007 0. 440±0. 007 0. 420±0. 011* 0. 403±0. 008* * 0. 376±0. 014* *
　　与 Fe2+ + Vit C损伤组比较: * P< 0. 05　* * P< 0. 01　* * * P< 0. 001
　　表 4　对邻苯三酚自氧化产生 O÷2 的清除作用
( x-±s, n= 3)
组　别 终浓度
( mol /L )
O÷2 生成量
(△A 325/ 10 m in)
抑制率
( % )
溶媒对照组 - 0. 825 0±0. 006 6
CX 1. 8×10- 4 0. 536 7±0. 078 5* * 34. 95
1. 8×10- 5 0. 676 2±0. 008 9* * * 18. 04
Vit E 5. 0×10- 5 0. 687 5±0. 010 9* * * 16. 67
　　与溶媒对照组比较: * * P < 0. 01　* * * P< 0. 001
4　讨论
正常组织匀浆在体外自氧化或受硫酸亚铁-半
胱氨酸激发的氧化反应后, 均可产生丙二醛,使丙二
表 5　对 Cu2+ + Cyt·C自由基发生系统·OH
自由基的清除作用( x-±s, n= 5)
组　别 终浓度
( mol / L)
·OH 浓度
(
m ol/ L)
抑制率
( %)
溶媒对照组 - 2. 95±0. 71 0
CX 9. 47×10- 5 0. 62±0. 76* * 79. 03
4. 73×10- 5 0. 90±1. 00* * 69. 35
Vit E 2. 30×10- 5 1. 29±0. 71* * 56. 45
　　与溶媒对照组比较: * * P< 0. 01
醛生成量增加, 而丙二醛是脂质过氧化反应的终产
物,作为评价脂质过氧化反应强弱的指标,本实验观
察到 CX 可使心、肝、脑、肾的脂质过氧化产物丙二
醛生成量减少,可抑制 Vit C 和 FeSO 4 激发的线粒
·360· 中草药　Chinese T raditional and Herbal Drug s　2000 年第 31卷第 5期
体膨胀,从而进一步证明 CX可抑制脂质过氧化,提
示 CX 可减少氧自由基对生物膜的破坏, 保护机体
各种组织细胞免受氧自由基的损害。
CX能直接清除氧自由基。一般认为, 含酚羟基
的化合物具有明显的清除氧自由基的作用[ 8] , 如
Vit E、苯甲酸、吩噻嗪类等。CX 为黄酮类化合物,其
化学结构与 Vit E 相似, 提示其清除氧自由基的作
用可能与其带有酚羟基团有关。
本实验初步探讨了穿心草口山酮的抗氧化作用,
实验结果提示: 穿心草口山酮具有抗氧化作用, 这种
作用可能与其清除 O÷2 及·OH 有关。
参 考 文 献
1　江苏新医学院编 . 中药大辞典 . 下册 . 上海:上海科学技术出版
社, 1986: 1728
2　钱伯初,等 . 营养学报, 1989, 1( 4) : 355
3　徐叔云主编 . 药理实验方法学 . 北京:人民卫生出版社, 1994:
278, 488
4　王继峰,等 . 药学学报, 1986, 2( 11) : 857
5　徐叔云主编 . 药理实验方法学 . 北京:人民卫生出版社, 1994:
506
6　邹国林,等 . 生物化学与生物物理进展, 1986, 13( 4) : 71
7　王成莲,等 . 生物化学与生物物理进展, 1989, 16( 6) : 473
8　胡瑞芳 . 中国药理学通报, 1993, 9( 1) : 8
( 1999-06-25 收稿)
洁阴宝的药效学实验研究
天津中医学院( 300193)　　王志华
　王慧生　高纪和
摘　要　为阐明洁阴宝的主要功效, 采用常用化学介质组胺使大鼠皮肤毛细血管通透性增强、致痒, 用二甲苯致小
鼠耳肿的方法,观察了洁阴宝对其毛细血管通透性、致痒阈、肿胀度的影响, 并采用平皿打孔法进行了体外抑杀菌
试验。结果表明: 洁阴宝可显著抑制组胺诱发的毛细血管通透性增强, 明显抑制二甲苯所致的耳廓肿胀, 并有较强
的止痒和体外抑杀菌作用。结论: 洁阴宝具有显著的抗炎、消肿、止痒和抑杀菌作用。
关键词　洁阴宝　炎性渗出　消肿　止痒　抑杀菌
　　洁阴宝由丹皮、苦参、金钱草等中草药精制提取
而成纯中药外用制剂, 主要用于外生殖器官炎症的
预防及治疗, 为验证其疗效,我们对洁阴宝的主要药
效学进行了实验研究, 为临床应用提供依据。
1　实验材料
1. 1　药物:洁阴宝原液和稀释液为浅黄色透明液
体,由天津市中医药保健品厂提供,含生药量分别为
25%和 12. 5%, 批号为 960216。洁尔阴,阳性对照
药,成都恩威制药有限公司产品,市售, 9903071。伊
文思蓝,用 1%生理盐水配制。
1. 2　动物: W istar 大鼠、昆明种小鼠, 均由天津市
动物实验中心提供, 天津中医学院医学动物实验中
心正常饲养 3 d后供用。
1. 3　器材及仪器: 721分光光度计,上海分析仪器
厂产品;离心机, 北京医疗器械厂产品; AT B细菌鉴
定仪,法国梅里埃公司产品。
1. 4　实验用菌种:铜绿假单胞菌( 27853)、大肠埃希
菌( 25922)、金黄色葡萄球菌( 25923)购自天津市临
床检验中心; 白色念珠菌、链球菌、产气杆菌、霉菌来
自临床标本, 经法国梅里埃公司 AT B 细菌鉴定仪
鉴定菌种。
2　方法与结果
2. 1　对大鼠皮肤毛细血管通透性的影响 [ 1] : 取大鼠
40 只,体重 165～210 g ,按体重随机分为 4 组,雌雄
各半,将大鼠背部毛除净,面积 4 cm×4 cm, 给药组
每天 1 次分别涂抹 25%、12. 5%洁阴宝 0. 2 mL/
100 g 体重,阳性对照药涂抹洁尔阴 0. 2 mL/ 100 g
体重,空白对照组涂抹等量蒸馏水,连续 5 d, 末次给
药 1 h 后,每只鼠 sc 0. 1%磷酸组胺 0. 1 mL 于涂药
部位,然后立即用伊文思蓝生理盐水 0. 4 mL/ 100 g
尾 iv , 20 min 后断头处死,剥皮测量着色皮斑面积,
然后用 2 cm 直径打孔器打下剪碎, 放入丙酮-生理
盐水混合液( 7∶3) 4 mL 浸泡 48 h, 3 000 r / min 离
心 10 m in, 取上清液 2 mL, 721分光光度计 590 nm
波长比色,记录吸光度, 用 t 检验进行统计学处理。
结果表明洁阴宝对大鼠 sc 磷酸组胺诱发毛细血管
通透性增加有明显的抑制作用,洁阴宝各组与空白
对照组相比P< 0. 01(表 1)。
2. 2　对小鼠二甲苯所致耳廓肿胀作用的影响 [ 2] : 取
小鼠 40只,体重 18～22 g ,雌雄各半。按体重随机分
·361·中草药　Chinese T raditional and Herbal Drug s　2000 年第 31卷第 5期

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